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微生物發(fā)酵生理學(xué)復(fù)習(xí)思考題第一章 緒論1. 微生物生理學(xué)的研究對(duì)象與范圍有哪些?研究對(duì)象:微生物發(fā)酵生理學(xué)是微生物學(xué)的一個(gè)分支,以發(fā)酵工業(yè)涉及的原核微生物與真核微生物為研究對(duì)象,系統(tǒng)闡述工業(yè)微生物自身普遍的以及特殊的生理活動(dòng)方式與規(guī)律,介紹微生物細(xì)胞的精細(xì)結(jié)構(gòu);細(xì)胞的新陳代謝、生物大分子的合成與分解及其調(diào)節(jié)控制;微生物的生長(zhǎng)、繁殖以及影響其生長(zhǎng)繁殖的種種因素;發(fā)酵產(chǎn)物(有機(jī)酸、氨基酸、核苷酸、抗生素等)的生物合成與代謝調(diào)控,并以此理論指導(dǎo)代謝控制育種與代謝控制發(fā)酵方案的實(shí)施。研究范圍:1、微生物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能。包括微生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能,即研究核酸、蛋白質(zhì)、生物合成、信息傳遞、膜結(jié)構(gòu)與功能等,以及這些生物大分子如何組建成新的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和產(chǎn)生新的生命個(gè)體的方式、特點(diǎn)與規(guī)律。還包括營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其吸收,能量的產(chǎn)生與消耗等。2、微生物的生長(zhǎng)與環(huán)境。闡明微生物生長(zhǎng)、繁殖、形態(tài)發(fā)生與細(xì)胞分化的特點(diǎn)與規(guī)律。3、微生物代謝與控制。在基因和分子水平上,研究不同生理類(lèi)型微生物的各種代謝途徑和調(diào)控、能量產(chǎn)生和轉(zhuǎn)換,以及嚴(yán)格厭氧和其他極端條件下的代謝活動(dòng)。2. 巴斯德、科赫和弗萊明等科學(xué)家在微生物生理學(xué)的建立和發(fā)展中有哪些重要的貢獻(xiàn)?巴斯德:19世紀(jì)中后期,法國(guó)科學(xué)家路易斯巴斯德系統(tǒng)地研究了酒精、乳酸等的發(fā)酵原理及某些疾病的病原微生物,奠定了微生物發(fā)酵生理學(xué)的科學(xué)基礎(chǔ)??坪眨号c巴斯德同時(shí)代的德國(guó)微生物學(xué)家羅伯特科赫對(duì)新興的微生物發(fā)酵生理學(xué)做出了巨大的貢獻(xiàn),首創(chuàng)細(xì)菌的染色方法,采用了以瓊脂作凝固培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌和分離單菌落而獲得純培養(yǎng)的操作過(guò)程;他規(guī)定了鑒定病原細(xì)菌的方法和步驟,提出著名的科赫法則??坪辗▌t(Kochs postulates)包括:1 在每一病例中都出現(xiàn)相同的微生物,且在健康者體內(nèi)不存在;2 要從寄主分離出這樣的微生物并在培養(yǎng)基中得到純培養(yǎng)(pure culture);3用這種微生物的純培養(yǎng)接種健康而敏感的寄主,同樣的疾病會(huì)重復(fù)發(fā)生;4 從試驗(yàn)發(fā)病的寄主中能再度分離培養(yǎng)出這種微生物來(lái)。弗萊明:1929年,英國(guó)細(xì)菌學(xué)家亞歷山大弗萊明發(fā)現(xiàn)青霉菌能抑制葡萄球菌的生長(zhǎng),揭示了微生物間的拮抗關(guān)系,并發(fā)現(xiàn)了青霉素。3. 微生物基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)等技術(shù)的發(fā)展和完善對(duì)微生物生理學(xué)的研究有何深遠(yuǎn)的影響?隨著基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和分子遺傳技術(shù)如DNA芯片、蛋白質(zhì)芯片以及微生物代謝工程技術(shù)的發(fā)展和完善,微生物發(fā)酵生理學(xué)的研究得以迅速向縱深發(fā)展,已從細(xì)胞水平、酶學(xué)水平逐漸進(jìn)入到基因水平、分子水平和后基因組水平,而且微生物發(fā)酵生理學(xué)的宏觀研究領(lǐng)域也大為拓寬。目前微生物發(fā)酵生理學(xué)的研究?jī)?nèi)容已從糖質(zhì)原料為碳源的異養(yǎng)微生物擴(kuò)大到非糖質(zhì)原料為碳源的微生物生物與特殊類(lèi)型的微;從研究一般代謝途徑深入到研究代謝的調(diào)節(jié);從研究一般的微生物到極端條件下的微生物;從對(duì)結(jié)構(gòu)與功能的描述到研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)重建等。新世紀(jì)微生物基因組學(xué)及其功能的研究,將進(jìn)一步擴(kuò)大到與工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境資源等密切相關(guān)的重要微生物,將為進(jìn)一步利用和改造微生物菌種,不斷的提高目標(biāo)產(chǎn)物的生產(chǎn)水平或生產(chǎn)新的產(chǎn)物提供了可能性。隨著基因組作圖測(cè)序方法的不斷進(jìn)步與完善,基因組研究將成為一種常規(guī)的研究方法,基于基因工程技術(shù)和微生物大規(guī)模測(cè)序技術(shù)發(fā)展起來(lái)的蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、通量組學(xué)等高通量分析技術(shù)不僅可用于改變微生物細(xì)胞中的代謝網(wǎng)絡(luò)和表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò),也可以用于改善工業(yè)微生物的勝利性能,從而使微生物發(fā)酵生理學(xué)的發(fā)展產(chǎn)生質(zhì)的飛躍,并將帶動(dòng)分子微生物學(xué)等基礎(chǔ)研究學(xué)科的發(fā)展。4. 微生物生理學(xué)的研究和應(yīng)用對(duì)當(dāng)今人類(lèi)社會(huì)可持續(xù)發(fā)展有何重要意義?解決人類(lèi)生存和發(fā)展面臨的主要問(wèn)題,實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展,在很大程度上要依靠生物科學(xué)與技術(shù),包括微生物發(fā)酵生理學(xué)來(lái)解決。(1)糧食與農(nóng)業(yè)問(wèn)題:微生物的活動(dòng)使得土壤具有生物活性性能,推動(dòng)著自然界中最重要的物質(zhì)循環(huán),并改善著土壤的持水、透氣、供肥、保肥和冷熱調(diào)節(jié)的能力,有助于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中,農(nóng)作物的防病、防蟲(chóng)害也與微生物的生理活動(dòng)密切相關(guān)。另外,農(nóng)產(chǎn)品的加工、貯藏,實(shí)際上很多是利用有益的微生物作用或是抑制有害微生物危害的技術(shù)。隨著科技學(xué)技術(shù)的發(fā)展,微生物發(fā)酵生理學(xué)與農(nóng)業(yè)科學(xué)之間的關(guān)系必將越來(lái)越密切。(2)資源與能源問(wèn)題:由于微生物發(fā)酵具有代謝產(chǎn)物種類(lèi)多、原料來(lái)源廣、能源消耗低、經(jīng)濟(jì)效益高和環(huán)境污染少等特點(diǎn),故必將逐步取代目前需高溫、高壓、能耗大和“三廢”嚴(yán)重的化學(xué)工業(yè)。(3)環(huán)境保護(hù)問(wèn)題:微生物是有機(jī)廢水污染物和有毒化合物和強(qiáng)有力的分解者和轉(zhuǎn)化者,起著環(huán)境清道夫的作用。(4)醫(yī)藥與健康問(wèn)題:防治各種傳染病的主要手段是各種微生物產(chǎn)生的藥物,尤其是抗生素;此外,一大批與人類(lèi)健康、長(zhǎng)壽有關(guān)的生物制品,例如疫苗、菌苗和類(lèi)毒素等均是微生物的產(chǎn)品;基因工程菌將形成一批強(qiáng)大的工業(yè)生產(chǎn)菌,特別是藥物的生產(chǎn)將出現(xiàn)前所未有的新局面。在新世紀(jì)人類(lèi)將進(jìn)一步去征服癌癥、艾滋病以及其他特殊的疾病,為人類(lèi)的生存、健康和可持續(xù)發(fā)展作出更大的貢獻(xiàn)。第二章 微生物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能1. 試比較原核生物與真核生物的異同。微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)上有兩種基本的形式,即原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。原核生物包括細(xì)菌、放線菌、藍(lán)細(xì)菌、古生菌、支原體、立克次體和衣原體等。真核生物包括酵母菌、霉菌、藻類(lèi)和原生動(dòng)物等。原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的最重要區(qū)別在于核的結(jié)構(gòu),原核細(xì)胞缺乏核膜或核被膜,而僅由一環(huán)狀DNA分子形成核區(qū)或擬核裸露游離在細(xì)胞質(zhì)中;真核細(xì)胞有一個(gè)真正的核,這是包圍在核膜內(nèi)的一個(gè)結(jié)構(gòu),其中有含有遺傳物質(zhì)的染色體。他們之間的另一個(gè)區(qū)別應(yīng)強(qiáng)調(diào)的是核糖體的大小,原核生物核糖體的沉降系數(shù)為70S,由30S和50S兩個(gè)亞單位組成,而真核生物細(xì)胞質(zhì)的核糖體沉降系數(shù)為80S,但線粒體和葉綠體沉降系數(shù)與原核生物的相同。此外,原核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體和溶酶體等膜細(xì)胞器,微管似乎也不存在,在真核細(xì)胞中微管普遍存在。原核細(xì)胞和真核細(xì)胞雖然在結(jié)構(gòu)上存在很大差異,但在化學(xué)組成上卻是十分相似的,都含有類(lèi)似成分的蛋白質(zhì)、核糖、多糖和脂類(lèi),都具有同一類(lèi)型的代謝機(jī)制。在化學(xué)上的主要差異在于真核細(xì)胞的膜內(nèi)普遍含有甾醇,而原核細(xì)胞的膜內(nèi)普遍沒(méi)有甾醇以及細(xì)胞壁化學(xué)組成有所不同。2. 請(qǐng)解釋三域?qū)W說(shuō)(Three Domain Proposal)。20世紀(jì)70年代,美國(guó)科學(xué)家Carl Woese發(fā)現(xiàn)一群序列奇異的細(xì)菌甲烷細(xì)菌是地球上最古老的生命形式與細(xì)菌在同一進(jìn)化分枝上,即同屬原核生物群、這類(lèi)細(xì)菌稱(chēng)為古細(xì)菌(Archaebacteria),古細(xì)菌與原核生物、真核生物間的16SrRNA序列的同源相似性均低于60,因此,1990年Woese等人正式提出了生命系統(tǒng)是由細(xì)菌(bacteria)域、古菌(Archae)域和真核生物(Eukarya) 域所構(gòu)成的三域?qū)W說(shuō)(Three Domain Proposal)。3. 為什么將16S rRNA或18S rRNA作為生物進(jìn)化的標(biāo)尺? 16S rRNA 為原核生物核糖體中一種核糖體RNA , 大小約1.5kb左右, 由多個(gè)臂環(huán)組成, 部分堿基配對(duì),其余形成環(huán),可劃分成四個(gè)結(jié)構(gòu)域,其序列具有高度的保守性,有“細(xì)菌化石”之稱(chēng)。相對(duì)應(yīng)的,在真核生物中為18SrRNA。16S rRNA或18S rRNA被普遍公認(rèn)為是一把好的譜系分析的“分子尺”,是因?yàn)椋?1)16S rRNA或18S rRNA具有重要且恒定的生理功能;2)具有高度保守、中度保守和高度變化序列區(qū)域,因而適用于距離不同的各類(lèi)生物親緣關(guān)系的研究;3)分子量大小適中,便于序列分析;4)rRNA在細(xì)胞中含量大(約占細(xì)胞中RNA的90%),也易于提取;5)普遍存在于真核及原核生物細(xì)胞中,因此可作為測(cè)量各類(lèi)生物進(jìn)化的工具。 功能重要的大分子比不重要的進(jìn)化的慢,16SrRNA被普遍認(rèn)為是一把好的譜系分析的“分子尺”。4. 試比較G與G細(xì)胞壁的組成與結(jié)構(gòu)。 G細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單,它是較厚(2080nm)的不分層結(jié)構(gòu),由肽聚糖和磷壁酸組成,由磷壁酸的末端磷酸基共價(jià)結(jié)合到肽聚糖的胞壁酸上。他們可能組成了薄的單層結(jié)構(gòu)物,然后多層重疊起來(lái),使細(xì)胞壁具有堅(jiān)韌性。如果細(xì)胞壁的肽聚糖層被消溶,G細(xì)胞成為原生質(zhì)體(protoplasts),細(xì)胞壁不復(fù)存在,而只存留細(xì)胞膜。除鏈球菌外,大多數(shù)G細(xì)菌細(xì)胞壁中含極少蛋白質(zhì)。 G細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較復(fù)雜,是由外壁層和肽聚糖層組成的多層結(jié)構(gòu),厚約1015nm。外壁層與肽聚糖層之間存在一定的空隙,稱(chēng)之為周質(zhì)空間,內(nèi)含水溶性蛋白,其中有的具酶促作用,稱(chēng)之為周質(zhì)酶,主要是磷酸酶類(lèi)。外壁層位于外表面,由50%脂多糖、15%脂蛋白和35%磷脂組成。具有類(lèi)似于細(xì)胞膜那樣的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)特征,即雙分子層磷脂中鑲嵌著蛋白質(zhì)和脂多糖。脂多糖是G細(xì)胞壁的特有成分,其疏水性部門(mén)嵌在外壁層內(nèi),親水性部分延伸到細(xì)胞外的水溶液中。此外還有脂蛋白,它以肽鏈與肽聚糖層中某些二氨基庚二酸相連接,以其脂類(lèi)部分與外壁層的磷脂相連,在外壁層和肽聚糖層之間起搭橋作用,脂蛋白還在保持細(xì)胞外膜結(jié)構(gòu)的完整性上起作用。外膜內(nèi)是肽聚糖層,可能只有12個(gè)單分子層組成的薄層,夾在外膜與細(xì)胞膜這兩層單位膜結(jié)構(gòu)中間,對(duì)G的細(xì)胞形態(tài)起決定作用。5. DAP(diaminopimelic acid)、teichoic acid、DPA(dipicolinic acid)、LPS(lipopolyaccharide)分別是什么? 這些化合物分別出現(xiàn)在細(xì)菌細(xì)胞的什么結(jié)構(gòu)中?有何功能?DAP(diaminopimelic acid):二氨基庚二酸,存在于細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖中。N-乙酰葡萄糖胺(G)和N-乙酰胞壁酸(M)相互交替連接成聚糖鏈,聚糖鏈通過(guò)短肽的交聯(lián)而形成了網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的大分子。短肽一般是四肽,短肽具有特定的氨基酸順序:A1-A2-A3-D-Ala,在G-中,四肽尾的第3個(gè)氨基酸是內(nèi)消旋二氨基庚二酸(m-DAP),一種只有在原核微生物細(xì)胞壁上才有的氨基酸。 G-肽聚糖沒(méi)有特殊的肽橋,其前后兩個(gè)單體間的連接僅通過(guò)甲四肽尾的第4個(gè)氨基酸D-ala的羧基與乙四肽尾的第3個(gè)氨基酸mDAP的氨基直接相連 ,只形成較為疏稀、機(jī)械強(qiáng)度較差的肽聚糖網(wǎng)套。teichoic acid:磷壁酸,存在于G+的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜中,分壁磷壁酸和膜磷壁酸。壁磷壁酸和細(xì)胞壁中肽聚糖連接,膜磷壁酸一端和細(xì)胞膜相連,另一端游離于細(xì)胞壁外。磷壁酸帶負(fù)電荷,使細(xì)胞壁形成負(fù)電荷環(huán)境,增強(qiáng)膜對(duì)二價(jià)陽(yáng)離子的吸收,尤其是Mg2+,以保持有關(guān)的細(xì)胞壁合成酶的活性,鎂也有利于維持細(xì)胞膜的完整性;貯藏P元素;增強(qiáng)某些致病菌對(duì)宿主細(xì)胞的粘連,避免被白細(xì)胞吞噬以及抗補(bǔ)體的作用;磷壁酸抗原性很強(qiáng),是G+的重要表面抗原,噬菌體的特異性吸附受體,作為細(xì)菌分類(lèi)、鑒定的依據(jù);調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)自溶素的活力,防止細(xì)胞因自溶而死。DPA(dipicolinic acid):吡啶二羧酸,LPS(lipopolysaccharide):脂多糖,是G-細(xì)胞壁的特有成分,由類(lèi)脂A、核心寡糖和O-側(cè)鏈三部分構(gòu)成。LPS結(jié)構(gòu)的多變,決定了G-細(xì)胞表面抗原決定簇的多樣性;電荷較強(qiáng),有吸附Mg2+、Ca2+以提高其在細(xì)胞表面濃度的作用;類(lèi)脂A是G-致病物質(zhì)內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ);有控制某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞的部分選擇性功能;噬菌體在細(xì)胞表面的吸附受體。6. 論述不同微生物細(xì)胞制備原生質(zhì)體的原則與依據(jù)。 根據(jù)各種微生物細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)不同,可以選用不同的酶或再結(jié)合一些其他措施去除細(xì)胞壁,下表綜合列出各種微生物細(xì)胞制備原生質(zhì)體的方法。微生物細(xì)胞壁主要成分脫壁法G+細(xì)菌芽孢菌葡萄球菌鏈霉菌肽聚糖溶菌酶處理溶葡萄球菌素處理溶菌酶處理(菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基中補(bǔ)充甘氨酸0.5-3.5%或蔗糖10-34%)vfG-細(xì)菌大腸桿菌肽聚糖,脂多糖溶菌酶,EDTA處理青霉、頭孢霉、曲霉酵母纖維素、幾丁質(zhì)葡聚糖、幾丁質(zhì)纖維素酶或L1酶處理蝸牛酶處理7. 生物膜結(jié)構(gòu)的流動(dòng)鑲嵌模型的要點(diǎn)是什么?膜的流動(dòng)性有哪些表現(xiàn)方式?膜的流動(dòng)性受哪些因素的影響? 流動(dòng)鑲嵌模型的要點(diǎn):1)強(qiáng)調(diào)蛋白質(zhì)鑲嵌:膜是以脂雙分子層構(gòu)成網(wǎng)架,蛋白質(zhì)以-螺旋環(huán)狀結(jié)構(gòu)鑲嵌在網(wǎng)孔中,插入脂分子層或貫穿整個(gè)膜。整合蛋白質(zhì)以非極性區(qū)埋在脂分子層間,極性區(qū)朝膜表面。周邊蛋白只附于膜的表層。膜兩側(cè)蛋白質(zhì)在種類(lèi)與數(shù)量上都不同,分布是絕對(duì)不對(duì)稱(chēng)的。2)強(qiáng)調(diào)膜的流動(dòng)性:脂雙分子層呈流體狀“海洋”,周邊蛋白“漂浮”于膜上,而整合蛋白“冰山”則可在膜內(nèi)作橫向流動(dòng)。膜的流動(dòng)性是指膜結(jié)構(gòu)分子的運(yùn)動(dòng)性,它包括膜脂的運(yùn)動(dòng)和膜蛋白的運(yùn)動(dòng)。1)膜脂的運(yùn)動(dòng)方式主要有側(cè)向擴(kuò)散、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)運(yùn)動(dòng)、左右擺動(dòng)以及翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)等。膜脂的流動(dòng)性受著一些因素的影響,主要影響因素有:溫度:在一定溫度下,脂分子從液晶態(tài)(能流動(dòng)、具有一定形狀和體積的物態(tài))轉(zhuǎn)變?yōu)槟z狀(不流動(dòng))的晶態(tài)。 這一能引起物相變化的溫度稱(chēng)為相變溫度。 當(dāng)環(huán)境溫度在相變溫度以上時(shí),膜脂分子處于流動(dòng)的液晶態(tài); 而在相變溫度以下時(shí), 則處于不流動(dòng)的晶態(tài)。 膜脂相變溫度越低,膜脂流動(dòng)性就越大;反之,相變溫度越高,膜脂的流動(dòng)性也就越小。膜脂的脂肪酸鏈:飽和程度高的脂肪酸鏈因緊密有序地排列,因而流動(dòng)性小;而不飽和脂肪酸鏈由于不飽和鍵的存在,使分子間排列疏松而無(wú)序,相變溫度降低,從而增強(qiáng)了膜的流動(dòng)性。脂肪酸鏈的長(zhǎng)度對(duì)膜脂的流動(dòng)性也有影響:隨著脂肪酸鏈的增長(zhǎng),鏈尾相互作用的機(jī)會(huì)增多,易于凝集(相變溫度增高),流動(dòng)性下降。膜脂與膜蛋白的結(jié)合程度、環(huán)境中的離子強(qiáng)度、pH 值等都會(huì)影響膜脂的流動(dòng)性。2)細(xì)胞膜中的蛋白質(zhì)也能以側(cè)向擴(kuò)散等方式運(yùn)動(dòng)。膜蛋白的運(yùn)動(dòng)也受很多因素影響。 膜中蛋白質(zhì)與脂類(lèi)的相互作用、 內(nèi)在蛋白與外在蛋白相互作用、膜蛋白復(fù)合體的形成、膜蛋白與細(xì)胞骨架的作用等都影響和限制蛋白質(zhì)的流動(dòng)。8. 解釋細(xì)胞膜流動(dòng)性和不對(duì)稱(chēng)性及其生物學(xué)上的意義。膜的流動(dòng)性:脂雙分子層呈流體狀“海洋”,周邊蛋白“漂浮”于膜上,而整合蛋白“冰山”則可在膜內(nèi)作橫向流動(dòng)。細(xì)胞膜各結(jié)構(gòu)成分在膜中是不均勻分布的,結(jié)構(gòu)成分的不對(duì)稱(chēng)性是細(xì)胞膜的另一重要特征,主要表現(xiàn)在以下方面:(1)蛋白質(zhì)在脂雙層中不對(duì)稱(chēng)地鑲嵌分布。膜蛋白不同程度地嵌入脂雙層中或分布于膜表面。同時(shí)不同部位膜蛋白的種類(lèi)和數(shù)量也不同。(2)脂分子分布的不對(duì)稱(chēng)性。在脂雙層中,各種類(lèi)型脂分子的分布是不均勻的。一般來(lái)說(shuō),卵磷脂、鞘磷脂多分布于脂雙層的外層,而腦磷脂則多分布于內(nèi)層。(3)糖類(lèi)的不對(duì)稱(chēng)分布。糖類(lèi)在細(xì)胞膜中的分布具有顯著不對(duì)稱(chēng)性,它們只存在于膜外表面,與外層脂分子或蛋白質(zhì)結(jié)合形成糖脂或糖蛋白。 生物學(xué)上的意義:膜的不對(duì)稱(chēng)性保證了膜功能的方向性,使膜兩側(cè)具有不同功能。與膜上的物質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)胞粘著與細(xì)胞識(shí)別等有關(guān)。9. 試比較細(xì)菌質(zhì)膜間體系統(tǒng)與真菌內(nèi)膜系統(tǒng)生理功能。 細(xì)菌質(zhì)膜-間體系統(tǒng):間體或中體是真細(xì)菌唯一的內(nèi)膜結(jié)構(gòu),由質(zhì)膜內(nèi)陷形成的一種囊袋。每個(gè)細(xì)胞有一個(gè)或數(shù)個(gè)間體,間體擴(kuò)大了細(xì)胞膜的表面積,提高了代謝效率。膜中各種轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)擔(dān)負(fù)著細(xì)胞與周?chē)h(huán)境的物質(zhì)交換,它的高度選擇透性維持了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的相對(duì)恒定。產(chǎn)生并維持跨膜濃度梯度。 真核生物有比較發(fā)達(dá)的內(nèi)膜系統(tǒng),除線粒體和葉綠體膜無(wú)連續(xù)性外,包括核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體三大部分,稱(chēng)為內(nèi)膜系統(tǒng)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)溝通細(xì)胞的各個(gè)組分,真核細(xì)胞中有內(nèi)膜組成的空腔結(jié)構(gòu),纏繞成卷,橫切面呈網(wǎng)狀,核糖體上合成的蛋白通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)渠道被運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)膜上,或分泌到胞外;高爾基體形成分泌物和溶酶體酶,對(duì)糖蛋白、脂蛋白進(jìn)行修飾和改造,對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和分選,在膜循環(huán)過(guò)程中起關(guān)鍵作用;核膜由雙層單位膜組成,基本結(jié)構(gòu)與質(zhì)膜相似,是細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間天然的選擇性屏障,避免生命活動(dòng)彼此干擾,保護(hù)DNA不受機(jī)械力損傷,同時(shí),是細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間物質(zhì)交換與信息交流的通道。10. 以大腸桿菌為例,說(shuō)明原核生物核質(zhì)的特性。 原核生物的DNA沒(méi)有核膜所包裹而游離于細(xì)胞質(zhì)當(dāng)中,附著于原生質(zhì)膜的一個(gè)點(diǎn)上,所以原核生物的核區(qū)又稱(chēng)為類(lèi)核或擬核。在大腸桿菌中,DNA可能是呈環(huán)狀、沒(méi)有游離端,高度折疊卷曲的,沒(méi)有特定的形態(tài)和結(jié)構(gòu),亦沒(méi)有核膜包裹,僅集中地分布在細(xì)胞質(zhì)的特定區(qū)域;沒(méi)有與堿性很強(qiáng)的組蛋白結(jié)合。11. 簡(jiǎn)述真核生物染色體的組成和結(jié)構(gòu)。 染色質(zhì)是DNA和大郅等量的組蛋白、大體一半量的非組蛋白,還有少量的RNA和磷脂所組成的復(fù)合體。 1)真核細(xì)胞里的DNA序列按重復(fù)頻率大致可分為三類(lèi):?jiǎn)我恍蛄?、重?fù)序列和高度重復(fù)序列;2)組蛋白是所有真核生物的體細(xì)胞中與DNA連接的堿性蛋白質(zhì),是染色體主要的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)之一。幾乎所有染色質(zhì)中都含有5中近乎等量的組蛋白:極富含賴(lài)氨酸的D1,稍含賴(lài)氨酸的H2a和H2b,富含精氨酸的H3和H4。組蛋白主要在染色質(zhì)結(jié)構(gòu)中起作用,H3和H4是形成核小體結(jié)構(gòu)的必要條件;3)非組蛋白與DNA中特定基因連接在一起,解除組蛋白對(duì)RNA合成的抑制,是真核細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控中的一個(gè)重要因子。 染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位是核小體。構(gòu)成核小體核心結(jié)構(gòu)的組蛋白八聚體是由H2a、H2b、H3和H4各一對(duì)所組成,約200bp長(zhǎng)的DNA于其表面繞1.8圈,構(gòu)成直徑大約10nm扁盤(pán)狀的核小體,核小體通過(guò)DNA連接成為念珠狀的核纖絲。染色質(zhì)就是未經(jīng)盤(pán)旋纏繞的伸展?fàn)顟B(tài)的核纖絲形式存在。細(xì)胞分裂時(shí),染色質(zhì)變?yōu)槟蹱顟B(tài),即成為染色體。12. 線粒體由哪幾部分組成?各部分主要與哪些代謝反應(yīng)有關(guān)? 線粒體由外膜、內(nèi)膜和基質(zhì)三部分組成。細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行生化活動(dòng)的100多種酶和輔酶,包括有關(guān)催化TCA循環(huán)、氨基酸代謝、脂肪酸分解、電子傳遞、能量轉(zhuǎn)換,以至DNA復(fù)制和RNA合成等過(guò)程所需的各種酶和輔酶,都分布在線粒體的外膜、內(nèi)膜、膜內(nèi)空間和基質(zhì)等四個(gè)部位中。內(nèi)膜含有電子傳遞和氧化磷酸化作用的酶系,TCA循環(huán)的酶系大都在基質(zhì)內(nèi)。見(jiàn)P40表2-913. 化學(xué)滲透學(xué)說(shuō)的主要論點(diǎn)是什么? 化學(xué)滲透學(xué)說(shuō)的主要內(nèi)容1)呼吸鏈中的電子傳遞體在線粒體內(nèi)膜中有著特定的不對(duì)稱(chēng)分布,遞氫體和電子傳遞體是間隔交替排列的,催化反應(yīng)是定向的。2)在電子傳遞過(guò)程中,復(fù)合物I,III和IV的傳氫體起質(zhì)子泵的作用,將H+從線粒體內(nèi)膜基質(zhì)側(cè)定向地泵至內(nèi)膜外側(cè)空間將電子傳給其后的電子傳遞體。3)線粒體內(nèi)膜對(duì)質(zhì)子具有不可自由透過(guò)的性質(zhì),泵到外側(cè)的H+不能自由返回。結(jié)果形成內(nèi)膜內(nèi)外的電化學(xué)勢(shì)梯度(由質(zhì)子濃度差產(chǎn)生的電位梯度)。4)線粒體F1-F0-ATPase復(fù)合物能利用ATP水解能量將質(zhì)子泵出內(nèi)膜,但當(dāng)存在足夠高的跨膜質(zhì)子電化學(xué)梯度時(shí),強(qiáng)大的質(zhì)子流通過(guò)F1-F0-ATPase進(jìn)入線粒體基質(zhì)時(shí),釋放的自由能推動(dòng)ATP合成。14. 說(shuō)明溶酶體和微體的結(jié)構(gòu)與功能。 溶酶體:由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的膜包圍起來(lái)形成的泡囊,內(nèi)含50種水解酶類(lèi),主要是酸性磷酸酶、核糖核酸酶等。主要功能是消化作用。其消化底物來(lái)源有三種途徑:1)自體吞噬,吞噬的是細(xì)胞內(nèi)原有的物質(zhì);2)通過(guò)吞噬形成的吞噬體提供的有害物質(zhì);3)通過(guò)內(nèi)吞作用提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 微體:是一種細(xì)胞器,根據(jù)微體內(nèi)含有的酶的不同可以將微體分為過(guò)氧化小體和乙醛酸循環(huán)體。過(guò)氧化小體指含有氧化酶、過(guò)氧化氫酶等、直徑一般小于10nm、由一層單位膜包圍的球形顆粒,內(nèi)含酶對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用。乙醛酸循環(huán)體在真菌游動(dòng)孢子中發(fā)現(xiàn),內(nèi)含蘋(píng)果酸合成酶、異檸檬酸裂解酶等,在此小體中形成的琥珀酸進(jìn)入線粒體生成的草酰乙酸,可作為磷酸烯醇式丙酮酸的直接前提物,該細(xì)胞器還與儲(chǔ)藏性脂質(zhì)的代謝有關(guān)。15. 請(qǐng)解釋下列名詞:流動(dòng)鑲嵌模型、生物膜的相變溫度、L型細(xì)菌、小菌落突變流動(dòng)鑲嵌模型:針對(duì)細(xì)胞質(zhì)膜提出的一種膜的結(jié)構(gòu)模型,描述膜為結(jié)構(gòu)和功能上不對(duì)稱(chēng)的脂雙層所組成,蛋白質(zhì)以鑲嵌樣模式分布在膜的表面與內(nèi)部,并能在膜內(nèi)運(yùn)動(dòng)。此模型也可適用于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的膜。生物膜的相變溫度:膜內(nèi)磷脂分子發(fā)生晶相到液晶相轉(zhuǎn)變的溫度。L型細(xì)菌:在實(shí)驗(yàn)室或宿主體內(nèi)條件下,自發(fā)突變形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌。無(wú)壁,細(xì)胞呈多形態(tài);有些能通過(guò)細(xì)菌濾器,故稱(chēng)濾過(guò)型細(xì)菌;對(duì)滲透敏感,在培養(yǎng)基上形成小菌落,成“油煎蛋”狀。小菌落突變:呼吸缺陷型的突變體,比正常野生型菌落要小,不能進(jìn)行有氧呼吸,不能有效地利用有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)迅速繁殖自身,不能回復(fù)到正常的厭氧代謝,生長(zhǎng)慢。第三章 微生物的營(yíng)養(yǎng)與生長(zhǎng)1. 比較跨膜運(yùn)輸4種方式的特點(diǎn),并說(shuō)明離子載體的運(yùn)輸機(jī)制。(載體蛋白、能量消耗、運(yùn)送方向、溶質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)、運(yùn)送速率快慢、運(yùn)送前后物質(zhì)濃度)簡(jiǎn)單擴(kuò)散促進(jìn)擴(kuò)散主動(dòng)運(yùn)輸基團(tuán)移位特異載體蛋白無(wú)有有有能量消耗不需要不需要需要需要運(yùn)輸方向順濃度梯度順濃度梯度逆濃度梯度逆濃度梯度運(yùn)輸?shù)姆肿痈邼舛葧r(shí)的飽和性無(wú)有有有運(yùn)送前后溶質(zhì)分子不變不變不變改變運(yùn)送速度慢快快快跨膜運(yùn)輸四種方式的特點(diǎn):(1)簡(jiǎn)單擴(kuò)散a、一種被動(dòng)運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)跨膜運(yùn)輸方式,對(duì)可通透的極性或非極性小分子物質(zhì)無(wú)特異識(shí)別作用;b、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)送的方向?yàn)橛筛邼舛鹊降蜐舛?,過(guò)程不需要能量參與,平衡后膜內(nèi)外物質(zhì)濃度相等;c、運(yùn)輸速度與內(nèi)外濃度差成正比,但比其他三種的速率都慢;d、運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)特異載體參與,運(yùn)送前后營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不被化學(xué)修飾。(2)促進(jìn)擴(kuò)散a、一種被動(dòng)運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)跨膜運(yùn)輸方式;b、運(yùn)送方向?yàn)橛筛邼舛鹊降蜐舛?,不需要能量參與,平衡后膜內(nèi)外物質(zhì)濃度相等;c、運(yùn)輸過(guò)程中有特異性載體參與,對(duì)通透的物質(zhì)有特異性識(shí)別作用d、運(yùn)送前后物質(zhì)結(jié)構(gòu)不被化學(xué)修飾(3)主動(dòng)運(yùn)輸a、運(yùn)送中有特異性載體蛋白參與,對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有特異識(shí)別作用,各種物質(zhì)的運(yùn)輸有其專(zhuān)一的抑制劑;b、輸送過(guò)程中須消耗能量,依能量來(lái)源的不同可區(qū)分為初級(jí)主動(dòng)運(yùn)輸和次級(jí)主動(dòng)運(yùn)輸;c、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)送方向?yàn)橛傻蜐舛鹊礁邼舛?,運(yùn)輸過(guò)程中運(yùn)輸速度可以達(dá)到飽和狀態(tài),運(yùn)輸平衡后內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度顯著高于外部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度;d、運(yùn)送前后,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不被化學(xué)修飾。(4)基團(tuán)移位a、運(yùn)輸需要特異性載體,對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)具有特異識(shí)別作用,過(guò)程中需要能量;b、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)送方向由低濃度到高濃度,運(yùn)送平衡后,內(nèi)部濃度比外部濃度高得多;c、與其他三種運(yùn)輸方式不同在于運(yùn)送過(guò)程中進(jìn)行了化學(xué)修飾,運(yùn)送前后溶質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。離子載體按作用方式分為活動(dòng)載體和通道載體:a、活動(dòng)載體運(yùn)輸機(jī)制:活動(dòng)載體與金屬離子配位,然后把它包在一個(gè)空腔中形成外部親脂的復(fù)合物,靠這種金屬離子載體復(fù)合物在膜內(nèi)運(yùn)動(dòng)實(shí)現(xiàn)輸送;b、通道載體運(yùn)輸機(jī)制:通道載體相對(duì)固定在膜上形成貫穿膜兩側(cè)的親水性離子通道,使離子在沒(méi)有發(fā)生變化的情況下以原有形式通過(guò)膜,實(shí)現(xiàn)輸送。2. 舉例說(shuō)明ATP動(dòng)力型主動(dòng)運(yùn)輸系統(tǒng)。ATP動(dòng)力型主動(dòng)運(yùn)輸系統(tǒng):直接利用ATP或其他高能磷酸化合物結(jié)合的能量,Na-K-ATPase,又稱(chēng)鈉泵(sodium pump),是最典型的ATP動(dòng)力型運(yùn)輸系統(tǒng)。(具體見(jiàn)課本P70)3. 以大腸桿菌磷酸烯醇式丙酮酸糖磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(PTS)為例解釋基團(tuán)轉(zhuǎn)位?;鶊F(tuán)移位:需要能量,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞時(shí)化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)改變,呈磷酸酯形式;主要存在于厭氧型和兼性厭氧型細(xì)菌中,主要用于糖的運(yùn)輸、脂肪酸、核苷、堿基。細(xì)菌中普遍存在的磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)磷酸化酶系統(tǒng)(PTS)對(duì)各種糖類(lèi)的運(yùn)輸就是這方面的例子。以大腸桿菌為例解釋?zhuān)海?)磷酸供體:磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)催化酶:PEP轉(zhuǎn)磷酸化酶系統(tǒng)(PTS) PTS組成:包含E、E和熱穩(wěn)定蛋白(Hpr-p) E存在于細(xì)胞質(zhì)膜上,誘導(dǎo)生成,誘導(dǎo)Hpr-p上的磷酸集團(tuán)轉(zhuǎn)移到糖上,生成糖磷酸,其高度專(zhuān)一性,失去E,只失去對(duì)相應(yīng)的糖的運(yùn)輸能力;Hpr-p:每mol含2個(gè)His,咪唑Ni與Pi結(jié)合(2)催化反應(yīng)分兩步: a、少量熱穩(wěn)定pro被PEP磷酸化 b、磷酸Hpr可將其磷酸基傳給G,同時(shí)將生成的G-6-p釋放到細(xì)胞質(zhì),這步復(fù)合反應(yīng)由E催化。(3)E的特異性源于它由G誘導(dǎo)產(chǎn)生(4)該系統(tǒng)對(duì)厭氧菌非常重要,有助于它節(jié)省ATP具體見(jiàn)課本P734. 哪些因素與谷氨酸分泌透性有關(guān)?為什么?影響因素包括如下四方面:(1)生物素類(lèi)可以直接或間接影響磷脂生物合成的物質(zhì)。生物素是乙酰輔酶A羧化酶的輔基,該酶催化乙酰CoA合成丙二酰CoA的反應(yīng)是脂肪酸合成過(guò)程的限速步驟,因此限制生物素供量,實(shí)際就限制了脂肪酸的合成,從而使磷脂含量減少,膜結(jié)構(gòu)不完全,導(dǎo)致Glu分泌;(2)油酸和甘油都是磷脂的組成分,對(duì)他們的控制同樣能夠控制Glu的分泌;(3)青霉素類(lèi)影響細(xì)胞壁合成的物質(zhì)。青霉素造成細(xì)胞壁合成的缺陷并進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞膜受損,從而使Glu大量排出;(4)Glu胞內(nèi)外濃度。一般認(rèn)為Glu的攝入是依賴(lài)能量的主動(dòng)吸收過(guò)程,而分泌則是順Glu濃度梯度的擴(kuò)散現(xiàn)象,這是可逆的過(guò)程,即使分泌能力強(qiáng)的細(xì)胞在胞外Glu濃度變高時(shí)也有Glu向胞內(nèi)移動(dòng)。5. 論述核苷酸的分泌透性與細(xì)胞內(nèi)Mn2濃度的關(guān)系。核苷酸是不易分泌出細(xì)胞外的,Mn2+對(duì)產(chǎn)氨短桿菌核苷酸的分泌起關(guān)鍵作用。Mn2+引起細(xì)胞形態(tài)的變化,在Imp發(fā)酵中控制Mn2+限量,造成細(xì)胞膨脹的不規(guī)則形,膜發(fā)生異常,非常專(zhuān)一的膜透性被破壞,核苷酸生物合成補(bǔ)救途徑的酶系以及HX和R5P都分泌與體外。但當(dāng)Mn2+過(guò)量時(shí),菌體成小球狀,抑制這些物質(zhì)的分泌。Mn2+限量與生物素限量的谷氨酸分泌機(jī)制不同,Mn2+限量時(shí),細(xì)胞脂肪酸含量提高,其機(jī)制尚未清楚;生物素限量是使脂肪酸的含量降低。6. 試述胞外酶的分泌機(jī)制。 同步翻譯機(jī)制:蛋白質(zhì)的分泌機(jī)制重點(diǎn)介紹信號(hào)假說(shuō)模型:信號(hào)序列被翻譯成信號(hào)肽,信號(hào)肽一旦出現(xiàn)就會(huì)引導(dǎo)核糖體到膜上去,信號(hào)肽段在膜上可以識(shí)別一個(gè)或多個(gè)受體蛋白,通過(guò)氨基酸末端的堿性區(qū)與質(zhì)膜帶負(fù)電的內(nèi)面受體蛋白結(jié)合,蛋白質(zhì)翻譯時(shí),信號(hào)序列的疏水核心不斷插入膜中,直至切點(diǎn)露出膜外為止,于是在膜外形成一個(gè)孔眼或隧道,新生肽鏈即通過(guò)孔眼被輸出,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)部分或全部輸出后,信號(hào)肽就被一種特異的蛋白酶,即信號(hào)肽酶切割,該酶切點(diǎn)在信號(hào)肽和分泌蛋白間。翻譯后分泌機(jī)制:膜觸發(fā)器假說(shuō)和改良的信號(hào)假說(shuō)見(jiàn)課本P807. 試述細(xì)菌 細(xì)胞分裂控制的特點(diǎn)。答:細(xì)菌在分裂過(guò)程中都經(jīng)歷了染色體復(fù)制前的準(zhǔn)備、染色體復(fù)制和細(xì)胞分裂3個(gè)階段。這3個(gè)階段所經(jīng)歷的時(shí)間不同。盡管細(xì)菌的時(shí)代時(shí)間長(zhǎng)短不一,但DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂過(guò)程總是相互協(xié)調(diào),DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂相協(xié)調(diào)的模型依據(jù):分裂期間的細(xì)胞質(zhì)量及細(xì)胞大小隨生長(zhǎng)速率變化,但不管生長(zhǎng)速率如何,DNA開(kāi)始復(fù)制時(shí) 的質(zhì)量是恒定的。據(jù)此模型可以認(rèn)為細(xì)菌內(nèi)有3種蛋白質(zhì)起作用1啟動(dòng)因子 負(fù)責(zé)啟動(dòng)DNA復(fù)制,但DNA復(fù)制開(kāi)始后,它立即被代謝掉,在下一次復(fù)制之前,這種啟動(dòng)子又合成,當(dāng)達(dá)到一定濃度時(shí)又啟動(dòng)DNA復(fù)制。2 啟動(dòng)子不僅負(fù)責(zé)啟動(dòng)DNA復(fù)制,同時(shí)也啟動(dòng)分裂蛋白質(zhì)的合成,這種分裂蛋白在DNA復(fù)制完成之后進(jìn)行組裝和修飾,最后成為有生物活性的分裂蛋白3 不管生長(zhǎng)速率如何,DNA復(fù)制保持恒定的時(shí)間,在DNA復(fù)制結(jié)束時(shí)合成一種終止蛋白,它能引起細(xì)菌分裂所需要的一系列反應(yīng),最后終止蛋白和分裂蛋白質(zhì)共同作用導(dǎo)致細(xì)胞分裂。8. 真核細(xì)胞周期各時(shí)期的生理特點(diǎn)及核的變化有哪些?G1期:合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需物質(zhì),蛋白質(zhì),糖類(lèi),脂類(lèi)等。不合成DNA,染色質(zhì)解凝集,為DNA復(fù)制做準(zhǔn)備S期:進(jìn)行蛋白質(zhì)的合成和DNA復(fù)制,形成核小體串珠狀結(jié)構(gòu)。G2期:合成一些亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),染色質(zhì)重新組裝成高螺旋化的染色體 M期:細(xì)胞分裂,核也分裂,細(xì)胞膜也分裂,遺傳物質(zhì)分到兩個(gè)子細(xì)胞中去。答:真核細(xì)胞的細(xì)胞周期可分為4個(gè)時(shí)期:G1期、S期、G2期、和M期G1期:控制細(xì)胞周期的長(zhǎng)短蛋白質(zhì)和RNA的合成增加,S期:DNA合成期,蛋白質(zhì)合成以誘發(fā)最后的百分之三的DNA復(fù)制G2期:合成的蛋白質(zhì)分裂誘導(dǎo)因子M期,有絲分裂期9. 舉例說(shuō)明細(xì)菌、酵母、霉菌細(xì)胞形態(tài)分化的特點(diǎn)。節(jié)桿菌、芽孢菌、酵母菌的二型性,霉菌的二型性答:以糞腸球菌而論,新細(xì)胞擴(kuò)增的步驟1 新細(xì)胞壁合成從前一分裂周期中形成的赤道壁帶上開(kāi)始,新的橫隔開(kāi)始形成,并在前沿繼續(xù)合成。2 間體的作用似乎是構(gòu)成新壁合成的引發(fā)點(diǎn),并使DNA附著在膜上。間體在細(xì)胞分裂過(guò)程中也發(fā)展成為兩個(gè),核質(zhì)分離,此時(shí)子細(xì)胞的赤道壁帶上開(kāi)始出現(xiàn)一個(gè)凹痕,是下一個(gè)細(xì)胞周期的開(kāi)始。3 新壁繼續(xù)合成,逐漸延伸為橫跨細(xì)胞的橫隔,從而完成下一次分裂。新細(xì)胞壁的生長(zhǎng)依賴(lài)于原有胞壁肽聚糖的局部解離,這是有胞壁溶菌酶引起的。啤酒酵母的細(xì)胞壁是由堿可溶性葡聚糖、堿不溶性葡聚糖、甘露聚糖、蛋白質(zhì)、磷脂及硫等交織而成,各成分在增殖期間合成速度是不同的。見(jiàn)可溶性葡聚糖在細(xì)胞周期前半期增量顯著,而堿不溶性葡聚糖主要在后半期合成,可能前者是后者的前體物。甘露聚糖在整個(gè)細(xì)胞周期大體是直線上升的。芽殖時(shí),母細(xì)胞壁幾乎不增加,新和成的壁都在子壁上,隨著子細(xì)胞的生長(zhǎng),新壁接連不斷的形成。部分舊壁溶解是新壁組分插入。出芽時(shí),在母壁內(nèi)側(cè)的葡聚糖層上,生成牢固的幾丁質(zhì)環(huán)狀結(jié)構(gòu),由此而長(zhǎng)出子細(xì)胞。啤酒酵母出芽時(shí),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特別發(fā)達(dá),前端分裂成小泡并集中在芽尖。霉菌是單細(xì)胞或多細(xì)胞的多核菌絲體,主要以孢子為繁殖體。霉菌的孢子在固體培養(yǎng)基上發(fā)芽,首先形成未分化的菌絲體,隨著菌絲擴(kuò)增并分化為成熟的菌落。深層通風(fēng)培養(yǎng)基以菌絲斷裂形成新的菌絲球方式生長(zhǎng)。10. 何謂比生長(zhǎng)速率?營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)生長(zhǎng)速率有何影響?表征微生物生長(zhǎng)速率的一個(gè)參數(shù)答:比生長(zhǎng)速率:以單位細(xì)胞濃度(或單位質(zhì)量)為基準(zhǔn)來(lái)表示各個(gè)組分濃度變化的速率營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響包括營(yíng)養(yǎng)物的濃度和質(zhì)量?jī)蓚€(gè)方面:營(yíng)養(yǎng)物的濃度:當(dāng)所有其他必須成分都過(guò)量存在時(shí),改變其中一特定的生長(zhǎng)必須營(yíng)養(yǎng)物的濃度,對(duì)生長(zhǎng)速率的影響可用Monod方程表示營(yíng)養(yǎng)物的組成成分:營(yíng)養(yǎng)物的質(zhì)量方面表現(xiàn)為組成成分上,對(duì)比生長(zhǎng)速率也有較大影響。當(dāng)所有成分都過(guò)量存在時(shí),培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富,則代時(shí)短,比生長(zhǎng)速率高;反之,營(yíng)養(yǎng)物簡(jiǎn)單貧乏,代時(shí)就長(zhǎng),比生長(zhǎng)速率低。因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基可以給微生物提供合成蛋白質(zhì)等重要細(xì)胞成分的前提物質(zhì),可以省下合成這些前提物質(zhì)所需的能量為微生物生長(zhǎng)所需。11. 微生物生長(zhǎng)與產(chǎn)物形成的關(guān)系分哪幾種類(lèi)型?答:1 類(lèi)型相關(guān)型 指產(chǎn)物的生成與細(xì)胞的生成相關(guān)的過(guò)程,產(chǎn)物是細(xì)胞能量代謝的結(jié)果,此時(shí)產(chǎn)物通常是基質(zhì)的分解代謝產(chǎn)物,代謝產(chǎn)物的生成與細(xì)胞的生長(zhǎng)是同步的。乳酸、乙醇的發(fā)酵 2 類(lèi)型部分相關(guān)型 該類(lèi)反應(yīng)產(chǎn)物的生成與基質(zhì)消耗僅有間接關(guān)系,產(chǎn)物是能量代謝的間接結(jié)果,在細(xì)胞生長(zhǎng)期內(nèi),基本無(wú)產(chǎn)物生成。檸檬酸和氨基酸的發(fā)酵 3 類(lèi)型非相關(guān)型產(chǎn)物的生成與細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)間接聯(lián)系,它是次級(jí)代謝產(chǎn)物。它的特點(diǎn)是當(dāng)細(xì)胞處于生長(zhǎng)階段時(shí),并無(wú)產(chǎn)物積累,而當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)停止后,產(chǎn)物卻能大量生成??股亍⑽⑸锒舅氐陌l(fā)酵生產(chǎn)12. 何謂極端微生物?為什么目前微生物發(fā)酵生理學(xué)的研究熱點(diǎn)從一般微生物轉(zhuǎn)向極端微生物?答:極端環(huán)境通常是指普通微生物不能生存的那些環(huán)境條件,例如高溫、低溫、高酸、高堿、高鹽、高干燥、高輻射、高壓、高藥物濃度或寡營(yíng)養(yǎng)等環(huán)境都屬于極端環(huán)境。在這些極端條件下,還有不同類(lèi)型的微生物生活著,這些微生物被稱(chēng)為極端(環(huán)境)微生物(extreme environmental microorganisms)或嗜極菌(extremophiles)。20世紀(jì)70年代開(kāi)始了極端微生物學(xué)的研究,是微生物學(xué)及微生物生理學(xué)發(fā)展的前沿領(lǐng)域。由于極端微生物的生理習(xí)性特異,是一般微生物所不具備的,可利用于不同領(lǐng)域,如利用嗜熱菌的代謝快、世代時(shí)間短、酶的熱穩(wěn)定性高等特點(diǎn),用于發(fā)酵可減少污染、節(jié)約能量、降低成本、提高產(chǎn)品質(zhì)量;嗜鹽菌的紫膜具有特殊光能轉(zhuǎn)化作用,可作為生物能電池;嗜堿菌的胞外酶具耐高堿特性,可用于工業(yè)酶制劑生產(chǎn),并處理堿性工業(yè)污水;嗜酸菌已廣泛用于金屬礦物的溶浸,目前銅、鈾等金屬已用該法于生產(chǎn)。此外,極端微生物的生態(tài)、機(jī)能、生理、生化反應(yīng)和遺傳基因等理論方面的研究有助于我們擴(kuò)大并加深對(duì)生命本質(zhì)及生物進(jìn)化等方面的了解和認(rèn)識(shí)。13. 說(shuō)明嗜熱菌種的耐熱可能機(jī)制及耐熱菌的開(kāi)發(fā)前景。答:1 細(xì)胞膜類(lèi)脂的特殊結(jié)構(gòu)嗜熱菌細(xì)胞質(zhì)膜中的化學(xué)成分,如類(lèi)脂總含量和細(xì)胞膜中熱熔點(diǎn)的飽和脂肪酸,均隨環(huán)境溫度升高而增加,但不飽和脂肪酸則明顯降低。因此,嗜熱菌在高溫下能維持膜的功能,較好的生存。類(lèi)脂成分以長(zhǎng)鏈碳?xì)浠衔锱c甘油分子以醚建相連。這種結(jié)構(gòu)有助于耐高溫2 重要代謝產(chǎn)物的迅速再合成嗜熱菌的tRNA的周轉(zhuǎn)速度大于中溫菌,并且核酸中GC含量比中文菌的GC含量高。嗜熱菌tRNA的GC含量也較高,因此,嗜熱菌中tRNA的熱穩(wěn)定性大于中溫菌3大分子的熱穩(wěn)定性對(duì)于核酸來(lái)說(shuō),核酸中的GC含量高,增加其穩(wěn)定性,堿基中加入硫元素來(lái)增加核酸的穩(wěn)定性。最主要的還是蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性高,主要是因?yàn)槭葻峋鞍踪|(zhì)的氫鍵和二硫鍵比較多。4 超結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性嗜熱菌的細(xì)胞膜、核糖體和中溫菌均有差異。一般而言,菌的生長(zhǎng)下限溫度取決于類(lèi)脂溶解溫度,上限溫度取決于蛋白質(zhì)性質(zhì),所以細(xì)胞膜中的類(lèi)脂和蛋白質(zhì)與熱穩(wěn)定性有極大關(guān)系。5重要離子提高大分子的熱穩(wěn)定性比如鈣離子可以提高蛋白質(zhì)和酶的熱穩(wěn)定性,鎂離子可以提高trna的解鏈溫度。嗜熱菌在實(shí)踐應(yīng)用中具有很多優(yōu)良的特性,在工業(yè)生物技術(shù)中發(fā)揮了巨大的作用,一個(gè)最成功的例子是從嗜熱菌水棲嗜熱菌中提取的DNA聚合酶在嗜熱菌生產(chǎn)中是熱媒有高溫反應(yīng)活性,以及對(duì)有機(jī)溶劑、去污劑和變性劑的較強(qiáng)抗性,使它在食品、醫(yī)藥、制革、石油開(kāi)采、環(huán)境保護(hù)等方面都有廣泛的應(yīng)用潛力。在環(huán)境保護(hù)方面,嗜熱菌在污水及廢物處理方面有著其它方法無(wú)法比擬的優(yōu)越性。隨著嗜熱酶研究的深入,其在生物催化及生物轉(zhuǎn)換方面的作用日益引起人們的重視。發(fā)酵工業(yè)上,利用它進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn),可以節(jié)約成本,能量,提高產(chǎn)品質(zhì)量,減少污染。14. 何謂嗜冷微生物?試述嗜冷微生物的耐冷機(jī)制。嗜冷微生物是指在0度或更低溫度下可以生存的微生物。 細(xì)胞膜:細(xì)胞膜中的脂類(lèi)和不飽和脂肪酸含量比較高,有利于細(xì)胞膜在低溫環(huán)境下仍然能夠保持較好的流動(dòng)性。 tRNA:轉(zhuǎn)錄后修飾的程度低,含有二氫尿嘧啶多,使得其具有一定的柔性和流動(dòng)性,有利于蛋白質(zhì)的合成。 低溫酶:低溫酶在低溫條件下仍能維持活性,低溫酶在低溫條件下,有一定的柔性,可以迅速調(diào)整結(jié)構(gòu)來(lái)適應(yīng)環(huán)境的變化。 冷休克蛋白的超量表達(dá);是一種Mrna的分子伴侶,穩(wěn)定信使RNA的結(jié)構(gòu),幫助它翻譯形成蛋白質(zhì),細(xì)胞在低溫環(huán)境下,會(huì)誘導(dǎo)表達(dá),來(lái)幫助細(xì)胞適應(yīng)這一環(huán)境變化。 細(xì)胞壁比較厚,孔蛋白的孔徑比較小,一些毒素等物質(zhì)進(jìn)入不了。耐冷機(jī)制:1 調(diào)節(jié)膜中類(lèi)脂變化嗜冷菌細(xì)胞膜中類(lèi)脂含量較多,其中含有較多的直鏈和支鏈不飽和脂肪酸,不飽和脂肪酸的增加會(huì)引起之類(lèi)熔化點(diǎn)的降低,從而在低溫下使膜中脂類(lèi)處于液態(tài)和流動(dòng)態(tài),有助于其在低溫下吸收環(huán)境中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 膜蛋白和脂多糖的磷酸化和去磷酸化感應(yīng)機(jī)制感受溫度變化對(duì)于生物適應(yīng)環(huán)境是非常重要的,這就需要生物具有相應(yīng)的機(jī)制感受環(huán)境信號(hào)的變化。微生物感受環(huán)境溫度變化是很復(fù)雜的,磷酸化和去磷酸化機(jī)制是生物感受環(huán)境信號(hào)變化的首要機(jī)制。 較強(qiáng)的蛋白質(zhì)合成能力嗜冷菌在它們的生長(zhǎng)溫度范圍內(nèi)有10%-15%的細(xì)胞內(nèi)蛋白是通過(guò)積極的調(diào)節(jié)機(jī)制合成的,溫度影響細(xì)胞總蛋白質(zhì)的合成或某種蛋白質(zhì)的合成,是通過(guò)影響核糖體上蛋白質(zhì)的翻譯速度,或是通過(guò)影響某種特意mRNA翻譯的起始或翻譯速率實(shí)現(xiàn)的。4低溫酶的存在嗜冷菌在低溫環(huán)境下生存是由于其酶在低溫下有效的發(fā)揮作用,即從生理代謝和生化特征兩方面,在一定范圍內(nèi)補(bǔ)償了低溫對(duì)細(xì)胞造成的負(fù)面影響。5 冷休克蛋白的超重表達(dá)嗜冷菌適應(yīng)低溫的另一機(jī)制是當(dāng)溫度突然降低,細(xì)胞中會(huì)合成一種冷休克蛋白,即一種特殊形式的基因表達(dá)是細(xì)胞適應(yīng)這一急劇降低的低溫環(huán)境。15. 試述嗜酸微生物的耐酸機(jī)制與嗜堿微生物的耐堿機(jī)制,以及它們?cè)诠I(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用前景。嗜酸微生物是指必須生長(zhǎng)在酸性的外部環(huán)境中,但是細(xì)胞內(nèi)部的環(huán)境必須是中性的,所以必須有一些機(jī)制來(lái)保證細(xì)胞的內(nèi)部環(huán)境是中性的。有三種假說(shuō),質(zhì)子泵學(xué)說(shuō)、道南平衡說(shuō)、屏蔽學(xué)說(shuō)等。以屏蔽說(shuō)為主。 認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)膜是兩種環(huán)境的屏障,使得外部的氫離子和氫氧根離子都進(jìn)入不到內(nèi)環(huán)境,從而維持內(nèi)部環(huán)境的中性。 有些細(xì)菌(氧化硫桿菌)的周知空間里有酸性蛋白酶,可以幫助細(xì)胞適應(yīng)酸性環(huán)境。 從遺傳學(xué)角度看,有編碼酸穩(wěn)定蛋白的基因。金屬熔浸(銅、鈾);環(huán)境保護(hù)(生物方法潔凈煤技術(shù)、處理含硫廢氣、改良土壤);高溫酶的來(lái)源。答:一般而言,微生物對(duì)酸性環(huán)境的適應(yīng)不需要像對(duì)高溫、低溫、高鹽等環(huán)境那樣的全細(xì)胞的適應(yīng),酸性環(huán)境主要對(duì)細(xì)胞外部成分產(chǎn)生影響。此類(lèi)菌必須生長(zhǎng)在酸性環(huán)境中,在中性條件下細(xì)胞質(zhì)膜會(huì)溶解。雖然嗜酸微生物生長(zhǎng)的外部環(huán)境呈酸性,但通過(guò)一定的機(jī)制其細(xì)胞內(nèi)部的PH值接近中性,細(xì)胞內(nèi)部的酶系和代謝過(guò)程與中性菌頗為相似,多數(shù)嗜酸微生物的細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜之間含有大量的酸穩(wěn)定性酶蛋白,最高酶活性均在酸性范圍,這些特點(diǎn)保證其能夠更好的適應(yīng)細(xì)胞外的酸性環(huán)境同時(shí)還能維持細(xì)胞的pH值接近中性。主要有三種機(jī)制:質(zhì)子泵學(xué)說(shuō),即在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)子通過(guò)電子傳遞鏈泵到細(xì)胞外,形成pH梯度和電化學(xué)梯度,質(zhì)子動(dòng)力學(xué)又可驅(qū)動(dòng)ATP合成,離子運(yùn)輸、鞭毛運(yùn)動(dòng),最終達(dá)到細(xì)胞內(nèi)近中性的pH環(huán)境,但還無(wú)直接的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)道南平衡學(xué)說(shuō)來(lái)解釋?zhuān)J(rèn)為細(xì)胞質(zhì)膜存在高分子電解質(zhì),產(chǎn)生的大離子不能通過(guò)膜,所構(gòu)成的道南點(diǎn)位是小離子向膜兩側(cè)擴(kuò)散達(dá)到平衡,則膜外過(guò)量的氫離子不能進(jìn)入膜內(nèi),致使膜內(nèi)維持中性狀態(tài)屏蔽學(xué)說(shuō)(主要理論)認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)膜是兩種環(huán)境的滲透屏蔽物,使外部氫離子和氫氧根離子都不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),進(jìn)而維持胞內(nèi)pH值接近中性。近幾十年來(lái),由于環(huán)境污染的日益嚴(yán)重,使生物方法潔凈煤技術(shù)的研究受到關(guān)注。嗜算硫桿菌還可以用來(lái)處理含硫廢氣,改良土壤等。用嗜熱嗜酸的硫化葉菌脫除煤炭中的硫化物,不僅無(wú)機(jī)硫化物去除率高,還可以去除有機(jī)硫化物。嗜堿菌的細(xì)胞膜上,有一種Na+/ H+反向載體蛋白,細(xì)胞主動(dòng)運(yùn)輸時(shí),能迅速 催化細(xì)胞將Na+從胞內(nèi)排出,并將胞外的H+攝入胞內(nèi),經(jīng)過(guò)這一離子交換過(guò)程,使H+積累于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),保證了細(xì)胞內(nèi)PH值的穩(wěn)定。嗜堿菌在呼吸過(guò)程中通過(guò)呼吸鏈將H+逐出細(xì)胞外,建立起跨膜質(zhì)子電化學(xué)梯度,為了維持胞內(nèi)PH值平衡,需要通過(guò)質(zhì)膜上Na+/ H+反向載體將H+重新不斷攝入胞內(nèi),Na+不斷被排出胞外,但因質(zhì)子攝入的量大于Na+的電化學(xué)梯度,此時(shí)Na+與溶質(zhì)通過(guò)細(xì)胞膜上的Na+/溶質(zhì)同向載體的作用,可同時(shí)由胞外進(jìn)入胞內(nèi)。嗜堿酶。主動(dòng)外排氫氧根,維持細(xì)胞內(nèi)的中性環(huán)境。反向載體排鈉吸氫,維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,呼吸時(shí),將氫排出,需要反向載體吸氫,但是氫離子電化學(xué)梯度大于鈉離子,所以要通過(guò)同向載體吸入鈉離子和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);嗜堿酶、主動(dòng)外排氫氧根。在基礎(chǔ)研究方面,模式生物,該菌在高PH條件下的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能,包括上脂類(lèi)細(xì)胞膜脂類(lèi)的組成成分、膜與蛋白質(zhì)的比值、膜上高水平的呼吸鏈成分、暴露于胞外或分泌至胞外的酸性氨基酸以及物質(zhì)運(yùn)輸有關(guān)的Na+循環(huán)和維持細(xì)胞質(zhì)內(nèi)PH值穩(wěn)定等方面的機(jī)制。(高ph下的細(xì)胞 結(jié)構(gòu)與功能,包括細(xì)胞膜中的脂類(lèi)組成成分,脂類(lèi)與蛋白質(zhì)的比值,鈉離子的運(yùn)輸、維持細(xì)胞質(zhì)中性環(huán)境的機(jī)制等)在工業(yè)上,尤其是嗜堿菌產(chǎn)生的胞外酶,工業(yè)酶制劑的生產(chǎn),堿性污水處理等等。在醫(yī)藥、紡織、洗滌、和化工等行業(yè)應(yīng)用有明顯優(yōu)勢(shì)。16. 試述嗜鹽微生物的耐鹽機(jī)制,特別是紫膜的生理功能。答:1 高離子濃度維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性 嗜鹽菌中特別是極端嗜鹽菌細(xì)胞中有相當(dāng)高的離子濃度,用于維持其細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。其細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特殊,不含肽聚糖,而以脂蛋白為主,其完整性需要離子鍵維持,高濃度的鈉離子對(duì)于細(xì)胞壁蛋白質(zhì)亞基之間結(jié)合,保持細(xì)胞完整性是必須的。嗜鹽菌細(xì)胞內(nèi)積累鉀離子,胞內(nèi)鉀離子濃度往往要達(dá)到或超過(guò)胞外鉀離子的濃度的100倍以上,具有排出鈉離子,吸放鉀離子的現(xiàn)象,通過(guò)鉀離子濃度來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓。2 嗜鹽菌的紫膜嗜鹽菌的細(xì)胞膜內(nèi)有一個(gè)性能非常特殊的色素,稱(chēng)細(xì)菌視紫紅質(zhì),呈紫色,占細(xì)胞膜一半面積成為紫膜。紫膜實(shí)際上具有光能轉(zhuǎn)換器的作用。細(xì)菌視紫質(zhì)紅有一分子視黃醛和蛋白質(zhì)相連,其功能是吸收光的發(fā)色團(tuán),并促進(jìn)質(zhì)子跨越細(xì)胞質(zhì)膜。細(xì)菌視紫紅質(zhì)中的視黃醛在正常情況下是反式構(gòu)型,吸收光能后改變成順式構(gòu)型。視黃醛每吸收1個(gè)光量子,便有兩個(gè)質(zhì)子跨過(guò)細(xì)胞膜排出胞外,形成質(zhì)子梯度。當(dāng)視黃醛從細(xì)胞質(zhì)內(nèi)吸收1個(gè)質(zhì)子后,在無(wú)光情況下又恢復(fù)到原來(lái)的反式構(gòu)型。當(dāng)細(xì)胞外側(cè)表面積累了足夠的質(zhì)子,達(dá)到一定質(zhì)子電化學(xué)梯度時(shí),便可驅(qū)動(dòng)質(zhì)子通過(guò)膜上ATP酶的作用合成ATP,為細(xì)胞活動(dòng)提供能量。17. 比較古菌與真細(xì)菌、真核生物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的異同。答:在細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能上,古生菌既有類(lèi)似真細(xì)菌之處,也有類(lèi)似真核生物之處,還有一些獨(dú)特的特點(diǎn)。(1)具有與真細(xì)菌類(lèi)似功能的細(xì)胞壁,但細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分均差別甚大。(2)細(xì)胞膜 古生菌的質(zhì)膜在本質(zhì)上也是由磷脂組成,但它比真細(xì)菌或真核生物有更明顯的多樣性。(3)細(xì)胞質(zhì)和內(nèi)含物 無(wú)復(fù)雜內(nèi)膜的細(xì)胞器,且核糖體為70S(4)核區(qū) 不具有核仁、核膜的細(xì)胞核,染色體DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀。古細(xì)菌具有與原核相似的細(xì)胞結(jié)構(gòu),但在分子水平上與真細(xì)菌有很大差異:細(xì)胞壁具有多樣性,有的是蛋白質(zhì)性質(zhì),有的是雜多糖性質(zhì),有的雖類(lèi)似肽聚糖、但都不含胞壁酸、D-氨基酸和二氨基庚二酸。質(zhì)膜所含脂都是不可皂化的,中性脂以異戊二烯類(lèi)的碳?xì)浠衔餅橹?,極性脂以植烷甘油為主。rRNA、tRNA具有獨(dú)特的核苷酸序列。核糖體表面上是70S,但對(duì)原核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成有抑制的氯霉素、卡那霉素對(duì)古細(xì)菌無(wú)作用,而茴香霉素對(duì)真核生物和古細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成都有抑制作用,因?yàn)槠鋵?shí)質(zhì)與80S核糖體有些相似。18. 闡述細(xì)菌耐藥性的可能機(jī)制,控制細(xì)菌耐藥性可采用哪些策略? 改變細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的通透性(細(xì)胞壁是改變孔蛋白的表達(dá)量或者不表達(dá),細(xì)胞膜是改變膜外蛋白選擇吸收,主動(dòng)外排機(jī)制將藥物排除) 藥物作用靶位的改變 產(chǎn)生分解抗生素的酶 胞內(nèi)代謝途徑的改變 細(xì)菌生物膜的作用:細(xì)菌
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