食品發(fā)酵工程及其在食品上的應(yīng)用

1、食品發(fā)酵工程及其在食品上的應(yīng)用貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院 作業(yè)（論文）題目： 發(fā)酵工程在食品工業(yè)中的應(yīng)用 課程名稱(chēng)： 食品高新技術(shù) 任課教師姓名： 朱秋勁 研究生姓名： 宋小娟 學(xué) 號(hào)： 2013021205 年 級(jí)： 2013級(jí) 專(zhuān) 業(yè)： 食品科學(xué) 任課教師評(píng)分：年 月 日 發(fā)酵工程及其在食品工業(yè)上的應(yīng)用摘要：隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，發(fā)酵工程作為食品生物技術(shù)中的一個(gè)分支，在食品加工過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用，現(xiàn)代發(fā)酵工程結(jié)合基因工程、細(xì)胞工程等生產(chǎn)出許多種天然的食品，如：?jiǎn)渭?xì)胞蛋白，黃原膠，細(xì)胞色素等，這一技術(shù)為食品加工業(yè)提供了一條健康發(fā)展道路。關(guān)鍵詞：現(xiàn)代發(fā)酵工程；發(fā)酵類(lèi)型；食品加工 fer

2、mentation engineering and its application in food industryabstract: with the continuous development of biotechnology, fermentation engineering as a branch of food biotechnology, food processing, plays an important role in the process of modern fermentation engineering combined with genetic engineeri

3、ng, cell engineering and so on to produce many kinds of natural food, such as: single cell protein, xanthan gum, cytochrome, etc., the technology for food processing provides a healthy development road.key words:processingmodern fermentation engineering ;the fermentation type; food 發(fā)酵工程也叫微生物工程，是利用微生

4、物的生長(zhǎng)和代謝活動(dòng)，通過(guò)現(xiàn)代化工技術(shù)來(lái)生產(chǎn)各種有用物質(zhì)的一種技術(shù)。發(fā)酵工程的內(nèi)容隨著生物技術(shù)的發(fā)展不斷擴(kuò)大和充實(shí)?，F(xiàn)代的發(fā)酵工程結(jié)合了基因工程、細(xì)胞工程、分子修飾和改造等新技術(shù)，不僅包括菌體生產(chǎn)和代謝產(chǎn)物的發(fā)酵生產(chǎn)，還包括微生物機(jī)能的利用1。 發(fā)酵工程是一個(gè)由實(shí)踐科學(xué)組成的一種生產(chǎn)手段，早已廣泛的應(yīng)用于我們的生活中。就現(xiàn)階段發(fā)酵工程的發(fā)展而言，它已經(jīng)歷了“農(nóng)產(chǎn)手加工”、“近代發(fā)酵工程”、“現(xiàn)代發(fā)酵工程”這 3 個(gè)階段。1 微生物發(fā)酵工程的原理發(fā)酵工程分為菌種、發(fā)酵和提煉等三個(gè)階段。發(fā)酵工程原理均必須建立在發(fā)酵工程的生物學(xué)原理的基礎(chǔ)上，生物學(xué)原理是發(fā)現(xiàn)發(fā)酵工程最基本的原理。發(fā)酵原理的核心內(nèi)容是微

5、生物復(fù)雜系統(tǒng)運(yùn)行的自然規(guī)律 （即微生物生命活動(dòng)的三個(gè)基本假說(shuō)）2。細(xì)胞經(jīng)濟(jì)假說(shuō) （生命活動(dòng)的法則，控制）揭示細(xì)胞經(jīng)濟(jì)的運(yùn)行原理，它們體現(xiàn)了細(xì)胞代謝活動(dòng)的自主性。以面包制作過(guò)程中的發(fā)酵過(guò)程為例談?wù)劙l(fā)酵原理。面包在制作的過(guò)程中首先需要面團(tuán)的發(fā)酵，促進(jìn)面團(tuán)體積的膨脹。面團(tuán)發(fā)酵的過(guò)程是一系列物理、化學(xué)變化的過(guò)程，發(fā)酵所產(chǎn)生的氣體均勻分布在面團(tuán)中；在各種生物酶的作用下，面團(tuán)中的雙糖和多糖轉(zhuǎn)化成糖，在適宜的溫度 、水分、ph值以及必要的礦物元素環(huán)境下，酵母直接利用單糖進(jìn)行新陳代謝，酵母發(fā)酵的過(guò)程伴隨產(chǎn)生的各種復(fù)雜化學(xué)芳香物質(zhì)。2 發(fā)酵工程特點(diǎn)微生物發(fā)酵技術(shù)具有以下特點(diǎn)3：（1）發(fā)酵過(guò)程以生命體的自動(dòng)調(diào)節(jié)方

6、式進(jìn)行，數(shù)十個(gè)反應(yīng)過(guò)程能夠在發(fā)酵設(shè)備中一次完成，也可在同一發(fā)酵設(shè)備生產(chǎn)多種發(fā)酵產(chǎn)品；（2）反應(yīng)通常在常溫常壓下進(jìn)行，條件溫和，能耗少，設(shè)備簡(jiǎn)單；（3）原料通常以農(nóng)副產(chǎn)品（糖蜜、淀粉）、工業(yè)廢水或可再生資源（如植物秸稈、木屑等）等為主，利于綜合利用；（4）能高度選擇地在復(fù)雜化合物的特定部位進(jìn)行氧化、還原、官能團(tuán)引入或去除等反應(yīng)，容易產(chǎn)生復(fù)雜的高分子化合物；（5）產(chǎn)物專(zhuān)一，副反應(yīng)少，污染小，是較為環(huán)保的工業(yè)生產(chǎn)方式。3 微生物發(fā)酵過(guò)程分類(lèi)3.1 根據(jù)微生物種類(lèi)不同，微生物發(fā)酵過(guò)程可以分為好氧性發(fā)酵和厭氧性發(fā)酵兩大類(lèi)4。（1）好氧性發(fā)酵在發(fā)酵過(guò)程中需要不斷地通入一定量的無(wú)菌空氣，如利用黑曲霉進(jìn)行的檸

7、檬酸發(fā)酵，利用棒狀桿菌進(jìn)行的谷氨酸發(fā)酵等。（2）厭氧性發(fā)酵在發(fā)酵時(shí)不需要供給空氣，如乳酸桿菌引起的乳酸發(fā)酵，梭狀芽孢桿菌引起的丙酮、丁醇發(fā)酵等。此外，酵母菌是兼性厭氧微生物，它在缺氧條件下進(jìn)行厭氧性發(fā)酵積累酒精，而在有氧即通氣條件下則進(jìn)行好氧性發(fā)酵，大量繁殖菌體細(xì)胞，因此稱(chēng)為兼性發(fā)酵。3.2 根據(jù)培養(yǎng)基狀態(tài)的不同，微生物發(fā)酵又可分為固體發(fā)酵和液體發(fā)酵；按照發(fā)酵設(shè)備來(lái)分，可分為敞口發(fā)酵、密閉發(fā)酵、淺盤(pán)發(fā)酵和深層發(fā)酵5。3.2.1 固體發(fā)酵某些微生物生長(zhǎng)需水很少，可利用疏松而含有必須營(yíng)養(yǎng)物的固體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，稱(chēng)為固體發(fā)酵。許多調(diào)味品的生產(chǎn)，如我國(guó)傳統(tǒng)的釀酒、制醬及大豆發(fā)酵食品等的生產(chǎn)均為固體

8、發(fā)酵。另外，固體發(fā)酵還利用與蘑菇的生產(chǎn)，奶酪和泡菜的制作等。固體發(fā)酵一般是開(kāi)發(fā)式的，因而不是純培養(yǎng)，無(wú)菌要求不高，它的一般過(guò)程為：將原料預(yù)加工后再經(jīng)蒸煮滅菌，然后制成含一定水分的固體物料，接入預(yù)先培養(yǎng)好的菌種進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵成熟后要適時(shí)出料，并進(jìn)行適當(dāng)處理，或進(jìn)行產(chǎn)物的提取。固體發(fā)酵所需設(shè)備簡(jiǎn)單，操作容易，所用原料多為來(lái)源豐富的工農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品，如麩皮、薯粉、大豆餅粉、高梁、玉米粉等，因此，至今仍在某些產(chǎn)品的生產(chǎn)上不同程度地沿用，但這種方式有許多缺點(diǎn)，如勞動(dòng)強(qiáng)度大，不便于機(jī)械化操作，微生物品種少，生長(zhǎng)慢，產(chǎn)品有限等。3.2.2 液體發(fā)酵液體深層發(fā)酵法是指在液體培養(yǎng)基內(nèi)部進(jìn)行的微生物培養(yǎng)過(guò)程。液體深層

9、發(fā)酵是在青霉素等抗生素的生產(chǎn)中發(fā)展起來(lái)的技術(shù)。根據(jù)操作方式的不同，液體深層發(fā)酵主要有分批發(fā)酵、連續(xù)發(fā)酵和補(bǔ)料分批發(fā)酵三種類(lèi)型。（1） 分批發(fā)酵培養(yǎng)基和菌種一次加入進(jìn)行培養(yǎng)，與外部沒(méi)有物料交換。其全過(guò)程包括空罐滅菌、加入滅過(guò)菌的培養(yǎng)基、接種、發(fā)酵過(guò)程、放罐和洗罐，所需時(shí)間的總和為一個(gè)發(fā)酵周期。分批發(fā)酵是最常用的發(fā)酵方法，廣泛用于多種發(fā)酵過(guò)程，傳統(tǒng)的生物產(chǎn)品發(fā)酵多用此過(guò)程。它除了控制溫度和ph值及通氣以外，不進(jìn)行任何其他控制，操作簡(jiǎn)單。但從細(xì)胞所處的環(huán)境來(lái)看，則有明顯改變，發(fā)酵初期營(yíng)養(yǎng)過(guò)多，可能抑制微生物的生長(zhǎng)，而發(fā)酵的中后期又可能因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)物減少而降低培養(yǎng)效率。從細(xì)胞的增值來(lái)說(shuō)，初期細(xì)胞濃度低，增

10、長(zhǎng)慢，后期細(xì)胞濃度雖高，但營(yíng)養(yǎng)物濃度過(guò)低也生長(zhǎng)不快，總的生產(chǎn)能力不是很高。（2） 連續(xù)發(fā)酵所謂連續(xù)發(fā)酵，是指以一定的速度向發(fā)酵罐內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)基，同時(shí)以相同的速度流出培養(yǎng)液，從而使發(fā)酵罐內(nèi)的液量維持恒定，微生物在穩(wěn)定狀態(tài)下生長(zhǎng)。穩(wěn)定狀態(tài)可以有效地延長(zhǎng)分批培養(yǎng)中的對(duì)數(shù)期。在穩(wěn)定的狀態(tài)下，微生物所處的環(huán)境條件，如培養(yǎng)基濃度、產(chǎn)物濃度、ph值等都能保持相對(duì)恒定，微生物細(xì)胞的濃度及其生長(zhǎng)速率也可維持不變，甚至還可以根據(jù)需要來(lái)調(diào)節(jié)生長(zhǎng)速度。與分批發(fā)酵相比，連續(xù)發(fā)酵具有以下優(yōu)點(diǎn)：a.可以維持穩(wěn)定的操作條件，有利于微生物的生長(zhǎng)代謝，從而使產(chǎn)率和產(chǎn)品質(zhì)量也相應(yīng)保持穩(wěn)定；b.能夠更有效實(shí)現(xiàn)機(jī)械化和自動(dòng)化，降低勞

11、動(dòng)強(qiáng)度，減少操作人員與病原微生物和毒性產(chǎn)物接觸的機(jī)會(huì)；c.減少設(shè)備清洗、準(zhǔn)備和滅菌等非生產(chǎn)占用時(shí)間，提高設(shè)備利用率，節(jié)省勞動(dòng)力和工時(shí)；d.由于滅菌次數(shù)減少，使測(cè)量?jī)x器探頭的壽命延長(zhǎng)；e.容易對(duì)過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，有效提高發(fā)酵產(chǎn)率。（3） 補(bǔ)料分批發(fā)酵補(bǔ)料分批發(fā)酵又稱(chēng)半連續(xù)發(fā)酵，是介于分批發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵之間的一種發(fā)酵技術(shù)，是指在微生物分批發(fā)酵中，以某種方式向培養(yǎng)系統(tǒng)補(bǔ)加一定物料的培養(yǎng)技術(shù)。通過(guò)向培養(yǎng)系統(tǒng)中補(bǔ)充物料，可以使培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物濃度較長(zhǎng)時(shí)間地保持在一定范圍內(nèi)，既保證微生物的生長(zhǎng)需要，又不會(huì)造成不利影響，從而達(dá)到提高產(chǎn)率的目的。補(bǔ)料在發(fā)酵過(guò)程中的應(yīng)用，是發(fā)酵技術(shù)上一個(gè)劃時(shí)代的進(jìn)步。補(bǔ)料技術(shù)本身也

12、由少次多量、少量多次，逐步改為流加，近年又實(shí)現(xiàn)了流加補(bǔ)料的微機(jī)控制。同傳統(tǒng)的分批發(fā)酵相比，補(bǔ)料分批發(fā)酵可以解除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的抑制、產(chǎn)物反饋抑制和葡萄糖分解阻遏效應(yīng)（葡萄糖效應(yīng)葡萄糖被快速分解，代謝所積累的產(chǎn)物在抑制所需產(chǎn)物合成的同時(shí)也抑制其他一些碳源、氮源的分解利用）；對(duì)于好氧發(fā)酵，它可以避免在分批發(fā)酵中因一次性投入糖過(guò)多造成細(xì)胞大量生長(zhǎng)，耗氧過(guò)多，以致通風(fēng)攪拌設(shè)備不能匹配的狀況；它還可以在某些情況下減少菌體生成量，提高有用產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化率。在真菌培養(yǎng)中，菌絲的減少可以降低發(fā)酵液的黏度，便于物料輸送及后處理。與連續(xù)發(fā)酵相比，它不會(huì)產(chǎn)生菌種老化和變異問(wèn)題，其適用范圍也比連續(xù)發(fā)酵廣。4 發(fā)酵設(shè)備生物反應(yīng)器

13、是利用生物催化劑為微生物發(fā)酵或酶反應(yīng)提供良好的反應(yīng)環(huán)境的設(shè)備 ，通常稱(chēng)為發(fā)酵罐6。分別是：機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐、通風(fēng)攪拌式發(fā)酵罐和厭氧發(fā)酵設(shè)備。5 發(fā)酵工程在食品工業(yè)中的應(yīng)用發(fā)酵工程除了應(yīng)用于傳統(tǒng)的釀酒和調(diào)味品德生產(chǎn)外，抗生素的發(fā)現(xiàn)和大規(guī)模深層培養(yǎng)技術(shù)的問(wèn)世，賦予了微生物發(fā)酵技術(shù)新的生命力。發(fā)酵工程產(chǎn)品的品種不斷增加，如單細(xì)胞蛋白、食品膠、天然色素、功能性不飽和脂肪酸等多種食品添加劑和保健食品功能性基料。5.1 單細(xì)胞蛋白的發(fā)酵生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白（scp）有的可直接供人們食用，有的可作家畜、家禽的飼料。因其富含蛋白質(zhì)、風(fēng)味溫和、容易儲(chǔ)存等特點(diǎn)，可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的蛋白質(zhì)添加劑，如魚(yú)粉、豆粉等。從酵母或細(xì)菌等微

14、生物體獲取的單細(xì)胞蛋白含有豐富的蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂類(lèi)、微生素以及礦物質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。除了作飼料外，還可以作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑添加到食品中。趙彩艷7采用豆腐渣為主要原料，接種酵母菌量為14%，發(fā)酵溫度30，發(fā)酵周期72h，該條件下發(fā)酵終產(chǎn)物粗蛋白含量為40.43%。畢榮宇等8利用畢赤酵母作為出發(fā)菌株，利用玉米粉和豆粕作為碳源和氮源生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白。張琴9利用棉稈，青霉接種量為10%，發(fā)酵53h，得到單細(xì)胞蛋白含量的評(píng)均值為25.38%。朱將偉等10利用枯草芽孢桿菌與產(chǎn)朊假絲酵母作為發(fā)酵菌種，以稻草秸稈為原料，采用混合發(fā)酵方式生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白，并對(duì)混合發(fā)酵的條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終產(chǎn)物中的蛋白含量可達(dá)約24

15、.5%。5.2 食品膠的發(fā)酵生產(chǎn)近年來(lái)，利用發(fā)酵法生產(chǎn)微生物多糖如黃原膠、結(jié)冷膠、茁霉多糖等不斷發(fā)展，這些新型的食品膠以其安全、無(wú)毒、功能獨(dú)特等優(yōu)良特性廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中作為增稠劑、穩(wěn)定劑、乳化劑和品質(zhì)改良劑。5.2.1 黃原膠黃原膠是黃單孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)生的細(xì)胞外雜多糖。黃原膠在食品工業(yè)中作為：膠凝劑、穩(wěn)定劑、保鮮劑和持水劑等。王桂蘭11采用廉價(jià)易得的培養(yǎng)基，首次在黃原膠發(fā)酵中添加表面活性劑和植物油，顯著提高了黃原膠的產(chǎn)量，首次將黃原膠進(jìn)行精制，并使各項(xiàng)參數(shù)達(dá)到注射用原料藥的標(biāo)準(zhǔn)。何海燕等12在發(fā)酵溫度28，接種量10%,ph7.5,發(fā)酵96h，產(chǎn)生的黃原膠產(chǎn)量達(dá)35.28g/l。5.2.2

16、結(jié)冷膠結(jié)冷膠是美國(guó)kelco公司開(kāi)發(fā)的一種新型微生物多糖，其膠凝性能比黃原膠更為優(yōu)越，如凝膠形成能力強(qiáng)、透明度高、最佳的風(fēng)味釋放、穩(wěn)定性強(qiáng)、不需加熱或稍微加熱即可形成凝膠等，而且形成凝膠的溫度和速度可根據(jù)需要在一定范圍內(nèi)變動(dòng)。5.2.3 熱凝膠熱凝膠是由tokuya harada教授于1966年發(fā)現(xiàn)的一種微生物多糖。隨著對(duì)其結(jié)構(gòu)、流變性質(zhì)、物化性質(zhì)、功能、應(yīng)用等方面的研究不斷深入，其獨(dú)特的理化性質(zhì)引起人們的廣泛興趣。熱凝膠可以用作添加劑以提高各種食品的質(zhì)量，由于不含生理熱量，因此可以作為低能量食品的組份而得到廣泛應(yīng)用。近年來(lái)，用熱凝膠制取得支鏈型-d-（1,3）-葡聚糖具有較高的抗腫瘤特性。而

17、且，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)熱凝膠的硫酸酯及其支鏈衍生物具有很強(qiáng)的抗艾滋病毒（hiv）活性。5.3 發(fā)酵法生產(chǎn)食用色素食用色素是一類(lèi)重要的食品添加劑。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)天然色素既避免了化學(xué)合成色素造成的潛在危險(xiǎn)，又克服了從植物中提取色素受氣候和土地等影響的弊端，具有產(chǎn)量高、成本低、使用安全等特點(diǎn)。5.3.1 發(fā)酵法生產(chǎn)黃曲黃色素thiyam general等13利用日本的一種海帶（saccharina japonica）作為固體發(fā)酵的底物，在不加鹽和氮源的條件下用黃絲曲霉屬的真菌gt11進(jìn)行固體發(fā)酵，ph7.0，相對(duì)濕度80%，接種量1.8*106ml/g，28下發(fā)酵192h，能產(chǎn)生510nm條件下吸光度

18、值410，這種方法生成的色素可以被用在食品、化妝品和制藥工業(yè)中。busaba yongsmith等14采用黃曲霉的誘變菌株tistr 3179作為黃曲色素發(fā)酵微生物，發(fā)現(xiàn)泰國(guó)的五種米中hom-mali米是最好的固體培養(yǎng)基，比玉米粉、大豆粉、甜土豆粉的效果還要好。其中相對(duì)濕度和溫度也是主要影響因素。在溫度為2832，相對(duì)濕度42%，接種量2%時(shí)，黃曲色素的最大產(chǎn)量是2224.63 a370u/gdw。5.3.2發(fā)酵法生產(chǎn)紅曲色素紅曲（ang-kak）是以大米為主要原料，經(jīng)紅曲霉發(fā)酵而成的一種色澤紅色的米曲，在亞洲國(guó)家被廣泛用于給各種發(fā)酵食品增加風(fēng)味和著色，也可用于紅米酒和高梁酒的釀造。pongr

19、awee nimnoi等15發(fā)現(xiàn)溫度和低物對(duì)紅曲霉形成紅色素有影響，研究發(fā)現(xiàn)將紅曲霉cmu001放在馬鈴薯葡萄糖，30下培養(yǎng)2周能產(chǎn)生大量紅色素，而放在胰蛋白胨葡萄糖酵母提取物上能大量增加菌體的干重。而用玉米粉作底物，再加入8%的葡萄糖時(shí)的產(chǎn)色素能力最好（129.63u/gds）。而色素在高溫和紫外光條件下容易衰退。jun tan 等16研究通過(guò)一個(gè)簡(jiǎn)單的高通量系統(tǒng)測(cè)定紅曲霉發(fā)酵樣品產(chǎn)色 素的量。將這個(gè)高通量系統(tǒng)與響應(yīng)面分析方法相結(jié)合，從29種影響因素中選擇出來(lái)4種主要的影響因素：葡萄糖（51.42g/l）、蛋白胨（4.91g/l）、nano3(1.00g /l)、kh2po4（1.00g/l

20、）。這個(gè)系統(tǒng)可以將色素色價(jià)從206.5u/ml提高到265.8u/ml。5.4 gaba（-氨基丁酸）的發(fā)酵生產(chǎn)-氨基丁酸是一種降血壓的藥劑，可以由紅曲霉產(chǎn)生。donghua jiang等17從發(fā)酵腐乳中篩選出一株紅曲霉菌m6,其產(chǎn)gaba的能力為3.657g/l。經(jīng)紫外誘變后的m6-13菌株產(chǎn)gaba量是m6的1.5倍（5.527g/l）。當(dāng)把m6-13放人3.7l的發(fā)酵罐中培養(yǎng)，gaba的產(chǎn)量達(dá)到13.470g/l。5.5 功能性多不飽和脂肪酸的發(fā)酵生產(chǎn)多不飽和脂肪酸（pufas）是指含有兩個(gè)或兩個(gè)以上雙鏈，且碳鏈長(zhǎng)為1622個(gè)碳原子的直鏈脂肪酸，在生物制藥和營(yíng)養(yǎng)保健品中廣泛關(guān)注和應(yīng)用。常

21、見(jiàn)的有：-亞麻酸（gla）、-亞麻酸（ala）、二十碳五烯酸（epa）和二十二碳六烯酸（dha）等。（1）-亞麻酸和-亞麻酸是兩種重要的不飽和脂肪酸，是細(xì)胞膜的基本成分和人體多種活性物質(zhì)如前列腺素、epa、dha等的前體，對(duì)人心腦血管疾病有特殊療效。目前主要-亞麻酸的主要來(lái)源是陸地植物。發(fā)酵法生產(chǎn)-亞麻酸主要有微藻和真菌。姜翠紅18研究了以粗甘油為碳源培養(yǎng)深黃被孢霉生產(chǎn)-亞麻酸，發(fā)酵時(shí)間12d，發(fā)酵溫度27.5、尿素1.0g/l，深黃被孢霉dla含量可達(dá)1.94g/l。高溫高氮（1.25g/l，26.5）深黃被孢霉生物量提高，低溫迪氮（1.0g/l,25）有利于-亞麻酸積累，所以深黃被孢霉可采

22、用兩步發(fā)酵生產(chǎn)-亞麻酸。milan ertk等19研究發(fā)現(xiàn)，微藻類(lèi)產(chǎn)-亞油酸的效果最好，進(jìn)行深層發(fā)酵，碳源為可溶性淀粉，氮源為尿素，gla的產(chǎn)量為1638.7mg/l。孫繼民等20以拉曼被孢霉為出發(fā)菌體m5，通過(guò)亞硝基和激光誘變，最后篩得一株mf10，-亞麻酸的產(chǎn)率達(dá)12.5g/l。微生物發(fā)酵生產(chǎn)-亞麻酸的缺點(diǎn)是對(duì)高產(chǎn)菌株的選育困難，利用基因工程技術(shù)可以定向選育出優(yōu)良性狀的基因工程菌，并通過(guò)發(fā)酵大量生產(chǎn)。(2) epa和dha均屬于高烯不飽和脂肪酸，廣泛存在于深海魚(yú)油之中（三文魚(yú)、金槍魚(yú)等），有益于人類(lèi)健康。其生理功能主要有：預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化、血栓和高血壓。然而油脂不很穩(wěn)定，容易氧化變質(zhì)

23、。微生物發(fā)酵法生產(chǎn)epa和dha具有生產(chǎn)周期短、培養(yǎng)簡(jiǎn)單、不受氣候和季節(jié)限制，可大規(guī)模生產(chǎn)。eduardo l等21研究發(fā)現(xiàn)，被孢霉是生產(chǎn)epa的潛在來(lái)源，生長(zhǎng)在12低溫下可積累epa 15%以上。doornbos b等22發(fā)現(xiàn)海藻chlorella minutissia產(chǎn)dha。lopez huertas e等23報(bào)道淡水藻monodus suberraneus產(chǎn)dha。jin liu 等24人采用營(yíng)綠等金鞭藻在恒化器中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)epa和dha，培養(yǎng)條件是20、ph8.0、，當(dāng)稀釋率為0.00240.0377h，生長(zhǎng)速率接近最大時(shí)，產(chǎn)epa為15.26mg/l。5.6 l蘋(píng)果酸的發(fā)酵

24、生產(chǎn)l-蘋(píng)果酸廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)，在葡萄酒釀制過(guò)程中加入少量l-蘋(píng)果酸可以使酒陳化，在醫(yī)學(xué)上，有抗疲勞、護(hù)肝、改善心脹機(jī)能的作用。l-蘋(píng)果酸可以采用一步發(fā)酵法或二步發(fā)酵法生產(chǎn)25。郝夕祥26研究了黃曲霉sfw-7在mn2+為14mg/l，fe2+為20mg/l,mg2+為10mg/l，l-蘋(píng)果酸的產(chǎn)量為38.73g/l。并證實(shí)co2固定途徑是積累l-蘋(píng)果酸的主要途徑。吳亞斌27研究基于產(chǎn)琥珀酸重組大腸桿菌 escherichia coli b0013-1050 的琥珀酸合成途徑，利用red同源重組系統(tǒng)和xer/dif重組酶系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行改造，構(gòu)建l-蘋(píng)果酸的合成途徑。對(duì)重組菌 e. coli 2

25、040進(jìn)行 15 升罐發(fā)酵試驗(yàn)，厭氧發(fā)酵 30 h，產(chǎn) l-蘋(píng)果酸 14 g/l，轉(zhuǎn)化率 60.3%，生產(chǎn)強(qiáng)度0.47 g/(lh)。o.pines等28研究釀酒酵母產(chǎn)l-蘋(píng)果酸的過(guò)程中延胡索酸酶可以將產(chǎn)l-蘋(píng)果酸的產(chǎn)量提高17倍。6 結(jié)語(yǔ)隨著現(xiàn)代發(fā)酵工程技術(shù)在食品領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，食品工業(yè)將不再是傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)食品的概念，工業(yè)食品將在人們?nèi)粘Ｉ钪姓紦?jù)重要的地位。現(xiàn)代食品工業(yè)的蓬勃發(fā)展，已顯示出發(fā)酵工程技術(shù)的巨大生命力，要充分利用世界生物技術(shù)迅猛發(fā)展的契機(jī)，中式發(fā)酵工程技術(shù)的研究，促進(jìn)我國(guó)食品工業(yè)的改革，實(shí)現(xiàn)我國(guó)食品工業(yè)健康有序的發(fā)展。 參考文獻(xiàn)1 張葉葉.發(fā)酵工程在食品工業(yè)中的應(yīng)用j.中國(guó)市場(chǎng)，2

26、013（34）：6263.2 張星元.發(fā)酵原理m.北京:科學(xué)出版社，2005.3 張 冰，董 磊.現(xiàn)代發(fā)酵工程技術(shù)在食品領(lǐng)域的應(yīng)用研究進(jìn)展j.科技論壇，2010:4.4 郝利民，陳 強(qiáng)，魯吉珂等，生物技術(shù)在軍雍食品中的應(yīng)用與展望j.食品科學(xué)，2011，（01）32:278282.5 吳 瓊，于寒松.益生菌發(fā)酵豆乳中營(yíng)養(yǎng)成分變化研究j.中國(guó)糧油，2013，（28）10：9295.6 李西騰.教學(xué)法在“發(fā)酵食品生產(chǎn)技術(shù)”實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用j.農(nóng)產(chǎn)品加工，2013（9）：7879.7 趙彩艷.以豆腐渣為主要原料生產(chǎn)飼料單細(xì)胞蛋白的研究j.飼料研究,2013(01):8284.8 畢榮宇，牟德華.利用畢赤酵

27、母生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白的玉米粉豆粕培養(yǎng)基優(yōu)化j.中國(guó)飼料，2013（15）：69.9 張 琴，李艷賓.棉稈稀酸水解及微生物共發(fā)酵生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白工藝優(yōu)化研究j.食品科學(xué)，2011，32（05）：192197.10 朱將偉，邱江平.秸稈發(fā)酵生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白及發(fā)酵劑的研制j.飼料工業(yè)，2011,32（22）：3338.11 王桂蘭.黃原膠的發(fā)酵和精制研究d.山東大學(xué)，2012,5（9）：7374.12 何海燕，覃擁靈.甘蔗糖蜜發(fā)酵產(chǎn)黃原膠發(fā)酵條件的優(yōu)化研究j.中國(guó)食品添加劑，2012,11（01）：6568.13 thiyam general，hye-jin kim，biond prasad ,et al.

28、 fungal utilization of a known and safe macroalga for pigment production using solid-state fermentationj.business media dordrecht，2013,10（12）.14 busaba yongsmith,panida thongpradis，worawan klinsupa ,et al.fermentation and quality of yellow pigments from golden brown rice solid culture by a selected

29、monascus mutantj.appl microbiol biotechnol，2013（97）：88958902.15 pongrawee nimnoi ,saisamorn lumyong. improving solid-state fermentation of monascus purpureus on agricultural products for pigment productionj.food bioprocess techol，2011,4:13841390.16 jun tan,ju chu,wenjuan shi ,et al.high-throughput s

30、creening steategy used for enhanced production of pigment by monasus purpureus d39-4j.foodsci .biotechnol,2012,21(6):1603-1610.17 donghua jiang ,hao ji,yan ye ,et al . studies on screening of higher -aminobutyricacid-producing monascus and optimization of fermentative parametersj.eur food res techno

31、l，（2011）232:541547.18 姜翠紅.深黃被孢霉利用粗甘油生產(chǎn)-亞油酸的研究d.大連理工大學(xué)，2011,6（27）：5758.19 milan ertk,zuzana adamechov,and kobkul laoteng.microbial production of-linolenic acid：submerged versus solid-state fermentationsj.food sci.biotechnol，2012,21（4）：921926.20 孫繼民，王衛(wèi)衛(wèi)，馬慶輝等.復(fù)合誘變被孢霉原生質(zhì)體獲高產(chǎn)-亞麻酸的研究j.2011，(20)6:824829.21

32、 eduardo l.health effects of oleic acid and long chain omega一3 fatty acid (epa and dha) enriched milks. a review of intervention studiesj.pharmacological research,2010,61(3):200一207.22 doornbos b,van goor s a,dijck brouwer d a j,et al.supplementation of a low dose of dha or dha+aa doesnot prevent pe

33、ripartum depressive symptoms in a small pop-ulation based samplej.progress in neuro一psychopharmacoloy&biological psychiatry,2009,33(l):49一52.23 lopez huertas e.health effects of oleic acid and long chain omega-3 fatty acids (epa and dha) enriched milks.arevivew of intervention studies j.pharmaco

34、logical research,2010,61(3):200207.24 jin liu,milton sommerfeld,qiang hu. screening and characterization of isochrysis strains and optimization of culture conditions for docosahexaenoic acid productionj.appl microbiol biotechnol，2013（97）：47854798.25 郝夕祥，張家祥，田延軍等.l-蘋(píng)果酸生產(chǎn)、提取及一步發(fā)酵法發(fā)酵機(jī)理研究j.山東食品發(fā)酵，2010（3

35、）：36.26 郝夕祥.黃曲霉sfw-7產(chǎn)l-蘋(píng)果酸的研究d.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011，（15）6827 吳亞斌.產(chǎn)l-蘋(píng)果酸重組大腸桿菌的構(gòu)建和發(fā)酵性能研究d.江南大學(xué)，2012（6）28 o.pines,s.even-ram,n.elnathan,et al.the cytosolic pathway of l-malic acid synthesis in saccharomyces cerevisiae:the role of fumaeasej.appl microbiol biotechnol ,(2010)46:393399. 節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇

36、聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇

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40、艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇

41、芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅

42、袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆

43、羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆

44、羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄

45、肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊

46、肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃

47、肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃

48、膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖

49、膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞

50、膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃

51、羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃

52、袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻

53、羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂

54、羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂

55、羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅袁膈莀螄肅蒄蝿螃膅芆蚅螃羋蒂薁螂羇芅蕆螁肀蒀莃袀膂芃螞衿袂蒈薈袈羄芁薄袇膆薇蒀袇艿莀螈袆羈膂蚄裊肁莈薀襖膃膁蒆羃袃莆莂羂羅腿蟻羈肇莄蚇羈艿膇薃羀罿蒃葿罿肁芆螇羈膄蒁蚃羇芆芄蕿肆羆葿蒅蚃肈節(jié)莁螞膀蒈螀蟻羀芀蚆蝕肂薆薂蠆膅荿蒈蚈芇膁螆蚈羇莇螞螇聿膀薈螆膁蒞蒄螅