結(jié)直腸癌cerbBCD44v6及nm23表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相

1、 結(jié)直腸癌結(jié)直腸癌c-erbb-2、cd44v6 及及nm23表達(dá)表達(dá) 與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性研究與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性研究 碩士研究生碩士研究生 張張 建建 兵兵 導(dǎo)導(dǎo) 師師 陳莉教授陳莉教授 腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是當(dāng)今腫瘤治療最棘手的問(wèn)題之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，有90%以上的癌癥病人死于腫瘤的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。研究腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子基礎(chǔ)及其與癌基因及抑癌基因的關(guān)系，已成為目前腫瘤防治研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。真核細(xì)胞增殖調(diào)控是一個(gè)多因素、多環(huán)節(jié)、涉及到細(xì)胞內(nèi)眾多分子事件的復(fù)雜過(guò)程。在細(xì)胞增殖調(diào)控中，大多數(shù)癌基因是促進(jìn)與發(fā)揮正調(diào)作用，而抑癌基因則是抑制與負(fù)調(diào)作用。它們?cè)谡＜?xì)胞中可能有調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生長(zhǎng)、抑制腫

2、瘤形成的作用，它們的失活或缺失會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控或癌變。 癌基因癌基因c-erbb-2又稱為neu 或 her-2。c-erbb-2編碼分子量為185ku 的穿膜蛋白，與表皮生長(zhǎng)因子受體（egfr）同源，該蛋白可以抑制酪氨酸激酶活性，c-erbb-2過(guò)度表達(dá)和擴(kuò)增可見(jiàn)于多種腫瘤。已有很多研究表明，乳腺癌c-erbb-2的高水平表達(dá)常常與較大的原發(fā)瘤體積、較多的腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及較差的內(nèi)分泌治療反應(yīng)性有關(guān)，預(yù)示著更早、更多的術(shù)后復(fù)發(fā)及較短的生存期1，2。 粘附分子粘附分子cd44是淋巴細(xì)胞的一種歸巢受體，為高度異質(zhì)性的單鏈跨膜糖蛋白，參與細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)間的粘連，有標(biāo)準(zhǔn)型（cd44s）和變

3、異型（cd44v）兩型。據(jù)報(bào)道，其變異體cd44v6 過(guò)表達(dá)與結(jié)直腸癌的侵襲能力有關(guān)3，4。核苷二磷酸激酶（核苷二磷酸激酶（ndpk/ nm23）屬nme基因家族，被認(rèn)為參與了同惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的多種調(diào)節(jié)活動(dòng)。nm23異常改變一方面可引起微管聚合而成的紡錘體異常，導(dǎo)致非整倍體形成；另一方面可通過(guò)細(xì)胞骨架及細(xì)胞素等信號(hào)反應(yīng)性的改變引起細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，從而參與侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)嚙齒動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性腫瘤的轉(zhuǎn)移能力與nm23基因的表達(dá)呈密切負(fù)相關(guān)5，bertheau 等6在甲狀腺惡性腫瘤中研究證實(shí)nm23及基因產(chǎn)物的表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)密集，nm23的mrna 下調(diào)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和低生存率有關(guān)。

4、結(jié)直腸癌（結(jié)直腸癌（colorectal carcinoma）是人類常見(jiàn)惡性腫瘤之一，對(duì)人類的健康構(gòu)成了極大威脅。近年來(lái)對(duì)結(jié)直腸癌相關(guān)基因產(chǎn)物的檢測(cè)已逐步和早期診斷、發(fā)病機(jī)制、病理特征、估計(jì)預(yù)后等密切聯(lián)系起來(lái)，但研究結(jié)果不盡一致7-10。目前分子病理學(xué)研究認(rèn)為，結(jié)直腸癌的發(fā)生是個(gè)多階段、多因素作用的過(guò)程，主要是由于癌基因激活、抑癌癌基因激活、抑癌基因及基因及dna修復(fù)基因突變或功能缺失所致修復(fù)基因突變或功能缺失所致。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法同時(shí)檢測(cè)結(jié)直腸癌中癌基因蛋白c-erbb-2、cd44v6及nm23的表達(dá)，并探討其與病理特征和臨床預(yù)后的相關(guān)性。 1.1材料材料1.1.1臨床資料： 92

5、例結(jié)直腸癌： 28例：有十年以上隨訪結(jié)果 64例：無(wú)隨訪結(jié)果以上病例均為結(jié)直腸原發(fā)性腺癌，不含腺瘤癌變的病例，都只作了結(jié)直腸癌根治手術(shù)，未作化療、放療等輔助治療。男性49例，女性43例，年齡2475歲（中位55歲）。結(jié)腸癌27例，直腸癌65例。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（uicc）的tnm分期標(biāo)準(zhǔn)11（見(jiàn)表1）作臨床分期：期19例，期28例，期37例，期8例。表表1 uicc結(jié)直腸癌結(jié)直腸癌tnm分期標(biāo)準(zhǔn)分期標(biāo)準(zhǔn) a. nm定義定義 分期分期 描述描述原發(fā)腫瘤（t） tx 原發(fā)腫瘤資料不詳 t0 原發(fā)灶不能確定 tis 原位癌 t1 腫瘤侵入粘膜下層 t2 腫瘤侵入肌層 . t3 腫瘤穿過(guò)肌層到漿膜下或

6、至無(wú)腹膜的結(jié)腸周圍或直腸周圍組織 t4 腫瘤穿過(guò)臟層腹膜或直接侵入其它器官組織表表1 uicc結(jié)直腸癌分期結(jié)直腸癌分期 a. t m定義定義 分期分期 描述描述區(qū)域淋巴結(jié)（n） nx 區(qū)域淋巴結(jié)資料不詳 no 無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 n1 腫瘤轉(zhuǎn)移至13個(gè)結(jié)腸（直腸）周圍淋巴結(jié) n2 腫瘤轉(zhuǎn)移至4個(gè)結(jié)腸（直腸）周圍淋巴結(jié) n3 腫瘤轉(zhuǎn)移至主要血管沿途的任何淋巴結(jié)表表1 uicc結(jié)直腸癌分期結(jié)直腸癌分期 a. tn定義定義 分期分期 描述描述遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（m） mx 不能確定有無(wú)轉(zhuǎn)移 m0 無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 m1 有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 表表1 uicc結(jié)直腸癌分期結(jié)直腸癌分期 b. 分期標(biāo)準(zhǔn)分期標(biāo)準(zhǔn) 期別期別 t n m 0

7、 tis n0 m0 t1 ,t2 n0 m0 t3,t4 0 0 ny 1,2,3 0 ny ny 1 1.1.2病理資料：92例結(jié)直腸癌中，高分化腺癌16例，中分化腺癌45例，低分化腺癌21例，粘液腺癌10例。對(duì)全部病例觀察了鏡下腫瘤生長(zhǎng)方式（推進(jìn)式為主34例，圖1；浸潤(rùn)性為主58例，圖2）以及瘤周淋巴樣細(xì)胞聚集情況（21例見(jiàn)有大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)，圖3；71例無(wú)大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)，圖2）。 1.1.3主要試劑及實(shí)驗(yàn)材料： c-erbb-2 單克隆抗體（克隆系tab250），工作濃度1：100；cd44v6單克隆抗體（克隆系2f10）, 工作濃度1：100；nm23單克隆抗體（克隆系m-04

8、21），工作濃度1：80?？乖迯?fù)液為0.01m、ph6.0 枸櫞酸鹽緩沖液，dab顯色。以上試劑、二抗及sp試劑盒均為dako公司產(chǎn)品。免疫標(biāo)記陽(yáng)性對(duì)照組織來(lái)自乳腺癌、胃癌。 1.2 方法方法 1. 2.1 標(biāo)本及玻片的處理：所有標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，34m連續(xù)切片。每例選取四張切片貼于經(jīng)多聚賴氨酸處理的玻片上，70 oc烘烤2小時(shí)，1張進(jìn)行he染色，其余3張進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。 1.2.2 he染色： 主要步驟：主要步驟： 石蠟切片石蠟切片 脫蠟脫蠟 梯度乙醇水化梯度乙醇水化 蘇木素染色蘇木素染色 鹽酸乙醇分化鹽酸乙醇分化 返藍(lán)返藍(lán) 伊紅染色伊紅染色 梯度乙醇脫水梯度乙醇脫

9、水 透明透明 封固封固 1.2.3 c-erbb-2、cd44v6及 nm23免疫組織化學(xué)染色： 主要步驟：主要步驟： 石臘切片脫蠟至水石臘切片脫蠟至水 去內(nèi)源性酶去內(nèi)源性酶 抗原修復(fù)（高壓鍋煮沸放氣抗原修復(fù)（高壓鍋煮沸放氣3分鐘分鐘,nm23不需）不需） 一抗一抗 二抗二抗 sp復(fù)合復(fù)合物物 dab顯色顯色 水洗，蘇木素復(fù)水洗，蘇木素復(fù)染，封片。染，封片。 1.1.2.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析方法： c-erbb-2、cd44v6 陽(yáng)性定位在細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒，nm23陽(yáng)性定位在細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒。著色細(xì)胞10%為陰性，10%為陽(yáng)性。1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法： 運(yùn)用stata 7.

10、0統(tǒng)計(jì)軟件（美國(guó)計(jì)算機(jī)資源中心研制）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。不同組間表達(dá)率的比較采用fisher精確檢驗(yàn)；對(duì)有隨訪結(jié)果的病例用cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行單因素和多因素生存分析，并對(duì)有預(yù)后意義的指標(biāo)作出kaplan-meier生存曲線。2.1 結(jié)直腸癌癌基因蛋白表達(dá)與臨床病結(jié)直腸癌癌基因蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系理參數(shù)的關(guān)系 92例結(jié)直腸癌中，44例c-erbb-2陽(yáng)性（圖4、5），陽(yáng)性率47.8%；51例cd44v6陽(yáng)性（圖6、7），陽(yáng)性率55.4%；39例nm23陽(yáng)性（圖8、9），陽(yáng)性率42.4%。c-erbb-2、cd44v6及nm23表達(dá)與組織分型、uicc分期、腫瘤生長(zhǎng)方式及瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)的

11、關(guān)系見(jiàn)表2。 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n c-erbb-2 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 組織類型 高分化腺癌 16 10 6 37.5 中分化腺癌 45 23 22 48.9 低分化腺癌 21 9 12 57.1 粘液腺癌 10 6 4 40.0 p=0.658 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n cd44v6 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 組織類型 高分化腺癌 16 8 8 50.0 中分化腺癌 45 21

12、24 53.3 低分化腺癌 21 7 14 66.7 粘液腺癌 10 5 5 50.0 p=0.696 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n nm23 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 組織類型 高分化腺癌 16 9 7 43.8 中分化腺癌 45 27 18 40.0 低分化腺癌 21 13 8 38.1 粘液腺癌 10 4 6 60.0 p=0.690 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n c-erbb-2 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)

13、性率陽(yáng)性率% uicc分期 、期 47 31 16 34.0 期 37 15 22 59.5 期 8 2 6 75.0 p=0.018* 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n cd44v6 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% uicc分期 、期 47 28 19 40.4 期 37 10 27 73.0 期 8 3 5 62.5 p=0.009* 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n nm23 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% uic

14、c分期 、期 47 29 18 38.3 期 37 18 19 51.4 期 8 6 2 25.0 p=0.300 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n c-erbb-2 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 腫瘤生長(zhǎng)方式 推進(jìn)式為主 34 21 13 38.2 浸潤(rùn)性為主 58 27 31 53.4 p=0.197 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n cd44v6 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 腫瘤生長(zhǎng)方式 推進(jìn)式為主 34 1

15、7 17 50.0 浸潤(rùn)性為主 58 24 34 58.6 p=0.516 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n nm23 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 腫瘤生長(zhǎng)方式 推進(jìn)式為主 34 23 11 32.4 浸潤(rùn)性為主 58 30 28 48.3 p=0.190 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n c-erbb-2 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 有大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 21 16 5 23.8 無(wú)大量淋巴

16、樣細(xì)胞浸潤(rùn) 71 32 39 54.9 p=0.014* 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n cd44v6 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 有大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 21 13 8 38.1 無(wú)大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 71 28 43 60.6 p=0.084 表表2 c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n nm23 陰性陰性 陽(yáng)性陽(yáng)性 陽(yáng)性率陽(yáng)性率% 瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 有大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 21 11 10 47.6 無(wú)大量

17、淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 71 42 29 40.8 p=0.622注：p為fisher精確檢驗(yàn)值 * 示p0.05 *示p0.01 由表2可見(jiàn)，c-erbb-2表達(dá)與uicc分期及瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)（p0.05），而與組織分型及腫瘤生長(zhǎng)方式無(wú)明顯關(guān)系。cd44v6表達(dá)與uicc分期有關(guān)（p0.01），而與其余參數(shù)無(wú)關(guān)。nm23表達(dá)與上述各項(xiàng)參數(shù)間均無(wú)明顯關(guān)系。2.2 結(jié)直腸癌的單因素和多因素生結(jié)直腸癌的單因素和多因素生存關(guān)系分析存關(guān)系分析隨訪十年以上的28例結(jié)直腸癌臨床病理特征、癌基因蛋白表達(dá)與隨訪結(jié)果見(jiàn)表3。表表3 28例結(jié)直腸癌臨床病理特征、癌基因蛋白例結(jié)直腸癌臨床病理特征、癌基因蛋白表達(dá)與生

18、存資料表達(dá)與生存資料 生存時(shí)間（例） 5年（%） 510年（%）10年（%）組織類型高、中分化腺癌（20） 3(15.0) 10(50.0) 7(35.0)低分化、粘液 腺癌（8） 6(75.0) 2(25.0) 0uicc分期 、期（17） 2(11.8) 8(47.0) 7(41.2) 、期（11） 7(63.6) 4(36.4) 0 腫瘤生長(zhǎng)方式 推進(jìn)式（10） 2(20.0) 3(30.0) 5(50.0) 浸潤(rùn)性（18） 7(38.9) 9(50.0)2(11.1) 表表3 28例結(jié)直腸癌臨床病理特征、癌基因蛋白例結(jié)直腸癌臨床病理特征、癌基因蛋白表達(dá)與生存資料表達(dá)與生存資料生存時(shí)間（

19、例） 5年（%） 510年（%） 10年（%）瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 有大量淋巴樣細(xì)胞（6） 0 2(33.3) 4(66.7) 無(wú)大量淋巴樣細(xì)胞（22 9(40.9) 10(45.5) 3(13.6) c-erbb-2 (16) 2(12.5) 7(43.75) 7(43.75) (12) 7(58.3) 5(41.7) 0 cd44v6 (14) 4(28.6) 3 (21.4) 7(50.0) (14) 5(35.7) 9(64.3) 0 nm23 (15) 7(46.7) 7(46.7) 1(6.6) (13) 2(15.4) 5(38.5) 6(46.1) 對(duì)表3進(jìn)行單因素cox模型分析

20、，結(jié)果見(jiàn)表4。 表表4. 結(jié)直腸癌單因素生存分析結(jié)直腸癌單因素生存分析(cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型比例風(fēng)險(xiǎn)模型)結(jié)果結(jié)果 風(fēng)險(xiǎn)比 標(biāo)準(zhǔn)誤 z統(tǒng)計(jì)量 p值 95可信區(qū)間組織分型 4.316485 2.070272 3.05 0.0021.686075 11.05054uicc分期 6.158393.069948 3.65 0.0002.318166 16.36025 腫瘤生長(zhǎng)方式 3.236392 1.677992 2.27 0.023 1.171477 8.941054瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn) 5.977281 4.484426 2.38 0.0171.373706 26.00839c-erbb-2 5.5

21、19218 2.756547 3.42 0.0012.073714 14.68947cd44v6 2.576888 1.232054 1.98 0.0481.009535 6.577633nm23 .2552479 .1230412 -2.83 0.005.0992302 .6565691 由表4可見(jiàn)，結(jié)直腸癌組織分型、 uicc分期、腫瘤生長(zhǎng)方式、瘤周大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)及c-erbb-2、cd44v6、nm23表達(dá)均與預(yù)后有關(guān)（p0.05）。對(duì)表3進(jìn)行多因素cox模型分析結(jié)果見(jiàn)表5 表表5. 結(jié)直腸癌多因素生存分析結(jié)直腸癌多因素生存分析(cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型比例風(fēng)險(xiǎn)模型)結(jié)果結(jié)果 風(fēng)險(xiǎn)比 標(biāo)準(zhǔn)

22、誤 z統(tǒng)計(jì)量 p值 95可信區(qū)間uicc分期 10.88877 6.41264 4.05 0.000 3.43310934.53587c-erbb-2 5.724749 3.2123253.11 0.002 1.90599717.19454nm23 .3072231 .1580824 -2.29 0.022 .1120639 .8422513 由表5可見(jiàn)，只有uicc分期、c-erbb-2和nm23表達(dá)具有獨(dú)立的預(yù)后意義（p0.05），即uicc、期，c-erbb-2過(guò)表達(dá)及nm23表達(dá)減少與結(jié)直腸癌的不良預(yù)后有關(guān)（圖1a-3a）。 生存率圖1 a uicc分 期的k a p l an_mei

23、er生 存 曲 線生存時(shí)間( 年)0510150.000.250.500.751.00iii、i v期i、i i期 生存率圖2 a c-erbb-2表 達(dá)的k a p l an_meier生 存 曲 線生存時(shí)間( 年)0510150.000.250.500.751.00( + )( - ) 生存率圖3 a nm23表 達(dá)的k a p l an_meier生 存 曲 線生存時(shí)間( 年)0510150.000.250.500.751.00( + )( - )31 c-erbb-2的表達(dá)及其意義的表達(dá)及其意義 c-erbb-2 癌基因 位于17號(hào)染色體q21區(qū)帶上，與表皮生長(zhǎng)因子受體（egfr）基因

24、具有同源性，編碼具有抑制酪氨酸激酶活性的穿膜蛋白（分子量185ku）。通過(guò)分析腫瘤細(xì)胞中c-erbb-2基因在dna、mrna或其產(chǎn)物的不同水平上質(zhì)和量的變化與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移表型之間的相關(guān)性，或通過(guò)基因轉(zhuǎn)染使轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)移能力的實(shí)驗(yàn)，已證明該基因與一些腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。 目前已有較多證據(jù)表明c-erbb-2基因過(guò)表達(dá)與乳腺癌的較差預(yù)后有關(guān)1，2，但有關(guān)該基因與結(jié)直腸癌關(guān)系的研究較少。yamaguchi等12和yang等13報(bào)道發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌c-erbb-2蛋白的陽(yáng)性率顯著高于無(wú)肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌。 nakae等14報(bào)道c-erbb-2蛋白的陽(yáng)性率在dukes d期顯著高于dukes

25、 a、b、c期。本組92例結(jié)直腸癌免疫酶標(biāo)結(jié)果顯示，c-erbb-2陽(yáng)性率與uicc分期呈正相關(guān)（p0.05）,與瘤周大量淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)（p0.05）,但與組織類型及腫瘤生長(zhǎng)方式無(wú)明顯相關(guān)性(p0.05)13,15。對(duì)有10年以上隨訪資料的28例結(jié)直腸癌研究表明, c-erbb-2陰性者5年生存率(87.5%)明顯高于c-erbb-2陽(yáng)性者(41.7% ,p0.05)，并且經(jīng)作多因素cox回歸模型分析提示， c-erbb-2過(guò)表達(dá)與結(jié)直腸癌的不良預(yù)后有關(guān)。32 cd44v6的表達(dá)及其意義的表達(dá)及其意義 cd44是分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白分子,主要參與細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-基質(zhì)之間的

26、特異性粘附過(guò)程。人類cd44基因定位于11號(hào)染色體短臂，全長(zhǎng)約50kb，共由20個(gè)高度保守的外顯子組成。外顯子按照轉(zhuǎn)錄方式不同可分為組成型外顯子（c）和變異性拼接外顯子(v)兩大類,變異性拼接外顯子共有10個(gè),其中較為重要的第6位變異性拼接外顯子(cd44v6)的過(guò)度轉(zhuǎn)錄已被發(fā)現(xiàn)與一些上皮性腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。 有作者報(bào)道cd44v6過(guò)表達(dá)的結(jié)直腸癌易于轉(zhuǎn)移 3，4 ,還有作者報(bào)道cd44v6表達(dá)減少與結(jié)直腸癌的更強(qiáng)侵襲性和不良預(yù)后有關(guān) 9，16，17 ，但morrin等 10 和jungling等18的最近報(bào)道認(rèn)為cd44v6的表達(dá)與結(jié)直腸癌進(jìn)展沒(méi)有明顯關(guān)系。 本組92例結(jié)直腸癌進(jìn)行cd4

27、4v6標(biāo)記的陽(yáng)性率與uicc分期之間具有相關(guān)性（p.01），即、期cd44v6陽(yáng)性率明顯高于、期，但期陽(yáng)性率（73.0%）卻高于期（62.5%）。此外，cd44v6表達(dá)與組織類型、腫瘤生長(zhǎng)方式及瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)間無(wú)明顯相關(guān)性。 在有10年以上隨訪資料的28例結(jié)直腸癌中，cd44v6的表達(dá)與10年生存率間無(wú)明顯相關(guān)性。weg-remers等 17 及chun等19 的研究表明，cd44v6在正常結(jié)腸粘膜內(nèi)很少表達(dá)，而在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性率顯著增高。 因此，cd44基因可能只是在結(jié)直腸癌的腫瘤形成過(guò)程中發(fā)揮一定作用9,19 。33 nm23的表達(dá)及其意義 人類nm23基因定位于17號(hào)染色體長(zhǎng)臂

28、（17q21），該基因全長(zhǎng)8.5kb，由5個(gè)外顯子及4個(gè)內(nèi)含子組成，編碼蛋白質(zhì)分子量約17000（17kda）。nm23基因產(chǎn)物ndpk與微管聚集、g蛋白信號(hào)傳遞、細(xì)胞與周圍組織粘附力、完整的基底膜形成及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等有關(guān)20，21?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)nm23基因主要有h1、h2兩種類型，多數(shù)研究認(rèn)為h1亞型與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系最密切。在人類腫瘤中，該基因的改變有基因丟失、突變、表達(dá)異常22.起初，人們通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)nm23基因具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，以后不少研究報(bào)道結(jié)直腸癌中nm23表達(dá)減少與腫瘤晚期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)23-25，并且tannapfel等 26 研究認(rèn)為nm23表達(dá)減少可作為評(píng)價(jià)結(jié)直腸癌具有淋巴

29、結(jié)轉(zhuǎn)移潛能的一項(xiàng)獨(dú)立指標(biāo)。cheah等27報(bào)道nm23表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床分期呈反比（分期越晚，表達(dá)越少），但與性別、年齡、腫瘤分化程度及5年生存率等無(wú)明顯關(guān)系。最近，katakura等 28 報(bào)道nm23表達(dá)可作為預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌良好預(yù)后的一項(xiàng)獨(dú)立指標(biāo)，但forte等29認(rèn)為nm23尚不能作為結(jié)直腸癌的一項(xiàng)獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。 本組92例結(jié)直腸癌的nm23表達(dá)與組織類型、uicc分期、腫瘤生長(zhǎng)方式及瘤周淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)均無(wú)明顯相關(guān)性，但經(jīng)對(duì)有隨訪結(jié)果的結(jié)直腸癌中nm23表達(dá)作多因素cox回歸模型分析提示，nm23陰性病例預(yù)示更差的預(yù)后。因而我們贊同nm23基因具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移的潛能 28 ，認(rèn)為nm23

30、表達(dá)減少預(yù)示結(jié)直腸癌更強(qiáng)的侵襲性和易于轉(zhuǎn)移擴(kuò)散。 34 其它臨床病理因素其它臨床病理因素341 uicc分期：本研究發(fā)現(xiàn)該分期與c-erbb-2、cd44v6的表達(dá)具有明顯相關(guān)性，提示c-erbb-2、cd44v6癌基因過(guò)表達(dá)的結(jié)直腸癌可能具有更強(qiáng)的侵襲性。通過(guò)對(duì)有隨訪資料的結(jié)直腸癌uicc分期作多因素cox回歸模型分析證實(shí)，該分期具有顯著獨(dú)立的預(yù)后意義 18，29 。342 組織類型：本研究發(fā)現(xiàn)組織類型與c-erbb-2、cd44v6及nm23基因蛋白表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性 13，18，27。雖然單因素cox模型分析顯示低分化腺癌、粘液腺癌的預(yù)后明顯差于高、中分化腺癌 30，但經(jīng)作多因素cox模型分析發(fā)現(xiàn)組織類型不能作為獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo) 31 。 343 腫瘤生長(zhǎng)方式：近年研究認(rèn)為結(jié)直腸癌腫瘤的推擠式（膨脹性）生長(zhǎng)比浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的預(yù)后好31,32。并且jass等 33 提出的結(jié)直腸癌分期方法中將腫瘤生長(zhǎng)方式作為預(yù)后的重要指標(biāo)之一。本組研究顯示，結(jié)直腸癌腫瘤生長(zhǎng)方式與c-erbb-2、cd44v6及nm23的表達(dá)無(wú)明顯關(guān)系。單因素cox模型生存分析顯示浸潤(rùn)性生長(zhǎng)比膨脹性（推擠式）生長(zhǎng)的結(jié)直腸癌預(yù)后要差，但經(jīng)多因素cox模型分析顯示腫瘤生長(zhǎng)方式不能作為獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。344 瘤周淋