獸醫(yī)本科論文.doc

本本科科畢畢業(yè)業(yè)論論文文 不同廠家禽流感疫苗免疫效果比較 Compare the effects of several avian influenza vaccines from different companies 學(xué) 院 獸醫(yī)學(xué)院 專 業(yè) 動物醫(yī)學(xué) 姓 名 包 雙 福 學(xué) 號 080110402 指導(dǎo)教師 祁 生 旺 職 稱 副 教 授 論文完成日期 二 一二年六月 摘摘 要要 本試驗采用遼寧益康 哈藥廣為 青島易邦 肇慶大華農(nóng)四家公司生產(chǎn)的禽流感 Re 4 株 Re 5 株二價滅活疫苗對大風(fēng)公司大廠一場種雞場的 220 只雞進(jìn)行分組免疫 試驗雞分別于免疫前 一免后 20d 30d 二免后 10d 60d 二免后 40d 進(jìn)行采血 用血凝和血凝抑制試驗檢測免疫抗體水平 結(jié)果表明 四個廠家禽流感 Re 4 株 Re 5 株二價滅活疫苗免疫后均未出現(xiàn)疫苗反應(yīng) 總體免疫合格率均高于國家標(biāo)準(zhǔn) 關(guān)鍵詞 禽流感 疫苗 免疫效果 Abstract In this experiment 220 chickens were divided into several groups and immunized with avian influenza vaccines produced by Liaoning yikang Hayao guangwei Qingdao yibang and ZhaoqingDahua nongsheng respectively Serum were collected at 20d 30d and 60d post immunization and the swine fever virus antibodies were detected by test Results showed that the four kinds of vaccines are safety no side affect was observed during the immunization time and the passing rate of the four vaccines are higher that the national standards Key words Avian influenza Vaccine Immunization 目 錄 1 前言 1 1 1 病原 1 1 1 1 流感病毒的分類 1 1 1 2 流感病毒的形態(tài) 1 1 1 3 流感病毒的抗原型 1 1 2 流行病學(xué) 1 1 3 臨床癥狀 2 1 4 病理變化 2 1 5 診斷 2 1 5 1 臨診診斷 2 1 5 2 鑒別診斷 2 1 5 3 實驗室診斷 2 1 6 目前的防制措施 3 1 6 1 平時的預(yù)防措施 3 1 6 2 發(fā)病時的緊急措施 3 1 7 常用疫苗 3 1 8 本研究的目的與意義 3 2 材料與方法 4 2 1 材料 4 2 1 1 試驗動物 4 2 1 2 禽流感疫苗 4 2 1 3 器材藥品準(zhǔn)備 4 2 1 4 HA 和 HI 試驗用溶液的配制 5 2 2 試驗方法 5 2 2 1 雞的分組與免疫 5 2 2 2 抗體檢測 5 2 2 3 試驗步驟 5 3 結(jié)果 6 3 1 疫苗免疫反應(yīng)結(jié)果 6 3 2 不同廠家禽流感疫苗免疫后抗體檢測結(jié)果 7 4 討論與小結(jié) 7 4 1 討論 7 4 2 小結(jié) 8 4 3 建議及注意 8 參 考 文 獻(xiàn) 8 致 謝 9 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 1 1 前言 禽流感 Avian Influenza AI 又稱歐洲雞瘟 真性雞瘟 是由正粘病毒科 流感病毒屬 A 型流感病毒引起的禽類感染和 或疾病綜合癥 現(xiàn)在在全世界各種家 禽和野生禽類中 已發(fā)現(xiàn)了上千種屬于不同抗原亞型的流感病毒 更為甚者是在短 短的幾年時間里 先后發(fā)生禽流感 H5N1 H7N7 H9N2 病毒跨越種屬屏障直接感染人 類的病例 引起世界各地流感專家們的高度關(guān)注 雖然目前還沒有發(fā)現(xiàn)禽流感 H5N1 H7N7 H9N2 病毒具有人傳人的能力 但它們均屬甲型流感病毒 而甲型流感 病毒變異性非常大 就有可能通過抗原變異或通過與人流感病毒發(fā)生基因重配 形 成重配株 從而具備人傳人的能力 因此 禽流感給人類帶來了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn) 它具 有極其重要的公共衛(wèi)生意義 1 1 病原 1 1 1 流感病毒的分類 禽流感的病原為禽流感病毒 分類屬于正粘病毒科 根據(jù)病原核蛋白 NP 和膜蛋白 MP 抗原及其基因特性的不同將流感病毒分為A B C 三型 A 型流感病毒可引起人和動物發(fā)生流感 常以流行形式出現(xiàn) 引起世界性流感大 流行 在動物中廣泛存在 也可能引起大批動物死亡 B 型和 C 型流感病毒主要 引起人發(fā)生流感 1 1 2 流感病毒的形態(tài) 流感病毒呈多形性絲狀或球狀 直徑 80 120nm 核衣殼為螺旋對稱 核酸 類型為單股負(fù)鏈 RNA 其 RNA 鏈由 8 個節(jié)段構(gòu)成 病毒粒子外有囊膜 囊膜上有 呈輻射狀排列的兩種纖突 一是血凝素 HA 另一是神經(jīng)氨酸酶 NA 是流感 病毒主要的表面抗原 1 1 3 流感病毒的抗原型 A 型流感病毒根據(jù)血凝素 H 和神經(jīng)氨酸酶 N 結(jié)構(gòu)不同分成許多亞型 血凝 素 H 有 15 個亞型 H1 H15 神經(jīng)氨酸酶 N 有 9 個亞型 N1 N9 它們之間 的不同組合 使 A 型流感病毒有許多亞型 如 H1N1 H2N2 H2N1 H1N2 等 理論上可產(chǎn)生不同的 135 種病毒亞型 各亞型之間無交互免疫力 1 2 流行病學(xué) 傳染源主要為患禽流感或攜帶禽流感病毒的家禽 另外野禽或豬也可成為 傳染源 許多家禽都可感染病毒發(fā)病 活雞 雞 鴿子 珍珠雞 鵪鶉 鸚鵡等 陸禽都可感染發(fā)病 但以 活雞和雞最為易感 發(fā)病率和死亡率都很高 鴨和鵝等 水禽也易感染 并可帶毒或隱性感染 有時也會大量死亡 各種日齡的雞和活 雞都可感染發(fā)病死亡 而對于水禽如雛鴨 雛鵝其死亡率較高 發(fā)病季節(jié) 禽 流感一年四季均可發(fā)生 但多爆發(fā)于冬 春季節(jié) 尤其是秋冬 冬春之交 氣候 變化大的時期 一般情況下夏季發(fā)病較少 多是零星發(fā)生 發(fā)病雞群的癥狀也較 輕 傳染途徑 禽流感主演通過橫向轉(zhuǎn)播 即通過易感禽類直接接觸或與病毒污 染物 如被污染的飲食 飛沫 飼料及其他被污染的筐 蛋盤 運輸工具等 病 毒污染的羽毛和糞便是主要傳染物 因為病毒含量高而且存活時間長 應(yīng)特別注 意 1 3 臨床癥狀 各種日齡和品種的雞均可發(fā)病 潛伏期短 病雞發(fā)病急 舍內(nèi)傳播迅速 但傳 播范圍往往不大 流行初期的急性病例 可不出現(xiàn)任何癥狀而死亡 病雞表現(xiàn)為 體溫升高 羽毛逆立 頭臉部水腫 流淚 分泌物增多 冠及肉髯腫脹 邊緣出血 2 不同廠家禽流感疫苗免疫效果比較 壞死呈紫黑色 伴有不同程度的呼吸系統(tǒng)疾病癥狀 出現(xiàn)或不出現(xiàn)下痢 下痢以黃 綠色 綠色 稀便為主 后趾趾部鱗片有紫黑色出血 產(chǎn)蛋量明顯下降 病雞震顫 扭頸 1 4 病理變化 最急性死亡的病雞常無眼觀變化 急性者可見頭部和顏面浮腫 雞冠 肉髯腫 大達(dá) 3 倍以上 皮下有黃色膠樣浸潤 出血 胸 腹部脂肪有紫紅色出血斑 心包 積水 心外膜有點狀或條紋狀壞死 心肌軟化 病雞腿部肌肉出血 有出血點或出血 斑 消化道變化表現(xiàn)為腺胃乳頭水腫 出血 肌胃角質(zhì)層下出血 肌胃與腺胃交界 處呈帶狀或環(huán)狀出血 十二指腸 盲腸扁桃體 泄殖腔充血 出血 肝 脾 腎臟 瘀血腫大 有白色小塊壞死 呼吸道有大量炎性分泌物或黃白色干酪樣壞死 胸腺 萎縮 有程度不同的點 斑狀出血 法氏囊萎縮或呈黃色水腫 有充血 出血 母 雞卵泡充血 出血 卵黃液變稀薄 嚴(yán)重者卵泡破裂 卵黃散落到腹腔中 形成卵 黃性腹膜炎 腹腔中充滿稀薄的卵黃 輸卵管水腫 充血 內(nèi)有漿液性 粘液性或 干酪樣物質(zhì) 公雞睪丸變性壞死 1 5 診斷 1 5 1 臨診診斷 根據(jù)本病的流行病學(xué) 臨診癥狀和病理變化可作出初步診斷 1 5 2 鑒別診斷 應(yīng)與雞新城疫 禽霍亂 傳染性支氣管炎 傳染性喉氣管炎等病作鑒別診斷 1 5 3 實驗室診斷 確診應(yīng)進(jìn)行實驗室診斷 從病毒分離 血清抗體 病毒抗原檢測等方面進(jìn)行檢測 1 病毒分離 在發(fā)熱初期采取呼吸道分泌物 或用滅菌棉棒擦拭鼻咽部分泌 物 泄殖腔 發(fā)病動物的實質(zhì)臟器 經(jīng)常規(guī)方法處理后 接種于 9 11 天的雞胚尿 囊腔內(nèi) 培養(yǎng) 5 天后 取尿囊液作血凝試驗 陽性則證明有病毒繁殖 再以此材料 作補(bǔ)體結(jié)合試驗 決定型 和血凝抑制試驗 決定亞型 進(jìn)行病毒鑒定 2 血清抗體檢測 用血凝抑制試驗 瓊脂擴(kuò)散試驗 ELISA 斑點法 ELISA 補(bǔ)體結(jié)合試驗 中和試驗等 3 病毒抗原檢測 取病雞組織制成切片或涂片 用熒光抗體法或酶標(biāo)組化法 檢測病料組織中的病毒抗原 4 分子生物學(xué)診斷方法 RT PCR 方法檢測禽流感病毒 4 小時檢出結(jié)果 H5 型禽 流感病毒檢測箱采用基因方法 5 小時測出病毒基因 也可核酸探針技術(shù)進(jìn)行檢測 禽流感病毒 1 6 目前的防制措施 1 6 1 平時的預(yù)防措施 1 無病地區(qū) 應(yīng)加強(qiáng)檢疫 禁止從發(fā)病地區(qū)輸入可能為病毒潛在來源的動物 及未經(jīng)無害化處理的畜產(chǎn)品 2 避免雞群與野鳥 水禽 海鳥接觸 建立雞場應(yīng)遠(yuǎn)離遷徙性水禽 海鳥的 水源地 3 加強(qiáng)獸醫(yī)衛(wèi)生管理措施 無關(guān)人員不得進(jìn)出養(yǎng)禽場 人員進(jìn)出養(yǎng)禽場應(yīng)消 毒 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 3 4 免疫預(yù)防 使用與當(dāng)?shù)亓餍卸局甓拘拖嗤囊呙邕M(jìn)行免疫接種 我國現(xiàn)有 H5 H7 H9 亞型的滅活苗 如果病毒亞型相同 效果良好 1 6 2 發(fā)病時的緊急措施 1 發(fā)生本病時 及時發(fā)現(xiàn) 上報疫情 封鎖疫區(qū) 并通知鄰近地區(qū)做好防疫工 作 2 消滅傳染源 撲殺疫區(qū)內(nèi)所有易感動物 焚燒或掩埋禽類尸體及污染物 3 切斷傳播途經(jīng) 徹底消毒污染的禽舍 環(huán)境 停止易感動物流通 進(jìn)出疫 區(qū)要消毒 4 緊急免疫接種 使用與當(dāng)?shù)亓餍卸局甓拘拖嗤囊呙邕M(jìn)行免疫接種 建立 免疫帶 5 疫區(qū)內(nèi)最后一只病禽消失后 21 天內(nèi) 無新病例發(fā)生 進(jìn)行徹底的終末消毒 解除封鎖 1 7 常用疫苗 禽流感 H5 H9 二價滅活疫苗 H5H1 Re 1 H9N2 Re 2 株 蛋雞和種雞等 家禽須分別免疫 H5N1 和 H9N2 亞型禽流感滅 活疫苗 該疫苗的禽流感病毒 H5N1 亞型 Re 1 株和 H9N2 亞型 Re 2 株種毒都是人工重組構(gòu)建的 種毒的效價高 針 對性強(qiáng) 疫苗免疫效果好 重組禽流感病毒H5 亞型二價滅活疫苗 H5N1 Re 5 株 Re 4 株 疫苗中含滅活的重組禽流感病毒 H5N1 亞型 Re 5 株 滅活前 Re 5 株雞胚液 HA 效價 9log2 Re 4 株雞胚液 HA 效價 8log2 乳白色乳劑 用于 預(yù)防由 H5 亞型禽流感病毒引起的禽流感 胸部肌肉或頸部皮下注射 2 5 周 齡雞 每只 0 3 ml 5 周齡以上雞 每只 0 5 ml 一般無可見的不良反應(yīng) 寧夏 山西 陜西 河南 河北 山東 北京 天津 內(nèi)蒙古 遼寧 江蘇 浙江 上 海 安徽受變異毒株威脅區(qū)使用重組禽流感病毒H5 亞型二價滅活疫苗 H5N1 Re 5 Re 4 株 或選擇使用禽流感滅活疫苗 H5N1 Re 5 株 禽流 感滅活疫苗 H5N1 Re 4 株 進(jìn)行免疫 水禽使用禽流感滅活疫苗 H5N1 Re 5 株 進(jìn)行免疫 其他地區(qū)根據(jù)檢測情況 可使用變異毒株疫苗進(jìn)行 免疫 報獸醫(yī)局備案 1 8 本研究的目的與意義 我國于 1994 年首次在廣東省的發(fā)病雞群中分離到禽流感病毒 其后在 20 多個 省市的雞群和鴨群中流行并引起發(fā)病 給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失 H5N1 亞型 禽流感的暴發(fā)給世界養(yǎng)禽業(yè)造成毀滅性打擊 而且具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義 自 2003 年年底韓國首次暴發(fā)高致病性禽流感以來 2004 年 1 月 疫情迅速在東 亞 東南亞和南亞地區(qū)蔓延 韓國 越南 日本 中國臺灣 泰國 柬埔寨 印度 尼西亞 中國香港 巴基斯坦 中國和老撾相繼報告發(fā)生高禽流感 除中國臺灣省 為 H5N2 型 巴基斯坦為 H7 型低致病性禽流感以外 其余國家和地區(qū)均為 H5N1 型 高致病性禽流感 截至 2004 年 10 月 4 日 越南和泰國共發(fā)現(xiàn)人禽流感患者 43 例 其 中 31 例死亡 2004 年 中國大陸發(fā)生疫情后 中國政府高度重視 采取了對疫區(qū)周邊受威 脅區(qū) 邊境地區(qū)家禽進(jìn)行緊急免疫 撲殺疫區(qū)內(nèi)所有家禽等防控措施 有效控制了 疫情 疫區(qū)人民生產(chǎn)生活秩序良好 目前 中國實施積極的禽流感免疫政策 對全 國所有家禽 包括種用 蛋用 肉用的雞 鴨 鵝 家禽以及飼養(yǎng)的鴿子 鵪鶉 鴕鳥 雉雞等進(jìn)行強(qiáng)制免疫 對防疫條件好 進(jìn)口國有要求的出口企業(yè)及提供研究 4 不同廠家禽流感疫苗免疫效果比較 和疫苗生產(chǎn)用途的家禽 經(jīng)中國省級獸醫(yī)行政管理部門批準(zhǔn) 可以不進(jìn)行免疫 中 國沒有對野禽進(jìn)行禽流感免疫 2006 年 1 9 月 中國內(nèi)地免疫家禽 82 億羽 根據(jù) 當(dāng)前全球和國內(nèi)禽流感形勢 中國將繼續(xù)實行高致病性禽流感全面免疫政策 近幾年國內(nèi)普遍流行禽流感 主要防控措施是強(qiáng)制免疫 目前有很多種禽流感 疫苗 為了做多種疫苗的免疫效果比較 我們用來自不同廠家的四個疫苗來免疫 然后用血凝和血凝抑制試驗檢測抗體效價 從而選出免疫效果較好 適合當(dāng)?shù)厥褂?的疫苗進(jìn)行免疫接種防止禽流感的流行 本人在大風(fēng)公司實習(xí)期間參與這一研究工 作 現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下 2 材料與方法 2 1材料 2 1 1試驗動物 20 25 日齡雞 220 只 由大風(fēng)公司大廠一場種雞場提供 將試驗雞隨機(jī)分為五 組 1 4 為試驗組 每組 50 只雞 第五組為對照組 20 只雞 2 1 2禽流感疫苗 遼寧益康生物制品有限公司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗 H5N1 Re 5 株 Re 4株 批號2110104 哈藥集團(tuán)廣為生物疫苗有限公司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗 H5N1 Re 5株 Re 4株 批號201041 肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗 H5N1 Re 5株 Re 4株 批號 010327 青島易邦生物工程有限公司 禽流感 H5N1 Re 5株 Re 4株 二價滅活疫苗 批 號2010100 2 1 3器材藥品準(zhǔn)備 96 孔 V 型微量反應(yīng)板 微量移液器 配有滴頭 阿氏 Alsevers 液 1 雞 紅細(xì)胞懸液 配制方法見附錄 pH7 2 0 01mol L PBS 高致病性禽流感病毒血 凝分型抗原和標(biāo)準(zhǔn)分型血清以及陰性血清等由內(nèi)蒙古動物疫病預(yù)防控制中心提供 2 1 4 HA 和 HI 試驗用溶液的配制 1 阿氏 Alsevers 液配制 葡萄糖 2 05g 檸檬酸鈉 0 8g 檸檬酸 0 055g 氯化鈉 0 42g 加蒸餾水至 100mL 散熱溶解后調(diào) pH 值至 6 1 69kPa 15min 高壓滅菌 4 保存?zhèn)溆?2 1 雞紅細(xì)胞懸液制備 采集至少 3 只 SPF 公雞或無禽流感和新城疫等抗體的健康公雞的血液與等體 積阿氏液混合 用 pH7 2 0 01mol PBS 液洗滌 3 次 每次均以 1000r min 離心 10min 洗滌后用 PBS 配成體積分?jǐn)?shù)為 1 紅細(xì)胞懸液 4 保存?zhèn)溆?3 PBS 配制方法 2 2試驗方法 2 2 1雞的分組與免疫 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 5 試驗組分成 5 組 試驗一組為遼寧益康疫苗免疫 50 只 試驗二組用哈藥廣疫苗 免疫 50 只 疫苗免疫 50 只 第三組為青島易邦疫苗免疫 50 只 第四組為肇慶大華農(nóng)的疫苗免 疫 50 只 第五組為空白對照組 20 只 對疫苗組試驗動物分別按照疫苗說明書劑量 進(jìn)行免疫注射 一免后 20d 補(bǔ)免 采血分離血清監(jiān)測抗體效價 2 2 2 抗體檢測 2 2 2 1 采血與分離血清 試驗雞分別于免疫前 一免后 20d 30d 二免后 10d 60d 二免后 40d 從 5 組雞隨機(jī)抓 10 只的翅靜脈采血并進(jìn)行分離血清 2 2 2 2 抗體檢測 用血凝和血凝抑制試驗檢測抗體效價 2 2 3 試驗步驟 血凝 HA 試驗 微量法 1 在微量反應(yīng)板的 1 孔 12 孔均加入 0 025mL PBS 2 吸取 0 025mL 病毒懸液 如感染性雞胚尿囊液 加入第 1 孔 混勻 3 從第 1 孔吸取 0 025mL 病毒液加入第 2 孔 混勻后吸取 0 025mL 加入第 3 孔 如此進(jìn)行對倍稀釋至第 11 孔 從第 11 孔吸取 0 025mL 棄之 換滴頭 4 每孔再加入 0 025mL PBS 5 每孔均加入 0 025mL 體積分?jǐn)?shù)為 1 雞紅細(xì)胞懸液 將雞紅細(xì)胞懸液充分 搖勻后加入 6 振蕩混勻 在室溫 20 25 下靜置 40min 后觀察結(jié)果 如果環(huán)境溫 度太高 可置 4 環(huán)境下 對照孔紅細(xì)胞將成明顯的紐扣狀沉到孔底 7 結(jié)果判定 將板傾斜 觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌 完全血凝 不流淌 的抗原或病毒最高稀釋倍數(shù)代表一個血凝單位 HAU 血凝抑制 HI 試驗 微量法 1 根據(jù) 1 2 1 試驗結(jié)果配置 4HAU 的病毒抗原 以完全血凝的病毒最高倍數(shù) 作為終點 終點稀釋倍數(shù)除以 4 即為含 4HAU 的抗原的稀釋倍數(shù) 例如 如果血凝 的終點滴度為 1 256 則 4HAU 抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是 1 64 256 除以 4 2 在微量反應(yīng)板的 1 孔 11 孔加入 0 025mL PBS 第 12 孔加入 0 05mL PBS 3 吸取 0 025mL 血清加入第 1 孔內(nèi) 充分混勻后吸取 0 025mL 于第 2 孔 依次對倍稀釋至第 10 孔 從第 10 孔吸取 0 025mL 棄去 4 1 孔 11 孔均加入 4HAU 混勻的病毒抗原液 0 025mL 室溫 約 20 靜 置至少 30min 5 每孔加入 0 025mL 體積分?jǐn)?shù)為 1 的雞紅細(xì)胞懸液混勻 輕輕混勻 靜 置約 40min 室溫約 20 如環(huán)境溫度太高可置 4 條件下進(jìn)行 對照紅細(xì)胞將 呈現(xiàn)紐扣狀沉于孔底 6 結(jié)果判定 以完全抑制 4 個 HAU 抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為 HI 滴度 只有陰性對照孔血清滴度不大于 2 2 陽性對照孔血清誤差不超過 1 個滴度 試驗結(jié)果才有效 HI 價小于或等于 3 2判定 HI 試驗陰性 HI 價等于 4 2為可疑 需重復(fù)試驗 HI 價大于或等于 5 2為陽性 3 結(jié)果 6 不同廠家禽流感疫苗免疫效果比較 3 1疫苗免疫反應(yīng)結(jié)果 經(jīng)試驗雞臨床免疫 共計免疫雞 220 只 無其它不良反應(yīng) 未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 4 株抗體效價結(jié)果如表 1 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 5 株抗體效價結(jié)果如表 2 表 1 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 4 株抗體效價 log2 免疫前 20d30d60d 哈藥 0888 青島 07 97 87 5 大華農(nóng) 087 57 遼寧 07 97 26 4 對照 0000 表 2 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 5 株抗體效價 log2 免疫前 20d30d60d 哈藥 0888 青島 087 47 大華農(nóng) 087 16 8 遼寧 07 76 75 4 對照 0000 3 2 不同廠家禽流感疫苗免疫后抗體檢測結(jié)果 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 4 株抗體效價和抗體消長情況結(jié)果如圖 1 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 5 株抗體效價和抗體消長情況結(jié)果如圖 2 表1 不同廠家禽流感疫苗免疫后Re 4株抗體效價 log2 0 2 4 6 8 10 免疫前20d30d 60d 哈藥青島大華農(nóng)遼寧對照 圖 1 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 4 株抗體消長情況 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 7 H5亞型禽流感 Re 5株 免疫抗體消長情況 0 2 4 6 8 10 免疫前20d30d60d 哈藥青島大華農(nóng)遼寧對照 圖 2 不同廠家禽流感疫苗免疫后 Re 5 株抗體消長情況 4 討論與小結(jié) 4 1 討論 四個不同廠家生產(chǎn)的禽流感二價滅活疫苗免疫雞均無引起不良免疫反應(yīng) 四個 廠家的禽流感疫苗免疫后 20d 60d 均能達(dá)到很高的免疫抗體水平 但是遼寧益康生 產(chǎn)的禽流感二價滅活疫苗免疫總體抗體水平略低于其它三個廠家 4 2 小結(jié) 遼寧益康組免疫雞禽流感母源 Re 4 株及 Re 5 株抗體均為零 20d 30d Re 4 株和 Re 5 株抗體全部達(dá)到 1 128 以上 60d Re 4 株抗體有所下降 全部抗體均達(dá) 到 1 16 以上 效價從 1 16 到 1 128 均有 Re 5 株抗體也有所下降 全部抗體均達(dá) 到 1 16 以上 哈藥廣為疫苗組免疫雞禽流感母源 Re 4 株及 Re 5 株抗體均為零 20d 30d 和 60d Re 4 株和 Re 5 株抗體均達(dá)到 1 128 以上 青島易邦疫苗組免疫雞 禽流感母源 Re 4 株及 Re 5 株抗體均為零 20d 30d 和 60d Re 4 株和 Re 5 株抗體 抗體均達(dá)到 1 128 以上 肇慶大華農(nóng)疫苗組免疫雞禽流感母源 Re 4 株及 Re 5 株抗 體均為零 20d 30d 和 60d Re 4 株和 Re 5 株抗體均達(dá)到 1 128 以上 說明四個 不同廠家生產(chǎn)的口蹄疫疫苗免疫效果不一樣 其中遼寧益康疫苗免疫效果最差 4 3 建議及注意 為了準(zhǔn)確進(jìn)行免疫效果監(jiān)測應(yīng)注意一下幾點 合理選擇抗原和對照陽性血 清 針對 Re 1 和 Re 4 株疫苗免疫采用抗原和對照陽性血清 同一亞型的禽流感 病毒制成的抗原 如果毒株來源不同 則可能會存在抗原性差異 從而使檢測同 一血清的結(jié)果有差別 一般來講 免疫種毒株如果與抗原所用毒株相同時 則所 測得 HI 效價較高 合理使用和保存抗原 反應(yīng)試劑按規(guī)定保存和使用 凍干 的試劑應(yīng)按照說明中規(guī)定的體積重新溶解并保存 要避免雜菌污染 因為污染所 造成的非流感起源的凝集素也可與所有抗血清發(fā)生非特異反應(yīng) 為避免反復(fù)凍融 和細(xì)菌污染 要無菌操作將試劑分裝成小包裝 反應(yīng)溫度應(yīng)控制在 15 30 之間 太高或太低均會影響檢測結(jié)果 掌握好孵育時間 本操作中 HA 和 HI 試驗中加入紅細(xì)胞后的作用時間均為 40min 主要是參照 OIE 標(biāo)準(zhǔn) 在一些病毒 株中可見紅細(xì)胞從病毒中解脫 如果有這種情況發(fā)生 要提前判定 約 8 不同廠家禽流感疫苗免疫效果比較 25 30min 或 4 下孵育 一般來講 主要看紅細(xì)胞對照孔 對照完全沉淀時要 迅速判讀 標(biāo)準(zhǔn)抗原稀釋濃度必須為 4 個 HA 單位 25 L 必須每天制備并在 試驗前滴定 紅細(xì)胞懸液要始終符合標(biāo)準(zhǔn) 使用時應(yīng)隨時振蕩 稀釋液應(yīng) 選用 PBS 反應(yīng)體系為 0 075ml 每次試驗時均應(yīng)設(shè)陽性血清對照 陽性對照 孔血清誤差不超過 1 個滴度 試驗結(jié)果才有效 標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的HI 效價可由本 實驗室判定 具體操作可在購進(jìn)一批抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽性血清以后 取幾瓶血清 溶 解到一起 分成小包裝 70 無條件者可用 20 保存?zhèn)溆?每次用時取 一小管 取凍存血清 1 支 由幾個操作人或分幾次 紅細(xì)胞等最好是分別配制 測定陽性血清效價 取平均值作為最終的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清效價 大量檢測時不需每 板均做陽性對照 一般可在試驗前 中 后分別設(shè)陽性血清 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 9 參 考 文 獻(xiàn) 1甘孟侯 中國禽病學(xué) M 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 1999 2戚中田 禽流感病毒與人類禽流感 J 中國科學(xué)基金 2004 18 2 68 71 3陳化蘭 于康震 田國濱 等 DNA 免疫誘導(dǎo)雞對禽流感病毒的免疫保護(hù)反應(yīng) J 中 國農(nóng)業(yè)科學(xué) 1998 31 5 63 68 4霍惠玲 王增利 高豐 等 禽流感疫苗研究進(jìn)展 J 動物醫(yī)