初級(jí)檢驗(yàn)技師臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)(講義)第五章凝集反應(yīng)

1、資料收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除第五章凝集反應(yīng)細(xì)菌、紅細(xì)胞等 顆?？乖蚩扇苄钥乖ɑ蚩贵w）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。第一節(jié)凝集反應(yīng)的特點(diǎn)凝集試驗(yàn)是一個(gè)定性的檢測(cè)方法，即根據(jù)凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)與否判定結(jié)果陰性或陽(yáng)性；也可進(jìn)行半定量檢測(cè)，即將抗體作一系列稀釋，與抗原結(jié)合產(chǎn)生凝集的最高稀釋倍數(shù) 作為其效價(jià)或滴度。凝集反應(yīng)分為 兩個(gè)階段：抗原抗體的特異性結(jié)合；出現(xiàn)可見(jiàn)的顆粒凝聚。第二節(jié)直接凝集反應(yīng)一、原理細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等 顆粒性抗原，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)參與下可 直接與相應(yīng)抗體結(jié)合 出現(xiàn)凝集。參加 凝集反應(yīng)的抗原

2、稱凝集原，抗體則稱為凝集素。二、方法有玻片法和試管法兩類。（一）玻片凝集試驗(yàn) 主要用于抗原的 定性分析，短時(shí)間便能觀察結(jié)果。一般用來(lái)鑒定菌種或分型；也用于人類ABO血型的測(cè)定。（二）試管凝集試驗(yàn) 是用定量抗原懸液與一系列梯度倍比稀釋的待檢血清混合，保溫靜置后，根據(jù)每 管內(nèi)顆粒凝集的程度，以判斷待檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)?？梢杂脕?lái)協(xié)助臨床診斷或流行病原調(diào)查研究。例如肥達(dá)試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、輸血時(shí)也常用于受體和供體 兩者間的交叉配血試驗(yàn)。第三節(jié)間接凝集反應(yīng)一、原理間接凝集反應(yīng)是將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性

3、凝集現(xiàn)象。二、間接凝集反應(yīng)的類型（一）正向間接凝集反應(yīng) 可溶性抗原致敏載體，用以檢測(cè)標(biāo)本中待測(cè)抗體的凝集反應(yīng)，稱為正向間接凝集反應(yīng)。（二）反向間接凝集反應(yīng) 特異性抗體致敏載體，用以檢測(cè)標(biāo)本中待測(cè)抗原的凝集反應(yīng)，稱為反向間接凝集反應(yīng)。（三）間接凝集抑制反應(yīng) 先將可溶性抗原（或抗體）與相應(yīng)的抗體（或抗原）混合，然后再加入抗原（或抗體）致敏的載體顆粒，則能抑制原先的凝集現(xiàn)象，稱為正向（或反向）間接凝集抑制試驗(yàn)。間接凝集抑制試驗(yàn)可用于檢測(cè)抗體、自身抗體、變態(tài)反應(yīng)性抗體，也可測(cè)定抗原。（四）協(xié)同凝集反應(yīng) 協(xié)同凝集反應(yīng)與間接凝集反應(yīng)的原理相類似，但所用載體為金黃色葡萄球菌 A蛋白（SPA。SPA具有與Ig

4、G的Fc段結(jié)合的特性，因此當(dāng)這種葡萄球菌與IgG抗體連接時(shí)，就成為抗體致敏的顆粒載體。如與相應(yīng)抗原接觸，即出現(xiàn)反向間接凝集反應(yīng)。協(xié)同凝集反應(yīng)也適用于細(xì)菌的直接檢測(cè)。間接凝集反應(yīng)適用于各種抗體和可溶性抗原的檢測(cè)。以載體來(lái)分，常用的為紅細(xì)胞、膠乳顆粒及明膠 顆粒等。三、間接凝集反應(yīng)的載體分類（一）間接血凝試驗(yàn)1. 原理：抗原（或抗體） 包被于紅細(xì)胞表面，成為致敏載體，然后與相應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合，從 而使紅細(xì)胞被動(dòng)的凝聚在一起，出現(xiàn)可見(jiàn)的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。2. 載體：最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細(xì)胞及0型人紅細(xì)胞。致敏的新鮮紅細(xì)胞保存時(shí)間短，且易變脆、溶血和污染，只能使用23天。為此一般在致敏前先

5、將紅細(xì)胞醛化，可長(zhǎng)期保存而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細(xì)胞經(jīng)醛化后體積略有增大， 兩面突起呈圓盤(pán)狀。3. 致敏：致敏用的抗原或抗體要求純度高，并保持良好的免疫活性。4. 血凝試驗(yàn)：可在微量滴定板或試管中進(jìn)行，將標(biāo)本倍比稀釋，一般為1:64。凡紅細(xì)胞沉積于孔底，集中呈一圓點(diǎn)的為不凝集（一）。如紅細(xì)胞凝集，則分布于孔底周圍。以+凝集（紅細(xì)胞沉積于管底呈環(huán)狀，四周有凝集的小塊）的孔為滴度終點(diǎn)。（二）膠乳凝集試驗(yàn)載體為聚苯乙烯膠乳，是一種直徑約為0.8卩m大小的圓形顆粒，帶有負(fù)電荷，可物理性吸附蛋白分子， 但這種結(jié)合牢固性差。膠乳凝集試驗(yàn)分試管法和玻片法兩種。（三）明膠凝集試驗(yàn)將病毒

6、抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上，當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時(shí)，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見(jiàn)的粉紅色凝集。該方法具有高靈敏度、簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于HIV-1抗體和抗精子抗體檢測(cè)等。四、間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，而且能用于抗原或抗體的測(cè) 定，因此在臨床檢驗(yàn)中廣為應(yīng)用。（一）抗原的檢測(cè) 反向間接凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)病原體可溶性抗原，也可用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分。（二）抗體的檢測(cè) 可用于檢測(cè)細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)等感染后產(chǎn)生的抗體，例如間接凝集試驗(yàn)或明膠顆粒凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)抗人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體以診斷艾滋病、 膠乳凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)

7、抗溶血素O等。第四節(jié)自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)原理：抗人O型紅細(xì)胞的單克隆抗體 能與任何種血型的紅細(xì)胞結(jié)合，但不引起凝集反應(yīng)，這種抗體與 另一特異性抗體（或抗原）連接成，檢測(cè)標(biāo)本中的抗原（或抗體）。該反應(yīng)中的紅細(xì)胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞，因此反應(yīng)中的標(biāo)本為受檢者的全血。自身紅細(xì)胞凝集可用于HIV抗體、HBsAg的檢測(cè)，靈敏度與間接血凝試驗(yàn)相仿。第五節(jié)抗球蛋白試驗(yàn)又稱Coombs試驗(yàn)，檢測(cè)抗紅細(xì)胞的不完全抗體。直接Coombs試驗(yàn) 檢測(cè)紅細(xì)胞上的不完全抗體間接Coombs試驗(yàn)檢測(cè)游離在血清中的不完全抗體。不完全抗體就是半抗體，即能與相應(yīng)的抗原結(jié)合，但結(jié)合后在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。 C

8、oombs試驗(yàn)應(yīng)用于血液病的檢測(cè)：如自身免疫性溶血性貧血、藥物誘導(dǎo)的溶血、新生兒溶血癥等。還可采用專一特異性的抗球蛋白的血清如抗IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗補(bǔ)體血清等，分析結(jié)合于紅細(xì)胞上的不完全抗體的免疫球蛋白亞類?！玖?xí)題】顆粒性抗原在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)參與下與相應(yīng)的抗體結(jié)合，出現(xiàn)凝集的試驗(yàn)稱為A. 正向間接凝集反應(yīng)B. 反向間接凝集反應(yīng)C. 直接凝集反應(yīng)D. 協(xié)同凝集法E間接凝集機(jī)制反應(yīng)正確答案C答案解析直接凝集反應(yīng)的原理是細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)參與下可 直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。以下物質(zhì)屬于顆粒性抗原的有A. 破傷風(fēng)桿菌及其外毒素B. SRBC和破傷風(fēng)外毒素C

9、. SRBC和傷寒沙門菌D. 白喉棒狀桿菌和青霉素E. 糖蛋白和脂蛋白正確答案C答案解析SRBC和傷寒沙門菌屬于顆粒性抗原。目前實(shí)驗(yàn)室常采用的以肺炎支原體細(xì)胞膜成分致敏人工明膠粒子檢測(cè)血清中相應(yīng)的抗體屬于A. 協(xié)同凝集反應(yīng)B. 反向間接凝集反應(yīng)C間接凝集抑制反應(yīng)D. 明膠凝集試驗(yàn)E. 直接凝集反應(yīng)正確答案D答案解析明膠凝集試驗(yàn)也是一種間接凝集試驗(yàn)，將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上, 當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時(shí)，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見(jiàn)的粉紅色凝集。該方法具有 高靈敏度、簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于HIV-1抗體和抗精子抗體檢測(cè)等。下述試驗(yàn)方法中，不能用于可溶性抗原檢出的是

10、A. 間接血凝試驗(yàn)B. 反向間接凝集試驗(yàn)C間接凝集抑制試驗(yàn)D. 直接凝集試驗(yàn)E. 間接凝集試驗(yàn)正確答案 D答案解析不能用于可溶性抗原檢出的是：直接凝集試驗(yàn)。檢測(cè)抗紅細(xì)胞不完全抗體可使用的凝集反應(yīng)為A. 協(xié)同凝集反應(yīng)B. 間接凝集反應(yīng)C. 間接血凝試驗(yàn)D. Coombs 試驗(yàn)E. 直接凝集反應(yīng)正確答案 D答案解析抗球蛋白試驗(yàn)，又稱Coombs試驗(yàn)，是檢測(cè)抗紅細(xì)胞不完全抗體的一種很有用的方法。關(guān)于不完全抗體，下列說(shuō)法正確的是A. 不能與抗原結(jié)合B. 與抗原結(jié)合并出現(xiàn)凝集C. 與抗原結(jié)合不出現(xiàn)凝集D. 常為 IgM 類抗體E. 為多克隆抗體正確答案 C答案解析不完全抗體與抗原結(jié)合不出現(xiàn)凝集。膠乳凝集

11、試驗(yàn)屬于A. 沉淀反應(yīng)B. 直接凝集反應(yīng)C. 間接凝集反應(yīng)D. 間接血凝試驗(yàn)E. 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)正確答案 C答案解析膠乳凝集試驗(yàn)屬于：間接凝集反應(yīng)。臨床中，不能用直接 Coombs試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)的疾病是A. 新生兒溶血癥B. 缺鐵性貧血C. 自身免疫性溶血癥D. 檢測(cè)母體Rh（ D）抗體E. 藥物誘導(dǎo)溶血正確答案 B答案解析Coombs試驗(yàn)除廣泛應(yīng)用于血液病的檢測(cè)外，如自身免疫性溶血性貧血、藥物誘導(dǎo)的溶血、新生兒溶血癥等，還可采用專一特異性的抗球蛋白的血清如抗IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗補(bǔ)體血清等，分析結(jié)合于紅細(xì)胞上的不完全抗體的免疫球蛋白亞類。臨床中進(jìn)行肥達(dá)試驗(yàn)最常采用的方法為A. 正向

12、間接凝集反應(yīng)B. 反向間接凝集反應(yīng)C. 玻片凝集法D. 試管凝集法E. 間接凝集抑制反應(yīng)正確答案 D答案解析試管凝集試驗(yàn) 是用定量抗原懸液與一系列梯度倍比稀釋的待檢血清混合，保溫靜置后， 根據(jù)每管內(nèi)顆粒凝集的程度，以判斷待檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)，可以用來(lái)協(xié)助臨床診斷或流 行病原調(diào)查研究。例如肥達(dá)試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、輸血時(shí)也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗(yàn)。將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒表面檢測(cè)人血清中的梅毒螺旋體血清反應(yīng)素試驗(yàn)屬于A. 正向間接凝集反應(yīng)B. 反向間接凝集反應(yīng)C. 協(xié)同凝集反應(yīng)D. 直接凝集反應(yīng)E. 間接凝集抑制反應(yīng)正確答案 A答案解析正向間接凝集反應(yīng) 可溶性抗原致敏載體，

13、用以檢測(cè)標(biāo)本中待測(cè)抗體的凝集反應(yīng)，稱為正 向間接凝集反應(yīng)。臨床中進(jìn)行外斐試驗(yàn)最常采用的方法為A. 正向間接凝集反應(yīng)B. 反向間接凝集反應(yīng)C. 協(xié)同凝集反應(yīng)D. 試管凝集反應(yīng)E. 間接凝集抑制反應(yīng)正確答案 D答案解析試管凝集試驗(yàn) 是用定量抗原懸液與一系列梯度倍比稀釋的待檢血清混合，保溫靜置后， 根據(jù)每管內(nèi)顆粒凝集的程度，以判斷待檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)，可以用來(lái)協(xié)助臨床診斷或流 行病原調(diào)查研究。例如肥達(dá)試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、輸血時(shí)也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗(yàn)。臨床輸血時(shí)用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗(yàn)屬于A. 正向間接凝集反應(yīng)B. 反向間接凝集反應(yīng)C. 協(xié)同凝集反應(yīng)D. 試管凝集反應(yīng)E. 間接凝集抑制反應(yīng)正確答案 D答案解析試管凝集試驗(yàn) 是用定量抗原懸液與一系列梯度倍比稀釋的待檢血清混合，保溫靜置后， 根據(jù)每管內(nèi)顆粒凝集的程度，以判斷待檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)，可以用來(lái)協(xié)助臨床診斷或流 行病原調(diào)查研究。例如肥達(dá)試驗(yàn)、外斐試驗(yàn)、輸血時(shí)也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗(yàn)。以自身紅細(xì)胞或“ O'型紅細(xì)胞檢測(cè)患者血清中冷凝集素的試驗(yàn)屬于A. 正向間接凝集反應(yīng)B. 反向間接凝集反應(yīng)C. 協(xié)同凝集反應(yīng)D. 直接凝集反應(yīng)