細胞培養(yǎng)縮減版

1、實驗六 細胞培養(yǎng)技術(shù)生物教研室生物教研室 朱力宇朱力宇 實驗原理實驗原理 一、一、 什么是細胞培養(yǎng)？什么是細胞培養(yǎng)？ 體外培養(yǎng)（體外培養(yǎng)（in vitro）* 細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng) ： 指從體內(nèi)取出組織、細胞在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、指從體內(nèi)取出組織、細胞在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下，使之生存和生長，并維持其結(jié)適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下，使之生存和生長，并維持其結(jié)構(gòu)和功能特性。構(gòu)和功能特性。 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：直接取材于有機體組織的直接取材于有機體組織的細胞培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：將培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)移到新的容將培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)移到新的容器中，以器中，以1：2

2、的比例繼續(xù)培養(yǎng)的比例繼續(xù)培養(yǎng)。制備游離細胞懸液制備游離細胞懸液胰蛋白酶、膠原酶、胰蛋白酶、膠原酶、edta，破壞細胞間連接破壞細胞間連接分離出不同分離出不同類型的細胞類型的細胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)細胞分離細胞分離1、離心、離心2、利用細胞自身的黏附力、利用細胞自身的黏附力3、抗體吸附、抗體吸附4、流式細胞儀（、流式細胞儀（fcm）5、其他、其他 貼附生長型細胞貼附生長型細胞 懸浮生長型細胞懸浮生長型細胞 二、培養(yǎng)細胞的生長方式及類型二、培養(yǎng)細胞的生長方式及類型成纖維樣細胞成纖維樣細胞上皮樣細胞：上皮樣細胞：都可連成單層都可連成單層懸浮生長型細胞懸浮生長型細胞三、培養(yǎng)

3、細胞的條件三、培養(yǎng)細胞的條件132生生 存存 環(huán)環(huán) 境境溫度溫度氣相氣相ph儀器及耗材儀器及耗材細胞培養(yǎng)室細胞培養(yǎng)室超凈工作臺超凈工作臺 co2培養(yǎng)箱 co2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為為 37，5co2 。提供的提供的3個環(huán)境：個環(huán)境： 溫度，氣體，濕度溫度，氣體，濕度 co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱超凈工作臺超凈工作臺倒置相差顯微鏡倒置相差顯微鏡 倒置顯微鏡倒置顯微鏡培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板培養(yǎng)基及試劑培養(yǎng)基及試劑消化液消化液培養(yǎng)基培養(yǎng)基血清血清掃描電鏡法顯示支原體，附于細胞表面眾多的圓形顆粒為支原體污染問題污染問題 1.支原體污染支原體污染2.細菌污染細菌污染: 能改變培養(yǎng)液的能改變培養(yǎng)液的ph值值，使

4、培養(yǎng)液變混濁。，使培養(yǎng)液變混濁。 細菌生長迅速細菌生長迅速，能消耗營養(yǎng)液和產(chǎn)生毒素。，能消耗營養(yǎng)液和產(chǎn)生毒素。 抑制細胞的生長抑制細胞的生長，毒性大的細菌可很快，毒性大的細菌可很快導(dǎo)致導(dǎo)致細胞崩解死亡。細胞崩解死亡。細菌細菌細胞細胞3.真菌污染真菌污染實例實例干預(yù)因素：干預(yù)因素：藥物、藥物、毒物、毒物、物理因素、物理因素、生物作用、生物作用、相互作用、相互作用、其他其他直接分離的細胞直接分離的細胞原代培養(yǎng)的細胞原代培養(yǎng)的細胞傳代培養(yǎng)的細胞傳代培養(yǎng)的細胞可能的結(jié)果可能的結(jié)果1、2、3、例如：三氧化二砷對白血病細胞的作用例如：三氧化二砷對白血病細胞的作用各種實驗報告要求報告要求實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模簩嶒灢牧虾推鞑模簩嶒灢牧虾推鞑模簩嶒灹鞒蹋ɑ?/p>