SSR法鑒定水稻兩系雜交種純度的運(yùn)用與探討Ⅲ兩個(gè)形態(tài)學(xué)差異較大的品種間摻雜回收試驗(yàn).doc

SSR法鑒定水稻兩系雜交種純度的運(yùn)用與探討。兩個(gè)形態(tài)學(xué)差異較大的品種間摻雜回收試驗(yàn)摘要：在兩系雜交稻兩優(yōu)培九的大群體田間純度鑒定中，定向摻入形態(tài)學(xué)差異較大的兩系雜交稻新兩優(yōu)，逐株抽取田間植株葉片樣品，運(yùn)用法進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，運(yùn)用法能夠準(zhǔn)確地檢測出摻入的新兩優(yōu)。在室內(nèi)檢測的譜帶中發(fā)現(xiàn)，新兩優(yōu)的帶型與兩優(yōu)培九不育系帶型的位置相同。關(guān)鍵詞：兩系雜交稻；大群體；摻雜回收；帶型比對 ： ： ； ； ； 由于提取方法的簡化、瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)的運(yùn)用，以及分子標(biāo)記鑒定兩系雜交水稻種子純度具有快速、重復(fù)性好、多態(tài)性高等優(yōu)點(diǎn)，使得法成為目前室內(nèi)鑒定兩系雜交水稻種子純度時(shí)應(yīng)用最為廣泛的分子標(biāo)記方法。但是瓊脂糖凝膠電泳成像的譜帶分辨率低，信息量不充分，譜帶的主帶一般表現(xiàn)為不育系、恢復(fù)系和雜交種種類型，不能區(qū)分不同的雜株類型。為驗(yàn)證該方法的可靠性和準(zhǔn)確性，前人的研究一般是在鑒定時(shí)，采取人為在鑒定樣品中摻入該組合的恢復(fù)系、保持系、不育系的方法來檢驗(yàn)。但在田間正季種植鑒定條件下，用兩系雜交水稻種子大群體定位摻雜回收，且對摻入的雜交種子雜株譜帶特征的研究目前鮮有報(bào)道。此次研究的目的在于了解單對引物對親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的品種的識(shí)別率，驗(yàn)證單對引物法測定親緣較遠(yuǎn)的兩系雜交水稻種子純度的準(zhǔn)確性和可靠性，同時(shí)探討樣品中混入其他雜交種的譜帶特征。 材料與方法 材料試驗(yàn)材料是在通過系譜比較后，選用遺傳背景不同、親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的兩優(yōu)培九（培矮）和新兩優(yōu)（）兩個(gè)品種。這兩個(gè)品種由荊州市種子管理局從市場上抽取商品種子，并經(jīng)生產(chǎn)企業(yè)確認(rèn)。所用引物及試劑均由北京鼎國生物有限公司提供。 反應(yīng)體系擴(kuò)增反應(yīng)總體積： ， ， ， 酶， ， 。反應(yīng)條件為：預(yù)變性；然后進(jìn)行個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增，循環(huán)參數(shù)為、，、，、；最后在下延伸。擴(kuò)增產(chǎn)物在含的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳后，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)觀察記錄。 摻雜和抽樣方法試驗(yàn)于年月日播種，月日移栽。小區(qū)單本栽植株苗，行，每行株，行距，株距。每個(gè)植株用位數(shù)編號(hào)，前兩位數(shù)表示所在的行數(shù)，后兩位數(shù)表示所在行的位置，例如表示第行的第株。在兩優(yōu)培九田間鑒定移栽時(shí)，每隔9株混栽株新兩優(yōu)。兩個(gè)品種之間的植株特征特性差別較大，易于田間識(shí)別（表）；同時(shí)兩個(gè)品種之間的遺傳背景差異較大，易于室內(nèi)檢出。返青后按對應(yīng)編號(hào)采取田間各植株的倒二葉葉片，用對兩優(yōu)培九進(jìn)行室內(nèi)分子檢測，為了防止人為因素干擾，試驗(yàn)過程中將摻雜、田間鑒定和室內(nèi)檢測的操作分別由批不同的專業(yè)人員獨(dú)立完成。 結(jié)果比對在抽穗前及齊穗后分兩次按 進(jìn)行田間純度鑒定，并將田間結(jié)果與室內(nèi)法的純度檢出結(jié)果進(jìn)行比對，驗(yàn)證室內(nèi)與田間結(jié)果的一致性。 結(jié)果與分析 混入的雜株田間和室內(nèi)鑒定結(jié)果室內(nèi)法將小區(qū)的所有植株都抽樣檢測，共檢出雜株株，其中摻入的新兩優(yōu)共株，樣品自有雜株株，摻入株的檢出率為。摻入的新兩優(yōu)譜帶特征如圖所示。從表中可見，兩優(yōu)培九田間鑒定中，共發(fā)現(xiàn)雜株株，其中摻入的新兩優(yōu)共株，樣品自有雜株株，摻入株的檢出率為。 雜株譜帶與兩優(yōu)培九及其親本的譜帶比較引物篩選時(shí)，兩優(yōu)培九的不育系帶型在雜交種互補(bǔ)帶型的下方，恢復(fù)系帶型在雜交種互補(bǔ)帶型的上方。摻入的新兩優(yōu)的帶型均在互補(bǔ)帶型的下方，與兩優(yōu)培九不育系的譜帶位置相同。 小結(jié)與討論研究表明，應(yīng)用法對兩系種子純度進(jìn)行鑒定時(shí)，雖能準(zhǔn)確地把摻入的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的其他兩系雜交稻品種識(shí)別出來，但不能僅根據(jù)室內(nèi)法電泳得到的雜株譜帶類型簡單地推斷其田間形態(tài)為不育系或恢復(fù)系類型雜株，必須進(jìn)行田間比對才能作出準(zhǔn)確判斷。結(jié)合文獻(xiàn)的結(jié)論可以看出，對特定品種及適宜的引物而言，如果田間雜株為真實(shí)的不育系或恢復(fù)系，法的譜帶一定為不育系或恢復(fù)系的特征譜帶，反之，如果譜帶表現(xiàn)為不育系或恢復(fù)系的特征譜帶，植株田間表現(xiàn)型并不一定是不育系或恢復(fù)系。對與親緣關(guān)系較近的品種，因?yàn)橛H本間遺傳差異較小，而法標(biāo)記的是一些無意義的重復(fù)序列，這些片段很可能都會(huì)在親緣關(guān)系較近的品種中普遍存在，從而使親緣關(guān)系較近但田間表現(xiàn)型差異明顯的品種顯示出相同的帶譜，從而產(chǎn)生種子純度誤判風(fēng)險(xiǎn)，這方面還需進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：辛業(yè)蕓，張 展，熊易平，等應(yīng)用分子標(biāo)記鑒定超級(jí)雜交水稻組合及其純度中國水稻科學(xué)，（）：馬秀芳，華澤田，隋國民，等利用微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定北方雜交粳稻種子純度的研究雜交水稻，（）：黃成志，黃文章，嚴(yán)明建，等利用分子標(biāo)記鑒定雜交水稻真?zhèn)闻c純度安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，（）： 譚智丹，余顯權(quán)，高健強(qiáng)，等利用鑒定雜交水稻種子純度的研究種子，（）： 劉之熙，陳祖武，朱克永，等利用分子標(biāo)記快速鑒定雜交水稻種子純度技術(shù)體系的優(yōu)化雜交水稻，（）： 樊葉楊，莊杰云應(yīng)用微衛(wèi)星標(biāo)記鑒別水稻秈粳亞種遺傳，（）： 李穩(wěn)香，詹慶才雜交水稻種子純度指紋圖譜標(biāo)記鑒定技術(shù)研究中國種業(yè)，（）： 詹慶才利用微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行雜交水稻種子純度鑒定的研究雜交水稻，（）： 薛燦輝，朱克永，陳祖武，等利用微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定金優(yōu)雜種純度技術(shù)研究湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，（）： 金偉棟，洪德林雜交水稻品種純度鑒定研究進(jìn)展種子，（）： 陳兆貴，梁展鵬雜交水稻種子純度分子鑒定技術(shù)研究中國種業(yè)，（）： 張 輝，姜 勇雜交水稻品種鑒定和純度分析技術(shù)研究進(jìn)展