新型植物基因組DNA快速提取試劑盒使用說明書

1、 新型植物基因組DNA快速提取試劑盒 目錄號(hào)DN15 使用手冊(cè) 實(shí)驗(yàn)室使用，僅用于體外杭州昊鑫生物新型植物基因組DNA快速提取試劑盒目錄號(hào)：DN15目錄編號(hào)包裝單位DN150150次DN1502100次DN1503200次適用范圍：適用于快速提取植物組織、細(xì)胞、真菌基因組DNA?試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：試劑盒組成保存50次100次200次RNaseA(10mg/ml)-20C2501115001111ml緩沖液AP1室溫25ml50ml100ml緩沖液AP2室溫10ml20ml40ml緩沖液AP3/E室溫15ml25ml50ml第一次使用前按說明加指定量乙醇漂洗液WB室溫15ml25ml50

2、ml第一次使用前按說明加指定量乙醇洗脫緩沖液EB室溫15ml20ml40ml吸附柱AC室溫50個(gè)100個(gè)200個(gè)收集管（2ml）室溫50個(gè)100個(gè)200個(gè)本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。儲(chǔ)存事項(xiàng)：1. 裂解液API、AP3/E低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在65c水浴幾分鐘幫助重新溶解（AP3加入乙醇前可加熱，加入乙醇后不可加熱），恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。2. 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。?產(chǎn)品介紹：該試劑盒采用DNA吸附柱和新型獨(dú)特的溶液系統(tǒng)，適合于從含酚類、多糖類和酶抑制物的植物樣品中快速簡單地提取基因組DNA?？稍?/p>

3、30分鐘內(nèi)完成一個(gè)或多個(gè)100mg新鮮或20mg干燥的植物樣品DNA的純化工作。提取過程不需要用到有毒的酚氯仿等有機(jī)物抽提，也不需要用到耗時(shí)的異丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖類、酚類和酶抑制物等雜質(zhì)，純化的DNA可直接用于PCR、酶切和雜交等實(shí)驗(yàn)。新鮮或干燥的植物組織（細(xì)胞）磨碎后經(jīng)裂解液裂解；蛋白質(zhì)、多糖、細(xì)胞殘片被沉淀去除；然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗一離心的步驟，進(jìn)一步將多糖，多酚和細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。?產(chǎn)品特點(diǎn)：1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜

4、，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2. 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。3. 快速，簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成。4. 數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.71.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。杭州昊鑫生物-3 -?注意事項(xiàng)1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf5415c或者類似離心機(jī)。2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到65c備用。3. 緩沖液AP3/E中含有刺激性化合物，操作

5、時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。4. 不同來源的植物組織材料中提取DNA的量會(huì)有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25p,go5. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保pH大于7.5,pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在20C。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫(10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH8.0),但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。?操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量

6、無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入！第一次使用前請(qǐng)先在緩沖液AP3/E中加入指定量無水乙醇！1. 取適量植物組織（新鮮組織100mg或干重組織20mg,可適當(dāng)多取一些樣品彌補(bǔ)粘在研缽上的損失）在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。研磨前，可準(zhǔn)備一個(gè)1.5ml離心管，加入400Ml緩沖液AP1和4VlRNaseA（10mg/ml）室溫備用。2. 轉(zhuǎn)移細(xì)粉（新鮮組織100mg或干重組織20mg）到前面準(zhǔn)備的1.5ml離心管（已加入400Ml緩沖液AP1和4VlRNaseAQ0mg/ml）旋渦振蕩，充分混勻幫助裂解。如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個(gè)輕柔勻漿10秒的步驟

7、幫助裂解。大多數(shù)情況下不需要離心去除未完全裂解的組織，因?yàn)楹竺嬗幸粋€(gè)離心去除的步驟。3. 65c水浴10分鐘，在水浴過程中顛倒離心管2-3次，混合樣品。4. 加入130v緩沖液AP2,充分混勻，冰上放置5分鐘，14,000rpm離心5-10分鐘，小心吸取上清到一個(gè)新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質(zhì)。5. 計(jì)算上清量，加入1.5倍體積的AP3/E（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇！），立即吹打混勻。加入AP3/E可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，但不影響DNA提取。注意將AP3/E直接加入到上清并立即吹打混勻6. 將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,00

8、0rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液（先加650V1離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。7. 加入600V漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇！），12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。8. 加入600V漂洗液WB,12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。9. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。10. 取出吸附柱AC,放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位力口100V洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液可事先在65-70C水浴中預(yù)熱）,室溫放置3-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入吸

9、附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預(yù)計(jì)和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于50口體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。11. DNA可以存放在2-8C,如果要長時(shí)間存放，可以放置在20C杭州昊鑫生物-6-問題與解決方法問題評(píng)論與建議DNA產(chǎn)量低*處理材料過量或者裂解不完全-建議：使用適量的起始材料，充分研磨或者勻漿*結(jié)合條件不恰當(dāng)-建議：步驟5精確估計(jì)上清量，加入1.5倍體積AP3/E量要準(zhǔn)確RNA殘留*植物RNA含量太豐富-建議：提高RNaseA處理濃度未提取到DNA*漂洗液

10、WB中忘記加無水乙醇-建議：第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)，在漂洗?WB中加入指定量無水乙醇。離心柱堵塞*研磨裂解不充分，團(tuán)塊多；裂解物太粘稠；離心力太小-建議：參見步驟2,加一個(gè)離心步驟去除；減低起始材料量，不要處理過量，加大離心力洗脫下來的DNA溶液帶顏色或者膜上有明顯的色素殘留*漂洗次數(shù)不夠-建議：步驟8完成后，加500M乙醇再漂洗一遍*起始材料太多過量-建議：減少起始處理材料，不要過量洗脫下來的DNA產(chǎn)量低* 離心柱殘留有較多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建議：確保做了步驟9,否則殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率。* 使用了水或者其它非最佳液體代替洗脫緩沖液-建議：仔細(xì)閱讀步驟10和注意事項(xiàng)5和只使用洗脫緩沖液EB洗脫。* 洗脫緩沖液量偏低-建議：使用200M洗脫緩沖液洗脫A260吸光值*一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來，干擾了吸光值-建議：將異常偏高洗脫的基因組DNA溶液13,000rpm再離