水溶性殼聚糖對1型糖尿病小鼠胰腺Th1及Th2相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響

1、    水溶性殼聚糖對1型糖尿病小鼠胰腺th1及th2相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響    楊曉蕾摘 要：該研究旨在探討水溶性殼聚糖（wsc）對1型糖尿?。╰1dm）小鼠胰腺th1、th2相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響。采用多次小劑量鏈尿佐菌素注射的方法建立t1dm小鼠模型，對建模成功的t1dm小鼠給予連續(xù)12周wsc干預(yù)。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測干預(yù)后小鼠胰腺th1相關(guān)細(xì)胞因子ifn-以及th2相關(guān)細(xì)胞因子il-4的mrna表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，wsc能夠有效地降低t1dm小鼠胰腺ifn-的mrna表達(dá)，同時也有效地降低t1dm小鼠胰腺ifn-與il-4的比例。關(guān)

2、鍵詞：1型糖尿病 水溶性殼聚糖 th1細(xì)胞因子 th2細(xì)胞因子：r58 ：a ：1672-3791（2017）07（a）-0183-021型糖尿病（t1dm），又稱胰島素依賴性糖尿病，是由t細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫系統(tǒng)對胰腺內(nèi)胰島細(xì)胞進(jìn)行特異性損傷而引起的一種器官特異性的自身免疫疾病1。相關(guān)研究表明，t1dm的發(fā)生與機體內(nèi) th1細(xì)胞過度活化及th2細(xì)胞被抑制而導(dǎo)致的免疫失衡有關(guān)2。因此，t1dm是否能夠根治的關(guān)鍵就在于能否通過免疫調(diào)節(jié)有效地恢復(fù)被破壞的th1/th2平衡。殼聚糖（chitosan）是自然界存在非常豐富的一類自然資源。現(xiàn)已證明其具有抗腫瘤、抗菌、降低血漿膽固醇水平、清除氧自由基等作用

3、。除此之外，近來的研究還發(fā)現(xiàn)殼聚糖具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性。由此我們推測，殼聚糖作為一種生物活性物質(zhì)，可能對于t1dm等自身免疫疾病的免疫失衡狀況具有一定的調(diào)節(jié)作用。鑒于此，該研究擬通過檢測水溶性殼聚糖（wsc）對t1dm小鼠胰腺th1、th2細(xì)胞因子表達(dá)的影響，考察殼聚糖對t1dm小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。1 材料與方法1.1 t1dm小鼠模型的建立及實驗分組80只昆明種雄性小鼠，3周齡時購入。分為兩組，正常對照組20只，模型組60只。于4周齡時開始按照40 mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)5 d進(jìn)行鏈尿佐菌素（stz）注射。注射后對小鼠的非禁食血糖進(jìn)行測定，連續(xù)3 d高于11.1 mmol/l的小鼠認(rèn)為建模成

4、功。選取建模成功的t1dm小鼠40只，隨機分為兩組，每組20只，分別為wsc干預(yù)組以及t1dm對照組。wsc干預(yù)組以0.6% wsc水溶液代替正常飲水自由飲用，t1dm對照組正常飲水，連續(xù)觀察12周。正常飲水的正常小鼠20只作為正常對照組。1.2 總rna抽提及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（rt-pcr）半定量檢測分別取各組小鼠胰腺，采用結(jié)合液氮冷卻的trizol法抽提總rna，兩步法rt-pcr檢測目的基因mrna水平變化。以-actin為內(nèi)參，將其與目的基因一起經(jīng)過相同操作步驟和最佳條件，進(jìn)行pcr擴增。應(yīng)用ipp軟件分析獲得目的基因mrna擴增產(chǎn)物的電泳條帶灰度值，計算相對表達(dá)量。1.3 統(tǒng)計

5、分析所有數(shù)據(jù)均采用（ ）表示。采用統(tǒng)計學(xué)軟件spss 17.0進(jìn)行 t檢驗。2 結(jié)果2.1 wsc對t1dm小鼠胰腺th1和th2相關(guān)細(xì)胞因子mrna表達(dá)的影響干預(yù)12周后，與t1dm對照組相比，wsc顯著降低了干預(yù)組小鼠胰腺ifn- mrna表達(dá)水平，而wsc干預(yù)組與正常對照組則無顯著性差異。il-4在各組中的表達(dá)無明顯差異。與ifn-表達(dá)趨勢一致，wsc干預(yù)組的ifn-/il-4比例顯著低于t1dm對照組，與正常對照組無顯著差異（見圖1）。3 討論t1dm的發(fā)生與th1細(xì)胞過度活化及th2細(xì)胞被抑制所導(dǎo)致的免疫失衡密切相關(guān)，因此常規(guī)的臨床治療方法（如胰島素療法）只能在一定程度上緩解t1dm

6、的癥狀，并不能從根本上減輕自身免疫系統(tǒng)對胰島細(xì)胞的損傷。免疫調(diào)節(jié)治療作為一種潛在的有望能夠根治t1dm的治療方法，受到了研究者的廣泛關(guān)注。殼聚糖在自然界中資源豐富，且具有廣泛的生物學(xué)活性。相關(guān)研究已證實，殼聚糖對于細(xì)胞免疫和體液免疫都具有一定免疫調(diào)節(jié)活性3-6。但是目前關(guān)于wsc對t1dm等自身免疫性疾病的免疫調(diào)節(jié)治療作用卻還未有報道。本研究中，在干預(yù)12周后，wsc顯著降低了wsc干預(yù)組小鼠胰腺中th1細(xì)胞因子ifn-的mrna表達(dá)水平，說明wsc能夠從局部以及整體水平上抑制th1細(xì)胞及th1細(xì)胞因子介導(dǎo)的胰島自身免疫反應(yīng)，延緩t1dm的發(fā)展。同時，該研究也發(fā)現(xiàn)wsc干預(yù)顯著降低了t1dm小

7、鼠胰腺中ifn-/il-4比例，使t1dm小鼠體內(nèi)已經(jīng)偏向th1極化的th1/th2平衡有了一定程度的恢復(fù)，從而促進(jìn)了由th1細(xì)胞/細(xì)胞因子為主的免疫反應(yīng)向th2細(xì)胞/細(xì)胞因子占優(yōu)勢的反應(yīng)轉(zhuǎn)化，達(dá)到抑制t1dm發(fā)展的作用。這一結(jié)果也與carina porporatto等發(fā)現(xiàn)的口服殼聚糖能夠顯著增強正常大鼠粘膜層及淋巴組織的th2微環(huán)境相一致7。4 結(jié)語該研究顯示，wsc對于t1dm小鼠具有一定的免疫治療作用，而這種免疫治療作用很可能是通過成功恢復(fù)t1dm小鼠體內(nèi)的th1/th2平衡來實現(xiàn)的。但由于機體內(nèi)細(xì)胞因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和調(diào)控方式的多樣性和復(fù)雜性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超乎想象，因此wsc對于t1dm小鼠體內(nèi)th1

8、/th2平衡的恢復(fù)和調(diào)節(jié)是通過何種方式進(jìn)行，以及這種作用是直接的或是間接的還有待于進(jìn)一步更為深入的研究。參考文獻(xiàn)1 tierney l m，m s j，papadakis m a.current medical diagnosis & treatmentm.international edition ed. new york： lange medical books/mcgraw-hill，2002：1203-2015.2 overbergh， l.acute shock induced by antigen vaccination in nod mice j.diabetes，200

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