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微生物的營養(yǎng)及無菌技術(shù)1培養(yǎng)基(1)種類：按培養(yǎng)基的物理性質(zhì)分為液體培養(yǎng)基：配制成的液體狀態(tài)的基質(zhì)，一般用于生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑(如瓊脂)，瓊脂固體培養(yǎng)基是實(shí)驗室中最常用的培養(yǎng)基之一。(2)培養(yǎng)基配方及營養(yǎng)要素基本營養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽。此外還要滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。2無菌技術(shù)(1)消毒和滅菌的區(qū)別條件結(jié)果常用的方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌(2)無菌操作對實(shí)驗空間、操作臺可用紫外線或70酒精消毒，操作者的手用酒精消毒。將實(shí)驗用的培養(yǎng)器皿和培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌法滅菌，接種環(huán)用灼燒方法滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1大腸桿菌(1)特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌。用途：是基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具。2培養(yǎng)：實(shí)驗中用LB液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)大腸桿菌。3分離(實(shí)驗部分) -LB固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基滅菌倒平板接種50 mL LB液體培養(yǎng)基和50 mL LB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌將固體培養(yǎng)基倒入4個滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12 h劃線分離培養(yǎng)觀察用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1224 h后，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個菌落4.保存菌種：用接種環(huán)取出單個菌落，劃線法接種在斜面培養(yǎng)基上，37 恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，4 冰箱保存。【易誤警示】在倒平板過程中，不能將培養(yǎng)基濺在皿壁與皿蓋上，防止雜菌污染。本實(shí)驗需設(shè)置空白培養(yǎng)基在相同條件下一起培養(yǎng)，（目的是）以確定是否有雜菌污染。培養(yǎng)皿倒置的目的是防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基中，造成污染。5純化大腸桿菌的方法(1)平板劃線分離法(方法簡單易操作)：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面(也是分離純化的方法)。在第1次劃線后都從上次劃線末端開始,目的是獲得由單個細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落（單菌落）。(2)稀釋涂布分離法(操作復(fù)雜，單菌落更易分開)：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時，即可獲得單個細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)菌落。分離以尿素為氮源的微生物1實(shí)驗原理：脲即尿素，是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。有一些細(xì)菌含有脲酶可以分解尿素，利用尿素作為其生長的氮源。2實(shí)驗?zāi)康模簭耐寥乐蟹蛛x出能利用尿素的細(xì)菌,了解它在生態(tài)平衡中的作用，并與LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基做對照。3實(shí)驗步驟：(1)制平板：在酒精燈火焰旁將LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基分別倒在兩個培養(yǎng)皿中，超凈臺搖勻，平放至凝固。(2)制備細(xì)菌懸液：將1g土樣依次稀釋出10-2、10-3、10-4和10-5土壤稀釋液，備用。(3)用涂布分離法分離細(xì)菌：取10-4和10-5土壤稀釋液，分別加到LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，再用刮刀將菌液涂布到整個平面上。(4)培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿倒置，在37恒溫培養(yǎng)上2448h。(5)觀察：LB全營養(yǎng)固體培養(yǎng)基中有較多的菌落，而尿素為氮源的固體培養(yǎng)基平板中只有少量菌落?！咎貏e提示】選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)需要的微生物的生長。目的是從眾多微生物中分離所需要的微生物。在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)可以做到這一點(diǎn)，如加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在培養(yǎng)的培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入的。改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，也可達(dá)到分離微生物的目的。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可以分離固氮微生物，因為非固氮微生物不能在此培養(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時,也具有分離效果。如石油是唯一碳源時，可以抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，達(dá)到分離能消除石油污染的微生物的目的。改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物?！咎揭?guī)尋律】劃線分離法操作的注意事項(1)每一次劃線之前都要對接種環(huán)灼燒滅菌。(2)灼燒接種環(huán)之后 ，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。(3)劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。植物組織培養(yǎng)影響植物組織培養(yǎng)的條件(1)材料：植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實(shí)驗結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇已無菌培養(yǎng)過的菊花幼苗作材料。一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長旺盛的嫩枝進(jìn)行組織培養(yǎng)的原因是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。(2)營養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。(3)激素：在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。(4)環(huán)境條件：pH、溫度、光等環(huán)境條件。植物激素的使用順序及結(jié)果使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先生長素，后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素，后生長素細(xì)胞既分裂也分化同時使用分