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文檔簡介
1、附件1 河北省 初篩實(shí)驗(yàn)室HIV抗體檢測(cè)標(biāo)本登記表標(biāo)本編號(hào)姓名性別年齡地 址初篩試劑及結(jié)果初篩日期檢驗(yàn)者報(bào)告日期備注附件2 河北省 初篩中心實(shí)驗(yàn)室HIV抗體檢測(cè)接收標(biāo)本登記表標(biāo)本編號(hào)姓名性別年齡地 址送檢單位聯(lián)系人及電話驗(yàn)收人初篩試劑及結(jié)果初篩日期送檢日期方法及結(jié)果報(bào)告日期8附件3 HIV抗體檢測(cè)試驗(yàn)記錄 編號(hào)試劑名稱:生物梅里埃試驗(yàn)方法:批號(hào): 效期:室溫: 孵育溫度: 實(shí)驗(yàn)日期:標(biāo)本人群: 標(biāo)本數(shù):試驗(yàn)起始時(shí)間:送檢單位: 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)間:檢測(cè)者: 復(fù)核者:實(shí)驗(yàn)步驟:1. 樣品、試劑、酶標(biāo)板條室溫平衡 分鐘。2. 取 條板條,放在板架上,撕去板條上的封條。3. 在所有板孔中加入100
2、1;L的樣品稀釋液,包括要做質(zhì)控的板孔。4. 在確定的板孔中加入50µL的標(biāo)本或質(zhì)控。設(shè)3個(gè)陰性對(duì)照和1個(gè)HIV1陽性對(duì)照、1個(gè)HIV2陽性對(duì)照。在加入標(biāo)本之后加入質(zhì)控,并填寫加樣順序表(見下表)。5. 在微板上蓋上貼膜,洗板前撕去貼膜,37孵育60分鐘。6. 在進(jìn)行孵育的過程中,準(zhǔn)備以下試劑:(1)洗液(1:25):濃磷酸鹽緩沖液 ml,加蒸餾水 ml 。(2)TMB底物液(1:1):TMB ml,尿過氧化物 ml。(臨用前配制)(3)1M硫酸:取 濃硫酸(98%濃硫酸相當(dāng)于18M),加蒸餾水 ml。7. 磷酸鹽緩沖液浸泡板孔60秒,洗板機(jī)洗板,洗6次。8. 每孔加入100
3、1;LTMB底物液,不要混勻或振蕩,棄去多余的TMB底物液。9. 室溫 環(huán)境中孵育30分鐘,閉光顯色。10. 每孔加入100µL 1M硫酸,終止反應(yīng)。11. 在450nm和620nm雙波長讀取每孔的吸光度,并打印結(jié)果。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12ABCDEFGH結(jié)果分析: 呈陽性反應(yīng),需復(fù)檢;其余均為陰性反應(yīng)。河北省性病艾滋病預(yù)防監(jiān)測(cè)中心HIV抗體檢測(cè)試驗(yàn)記錄 編號(hào)試劑名稱:金豪試驗(yàn)方法:批號(hào): 效期:室溫: 孵育溫度: 實(shí)驗(yàn)日期:標(biāo)本人群: 標(biāo)本數(shù):試驗(yàn)起始時(shí)間:送檢單位: 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)間:檢測(cè)者: 復(fù)核者:實(shí)驗(yàn)步驟:1樣品、試劑、酶標(biāo)板條室溫平衡30分鐘。
4、2將酶聯(lián)反應(yīng)板從密封袋中取出,取下 條板條,放在板架上。按順序編號(hào),設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,兩個(gè)陽性對(duì)照孔,兩個(gè)陰性對(duì)照孔。 3每孔加入50µl樣品稀釋液,取陽性對(duì)照和陰性對(duì)照分別充分混勻后各50µl加入對(duì)照孔中,空白對(duì)照孔只加樣品稀釋液,其余每個(gè)孔加待檢血清50µl,(要先加樣品,后加對(duì)照)輕輕振蕩,充分混勻。并填寫加樣順序表(見 表)。4用不干膠封片封蓋反應(yīng)板,置37溫育30分鐘。5溫育期間配制洗滌液:取20×洗滌液 ml,加蒸餾水 ml。6撕去貼膜,用洗滌液洗5次,然后在吸水紙上拍干。7除空白孔外每孔加酶標(biāo)抗原100µl,用不干膠片封蓋反應(yīng)板。
5、37溫育30分鐘。8. 洗板5次(同步驟6),拍干。9每孔加顯色劑A50µl ,顯色劑B50µl,輕輕振蕩后置37暗處顯色10分鐘,每孔加終止劑50µl。10選擇酶標(biāo)儀450nm和620 nm雙波長測(cè)定,用空白孔調(diào)零點(diǎn),測(cè)定各孔的吸光度。并打印結(jié)果。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12ABCDEFGH結(jié)果分析: 呈陽性反應(yīng),需復(fù)檢;其余均為陰性反應(yīng)。河北省性病艾滋病預(yù)防監(jiān)測(cè)中心HIV抗體檢測(cè)試驗(yàn)記錄 編號(hào)試劑名稱:上??迫A試驗(yàn)方法:批號(hào): 效期:室溫: 孵育溫度: 實(shí)驗(yàn)日期:標(biāo)本人群: 標(biāo)本數(shù):試驗(yàn)起始時(shí)間:送檢單位:試驗(yàn)結(jié)束時(shí)間:檢測(cè)者: 復(fù)核
6、者:實(shí)驗(yàn)步驟:1將試劑盒、樣本室溫平衡30分鐘;2取 條板條,固定于支架,按順序編號(hào),設(shè)2個(gè)空白對(duì)照,3個(gè)陰性對(duì)照和2個(gè)HIV陽性對(duì)照??瞻讓?duì)照孔不加樣品和酶結(jié)合物,只加底物和終止液。在確定的板孔中加入100µL的標(biāo)本或質(zhì)控(要先加樣品,后加對(duì)照)。并填寫加樣順序表(見表);3覆蓋粘膠紙,置37孵育60分鐘;4按1:25的比例稀釋洗滌液,取 ml洗滌液,加入 ml蒸餾水; 5取出已孵育完畢的反應(yīng)板,棄去粘膠紙,吸干板內(nèi)液體;6將洗滌液注滿每孔(約300µl孔),吸干,反復(fù)5次,在干凈紗布上將板拍干;7每孔加酶結(jié)合物1OOµl,取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板,置37孵育30分
7、鐘;8洗滌同步驟5、6;9每孔加入底物緩沖液50µl、TMB50µl,混勻,置37顯色lO分鐘;10加終止液50µl振蕩反應(yīng)板5秒鐘,使之充分混勻;11在酶標(biāo)讀數(shù)儀中,取波長450nm(建議使用雙波長酶標(biāo)儀比色,參考波長630nm), 以空白對(duì)照孔校零,讀取每孔吸收值(加終止液后,務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢)。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12ABCDEFGH結(jié)果分析: 呈陽性反應(yīng),需復(fù)檢;其余均為陰性反應(yīng)。附件4HIV抗體檢測(cè)試驗(yàn)記錄 編號(hào)試劑名稱:萬泰試驗(yàn)方法:酶聯(lián)免疫批號(hào): 效期:室溫:25°C 孵育溫度:37°C 實(shí)驗(yàn)
8、日期:標(biāo)本人群: 標(biāo)本數(shù):試驗(yàn)起始時(shí)間:送檢單位: 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)間:檢測(cè)者: 復(fù)核者:實(shí)驗(yàn)步驟:12. 樣品、試劑、酶標(biāo)板條室溫平衡15- 30 分鐘。13. 取 條板條,放在板架上,撕去板條上的封條。14. 在每孔中加入100µl酶標(biāo)試劑,空白孔除外 。15. 在確定的板孔中加入20µl的標(biāo)本或陰陽性對(duì)照,震蕩混勻。設(shè)1個(gè)空白對(duì)照,3個(gè)陰性對(duì)照和2個(gè)HIV 陽性對(duì)照 ,并填寫加樣順序表(見下表)。16. 在微板上蓋上貼膜(洗板前撕去貼膜),37孵育60分鐘。 17. 配制洗滌液,取10濃縮洗滌液 ml,加去離子水 ml(1:10稀釋)備用。18. 磷酸鹽緩沖液浸泡板孔60秒,洗板機(jī)洗板,每孔6次(程序已編號(hào))。19. 每孔加入顯色劑A、B各50µl,輕輕振蕩混勻 。20. 封板膜封板后37閉光顯色30分鐘 。21. 每孔加入100µl終止液,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。22. 在450nm和620nm雙波長讀取每孔的吸光度,并打印結(jié)果。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12ABCDEFGH結(jié)果分析: 呈陽性反應(yīng),需復(fù)檢;其余均為陰性反應(yīng)。附件5HIV抗體檢測(cè)試驗(yàn)記
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