離體蛙心灌流

1、離體蛙心灌流實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)離體蛙心灌流的方法；觀察鈉、鉀、鈣三種離子對心臟活動的影響。 觀察腎上腺素、乙酰膽堿等因素對心臟活動的影響實驗器材動物：蟾蜍器材：斯氏蛙心套管、套管夾、常用手術(shù)器械、任氏液、張力換能器、蛙心夾、0.65%NaCI溶液、5%NaCI溶液、2%CaCI2溶液、1%KCI溶液、1:5000腎上腺素溶液、1:10000乙酰膽堿溶液、300u/ml肝素溶液 實驗方法與步驟1、離體蛙心的制備：雙毀髓t左主動脈結(jié)扎t左右兩主動脈下方活結(jié)備用t剪口，插 管（管內(nèi)盛任氏液與肝素）7結(jié)扎備用線（套管+左右主動脈）7剪斷動脈t結(jié)扎并剪 斷靜脈。2、固定套管并用任氏液換洗血液；進入 RM624

2、0系統(tǒng)。3、觀察并記錄正常心搏曲線；4、向套管內(nèi)分別加入以下溶液（0.65%NaCI溶液2d、 5%NaCI溶液2d、1%KCI溶液1-2d、2%CaCI2溶液1d、1:5000腎上腺素溶液1-2d、1:10000乙酰膽堿溶液1-2d ）, 觀察并記錄曲線變化。實驗結(jié)果由波形圖可知，Nacl可使心肌收縮能力減弱，心率減慢，導(dǎo)致心率曲線幅度減小喀昴 聲右*臣1=1 V| 2flW-«-E9此圖為加入5%Nacl溶液后蛙心收縮曲線的變化2 Oi/iiv子更件:訂 亦|I d? £1有波形圖可知，向任氏液中加入 5%Nacl之后心搏曲線的幅度大大降低此圖為加入 Kcl溶液后蛙心收

3、縮曲線的變化KCI導(dǎo)致心臟肌細胞收縮能力減弱，心率減慢子夏It i i«|k| tttax BM aJWM-SI*|屯暉打一d JJ3RW郛 更梟可矽 尸；冷竊円I M 颯優(yōu)臟I Otis 5聯(lián)蘭此圖為加入Cacl2溶液后蛙心收縮曲線的變化由上圖可知，CaC2可使心肌收縮能力增強，心率加快，導(dǎo)致心率曲線幅度 增加。此圖為加入腎上腺素后蛙心收縮曲線的變化由波形圖可知，腎上腺素可使心肌收縮力增強，心率加快。此圖為加入乙酰膽堿后蛙心收縮曲線的變化由上圖可知，乙酰膽堿可使心肌收縮能力減弱， 心率減慢，導(dǎo)致心率曲線幅 度降低。實驗結(jié)果分析離體蛙心仍可具有揭露性收縮，是因為作為蛙心正常起搏點的經(jīng)

4、脈都（其功 能相當于 人體心臟的竇房結(jié)）能產(chǎn)生自動節(jié)律，通過傳導(dǎo)系統(tǒng)維持心臟的波動， 心臟正常德節(jié)律性興奮和收縮活動必須在適宜的禮花環(huán)境才能維持，一旦適宜的環(huán)境被干擾或破壞，心臟后東就會受到影響。Na 離子對心搏曲線的影響： 0.65%NaCl 對蟾蜍來說是等滲溶液 , 完全置 換任氏液后 ,細胞外的 Ca2+ 濃度 ,因此心肌細胞動作電位期間 Ca2+ 內(nèi)流減少， 故心肌細胞漿 Ca2+ 濃度降低，因此心肌收縮力降低。另外，細胞外 K+ 濃度大 大降低 ,使心肌的收縮能力減弱 ,心率減慢。同樣 5%Nacl 溶液可以使細胞外的 Ca2+ 濃度大大降低， 使得心肌細胞動作電位期間 Ca2+ 內(nèi)

5、流減少， 故心肌故心 肌細胞漿Ca2+濃度降低，從而心肌收縮力大大降低，加之細胞外K+濃度大大降低,使心肌的收縮能力減弱 ,心率減慢。K離子對心搏曲線的影響：細胞外K+ T時,對興奮性的影響與其濃度升 高的程度有關(guān)當K+輕度或中度升高時,細胞內(nèi)外K+梯度減小,K+外流力量 減小，靜息電位(RP)的絕對值減小，和閾電位(TP)的差值減小，細胞的興奮性升高 當K+大幅度升高時，RP的絕對值減小到-55mv 時,鈉通道的開放效率降低， 鈉通道逐漸失活 ,細胞的興奮性降低或喪失 ,嚴重時,可導(dǎo)致心肌停搏于舒張狀態(tài) . 此時,僅由 Ca2+ 來構(gòu)成動作電位 ,故上升支小而緩慢 ,使興奮傳導(dǎo)性降低 .當細

6、胞 外K+ T時,細胞膜對鉀的通透性升高，心室肌細胞復(fù)極過程加速，平臺期縮短， 不應(yīng)期也縮短 .高鉀對心肌收縮功能有抑制作用 .因為細胞外的鉀和鈣在細胞膜上有競爭性 抑制，因此當膜外K+ T時,平臺期內(nèi)流的Ca2+減少,心肌細胞內(nèi)的Ca2+濃度 難于升高,減小了 Ca2+ 的興奮-收縮偶聯(lián)作用 ,從而減低了心肌的收縮能力 .Ca 離子對心搏曲線的影響： 細胞外 Ca2+ 在心肌細胞膜上對 Na+ 的內(nèi)流有 競爭性的抑制作用 ,稱為膜屏障作用 .因此,細胞外 Ca2+ 濃度發(fā)生變化時 ,與 Na+ 的內(nèi)流和 Ca2+ 的內(nèi)流相關(guān)的電活動都將受到影響 ,而對靜息電位則無明顯 作用.當細胞外Ca2+

7、濃度T時，對Na+的屏障作用T ,由于這種抑制作用,觸發(fā)Na+ 快速內(nèi)流產(chǎn)生0期去極化就比較困難,即TP上移,從而與RP的差距增大,興奮性 降低;發(fā)生興奮后,Na+內(nèi)流的抑制則導(dǎo)致0期去極化速度和幅度降低，傳導(dǎo)性下 降.Ca2+ 內(nèi)流是慢反應(yīng)細胞 0期去極化和快反應(yīng)細胞 2期的主要離子活動 .當細 胞外Ca2+濃度T ,使Ca2+內(nèi)流加快,慢反應(yīng)細胞0期去極化加快加強，傳導(dǎo)性 升高 .細胞膜對 Ca2+ 的通透性升高 ,心室肌細胞平臺期 Ca2+ 內(nèi)流增加,心肌收縮力增 強增快;當細胞外 Ca2+ 濃度過高時,心臟將停搏于收縮狀態(tài) ,稱為鈣僵直。Ach 對心搏曲線的影響： 乙酰膽堿與心肌細胞膜

8、上的 M 型膽堿能受體結(jié)合 , 抑制AC,細胞內(nèi)cAMP濃度降低,肌漿網(wǎng)釋放的Ca2+減少,心肌的收縮力量減弱 心率減慢.乙酰膽堿與竇房結(jié)細胞膜上的Ikach通道結(jié)合，促進K+的外流,最大 復(fù)極電位增大，自律性降低，此外還抑制4期的內(nèi)向電流If,使心率減慢。腎上腺素對心搏曲線的影響：腎上腺素與心肌細胞膜上的 B腎上腺素能受 體結(jié)合 ,激活腺苷酸環(huán)化酶 (AC), 使細胞內(nèi) cAMP 濃度升高 ,激活 PKA 和細胞內(nèi) 的蛋白質(zhì)磷酸化過程 ,使心肌細胞膜上的鈣通道激活 ,動作電位平臺期 Ca2+ 內(nèi) 流增加,心肌收縮力增強；另外去甲腎上腺素能加強4期的內(nèi)向電流If,使心率加 快.在體內(nèi) ,心臟的活動受自主神經(jīng)的雙重支配 ,交感神經(jīng)興奮時 ,其末梢釋放腎上腺素,使心肌收縮力量增強 ,心率加快 ;而迷走神經(jīng)興奮時 ,作用相反注意事項1、制備蛙心標