第十章巴比妥及苯并二氮雜卓類鎮(zhèn)痛催眠藥物的分析

1、CCCONONCOR1R2R3543216HH結(jié)構(gòu)CCCONONC OH5C2H5C2HH巴比妥CCCONONCOH5C2HH苯巴比妥CCCONONC ONaCH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥鈉硫噴妥鈉HCCCONONC SNaC2H5CH3CH2CH2CHCH3物理性質(zhì) 1. 白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉未，具有固定的熔點。 2. 游離巴比妥類藥物微溶或極微溶于水，易溶于乙醇及有機溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而不溶于有機溶劑。 化學(xué)性質(zhì) 巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中都有1,3-二酰亞胺基團，能發(fā)生酮式和烯醇式的互變異構(gòu)，在水溶液中可以發(fā)生二級電離。因此，本類藥物的水溶液顯弱酸性（pKa為7.3-8.

2、4），可與強堿形成水溶性的鹽類。 1. 弱酸性CCCONONCOHR1R2HCCCONONCOR1R2HHCCCONONCOR1R2HCCCONONCOR1R2+ H+ H+pK1=8+ H+ H+pK2=12與強堿的成鹽反應(yīng)：CO NHCNCOOHR1R2+ N aOHCO NHCNCOONaR1R2+ H2O2. 水解反應(yīng)巴比妥類藥物 + NaOHNH3CONHCNCOOHR1R2+ 5NaOH+ 2Na2CO3COONaR1R2+2NH3 二銀鹽白色可溶性一銀鹽取代的巴比妥類藥物，3323AgNO CONa AgNO55（1） 與銀鹽的反應(yīng) 3、與重金屬離子的反應(yīng)CONCNCOCR1R2

3、ONaAg+NaHCO3NaNO3+CONHCNCOCR1R2ONa+ AgNO3+ Na2CO3NaNO3+CONCNCOCR1R2OAgAgAgNO3+CONCNCOCR1R2ONaAg（2）與銅鹽的反應(yīng) 巴比妥類藥物 +紫色或紫色 銅吡啶試液吡啶硫噴妥鈉 +綠色銅吡啶試液吡啶CR1R2COCONHNHCO水吡啶CR1R2COCONNHC OHCR1R2COCONNHCO-+H+部分離子化N+CuSO42NNCu2+SO42-CR1R2COCONNHC O-2+NNCu2+CR1R2COCONNHCOCR1R2COCONNHCOCuNN有色配位化合物有色配位化合物（3）與鈷鹽的反應(yīng)紫堇色鈷

4、鹽巴比妥類藥物堿性 反應(yīng)條件：無水; 所用試劑均應(yīng)不含水分堿性：異丙胺CO NHCONHCOR1R22+Co2+4(CH3)2CHNH2+CoR2R1CO NHCONCOR2R1NCONHCOCONHCH(CH3)2NHCH(CH3)2(CH3)2CHN+H32（4）與汞鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物+汞鹽白色可溶于氨試液）4、 與香草醛（vanillin）的反應(yīng) 棕紅色香草醛巴比妥類藥物濃硫酸紫色-藍(lán)色乙醇5、 紫外吸收光譜特征H2SO4溶液溶液(0.05mol/L)pH9.9緩沖溶液緩沖溶液NaOH溶液溶液(0.1mol/L) (pH 13)巴比妥類藥物的紫外吸收光譜巴比妥類藥物的紫外吸收光譜Anm

5、硫噴妥的紫外吸收光譜硫噴妥的紫外吸收光譜HCl 溶液溶液 (0.1mol/L) NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L) 巴比妥類藥物的紫外吸收光譜特征和其電離的程度有關(guān) 5,5-取代的巴比妥類藥物 在pH=2的酸性溶液中，因不電離，幾乎無明顯的紫外吸收。 在pH=10的堿性溶液中，發(fā)生一級電離于240 nm處有最大吸收。 在pH=13的強堿性溶液中，發(fā)生二級電離，最大吸收紅移至255 nm處。硫代巴比妥類藥物在酸性或堿性溶液中，均有較明顯的紫外吸收。 6、薄層色譜行為特征 對照品對照鑒別（1）與銀鹽的反應(yīng)；（2）銅鹽反應(yīng)二、鑒別試驗（一）、丙二酰脲類反應(yīng)（二）、特殊取代基及元素的反應(yīng)1. 硫

6、元素的反應(yīng) （黑色）白色硫噴妥鈉PbS PbNaOH2 司可巴比妥可使溴試液或碘試液褪色2. 不飽和烴取代基的反應(yīng) 與溴試液或碘試液的反應(yīng) 與KMnO4的反應(yīng)可還原紫色的KMnO4為棕色的MnO2 與NaNO2H2SO4反應(yīng) 苯巴比妥與甲醛H2SO4反應(yīng)生成玫瑰紅色 苯巴比妥與NaNO2H2SO4反應(yīng)生成橙黃色橙紅色 與甲醛H2SO4反應(yīng)硝化反應(yīng)3.芳香取代基的反應(yīng)黃色苯巴比妥423SOHKNO（三）、特征熔點行為巴比妥類的鈉鹽酸 游離巴比妥類藥物 過濾 洗滌 干燥 測熔點苯巴比妥鈉的鑒別 取本品約0.5 g，加水5 ml溶解后，加稍過量稀鹽酸，即析出白色結(jié)晶性沉淀，濾過；沉淀用水洗凈，在10

7、5干燥后，依法測定，熔點為174-178。（四）、吸收光譜特性 紅外分光光度法（一）、苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查 酸度 乙醇溶液的澄清度 中性或堿性物質(zhì) 有關(guān)物質(zhì)（二）、司可巴比妥鈉的特殊雜質(zhì)檢查 溶液的澄清度 中性或堿性物質(zhì) 終點指示：電位法指示（Ag電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極）；或自身指示 （一）、銀量法原理 ：適當(dāng)堿性溶液中，藥物與銀離子定量反應(yīng)，可采用銀量法進行本類藥物及其制劑的含量測定，反應(yīng)摩爾比（11）。溶劑系統(tǒng)：甲醇+3%無水碳酸鈉四、含量測定 苯巴比妥：苯巴比妥： 取本品約0.2 g，精密稱定，加甲醇40 ml使溶解，再加新制的3無水碳酸鈉溶液15 m1，照電位滴定法，

8、用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。每1 ml 硝酸銀滴定液（0.1 mo1/L）相當(dāng)于23.22 mg的C12H12N2O3。 測定方法與計算測定方法與計算原料藥：直接滴定法 %100smTVF百分含量注意事項注意事項（1）無水碳酸鈉應(yīng)新鮮配制（2）AgNO3滴定液應(yīng)新鮮配制（3）銀電極使用前應(yīng)進行處理原理：凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵可與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法進行測定。如司可巴比妥鈉及其膠囊的測定二、溴量法 I22Na2S2O32NaINa2S4O6KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O +Br2（定量過量）CO NHCNCOCHCH2CH2

9、CH3(CH2)2CHCH3ONaCO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaBrBrBr22KI2KBrI2司可巴比妥鈉： 取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。測定方法與

10、計算測定方法與計算原料藥：剩余滴定法 %1000smFVVT）（百分含量注意事項（1）操作中要防止溴和碘的逸失（2）平行條件進行空白試驗可減少溴和碘逸失帶來的誤差。1.在水醇混合溶劑中的滴定法 弱酸性 pKa7.38.4 異戊水醇溶解麝香草酚酞NaOH淡藍(lán)色（三）、酸堿滴定法此法終點判斷較困難 取本品約取本品約0.5 g0.5 g，精密稱定，加乙醇，精密稱定，加乙醇20 m120 m1溶解后，加麝香草溶解后，加麝香草酚酞指示液酚酞指示液6 6滴，用氫氧化鈉滴定液（滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1 mo1/L0.1 mo1/L）滴定，并將滴）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正，即得。每定結(jié)果用空白試驗

11、校正，即得。每l mll ml氫氧化鈉滴定液（氫氧化鈉滴定液（0.1 0.1 mol/Lmol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于22.63 mg22.63 mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3。 異戊巴比妥的含量測定 溶 劑：二甲基甲酰胺 滴定劑：甲醇鈉（鉀） 指示劑：麝香草酚藍(lán) 3、 非水溶液滴定法2、在膠束水溶液中進行的滴定法 溶 劑：表面活性劑-溴化十六烷基三甲基芐胺水溶液 滴定劑：氫氧化鈉滴定液 指示劑：麝香草酚肽 (四)、紫外分光光度法紫外分光光度法1. 直接紫外分光光度法 本法是將樣品溶解后，根據(jù)溶液的pH值選用其相應(yīng)的max處進行直接測定。單組分定量方法： 取裝量差異項

12、下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液；另取硫噴妥對照品，精密稱定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波長處分別測定A，根據(jù)每支的平均裝量計算。每1mg硫噴妥相當(dāng)于1.091mg的C11H17N2NaO2S。 如注射用硫噴妥鈉的含量測定2. 2. 經(jīng)提取分離后的紫外分光光度法經(jīng)提取分離后的紫外分光光度法 根據(jù)巴比妥類藥物具有弱酸性，在氯仿等有機溶劑中易溶，而其鈉鹽在水中易溶的特點，本法可消除干擾物質(zhì)

13、對巴比妥類藥物測定的影響。取鈉鹽加水溶解，加酸酸化，用氯仿提取后再加堿反提。排除輔料或雜質(zhì)的干擾。 測定方法測定方法- -取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)境（如在其一中加酸、堿或緩沖液改變?nèi)芤旱木常ㄈ缭谄湟恢屑铀?、堿或緩沖液改變?nèi)芤旱膒HpH，或在其一中，或在其一中加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將兩者分別稀加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當(dāng)釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當(dāng)波長處，測其吸收度的差值（波長處，測其吸收度的差值（ A

14、A值）。值）。3. 差示分光光度法（A法）ClAAAAAAAAAyxyxzyzx)( )()(參比樣品 供試品在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中分別以供試品在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中分別以x x、y y 表示，干擾物表示，干擾物用用 z z 表示表示3. 定量依據(jù)CA 即，吸收度差值（即，吸收度差值（ A A）僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾）僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，即干擾組分的干擾被消除。組分無關(guān)，即干擾組分的干擾被消除。 可用對照法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量 保留了通常的分光光度法簡易快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點，又無需事先分離，并能消除干擾。特點應(yīng)用（1）于波長240 nm處，測定pH10和pH2兩種溶

15、液的吸收度之差（2）于波長260 nm處，測定pH10和強堿溶液的吸收度之差差示分光光度法測定血清苯巴比妥濃度苯巴比妥紫外吸收光譜和差示光譜 .PB 堿液(pH 13)的吸收光譜 .PB 堿液(pH 10)吸收光譜 .差示光譜a. PB 堿液(pH 10)的吸收光譜b. PB 酸液(pH 2)吸收光譜c. 差示光譜樣品制備：各精取空白血清0 .1 ml 于離心管，分別加入不同濃度的苯巴比妥標(biāo)準(zhǔn)溶液使血清濃度分別為5 .0、10 .0、20 .0、40 .0、60 .0、100 .0、140 .0 g ml-1 ，混勻。每份用二氯甲烷萃取兩次。向萃取液中加入0 .45 molL-1氫氧化鈉溶液4

16、 ml，混勻，離心，抽取氫氧化鈉層供測定。再取血清0.1mL置10mL具塞試管中，氯仿同法萃取，萃取液中加入NH4Cl溶液為參比，在261nm處測吸收度；A=A1-A2，以濃度為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 HPLC法同時測定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的濃度色譜條件：色譜柱 AgilentZORBAX SB- C18柱( 250 4.6mm ,5m) , 流動相為甲醇水乙腈(454510 ） 流速1.0ml/min, 柱溫30, 檢測波長254nm。血樣處理：取內(nèi)標(biāo)溶液100L，60水浴氮氣吹干，加200L待測血清, 加提取液（氯仿：乙酸乙醋=50：50）2ml, 旋渦混合5min,

17、 以4000轉(zhuǎn)/分離心10min, 用吸管吸取上層水層, 棄去。用移液管移取有機相置帶蓋尖底塑料離心管中, 于60水浴中氮氣吹干, 用流動相200L溶解, 取20L進樣測定方法驗證：標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性、精密度（RSD 3%) 、方法回收率、提取回收率（大于87%）、穩(wěn)定性等均符合中國藥典的要求474849關(guān)鍵：關(guān)鍵：石英纖維上吸附劑石英纖維上吸附劑原則：原則：目標(biāo)化合物是非極性時選目標(biāo)化合物是非極性時選擇非極性涂層；目標(biāo)化合物是極擇非極性涂層；目標(biāo)化合物是極性時選擇極性涂層。性時選擇極性涂層。NN12345671,4-苯并二氮雜卓89藥物結(jié)構(gòu)：NNNCH3OCl氯氮卓HNNClH3CO地西泮NNO

18、2NOH硝西泮硝西泮NNNNClH3C阿普唑侖阿普唑侖 1. 苯并二氮雜卓母核 弱堿性 2. 結(jié)構(gòu)中的環(huán)一般比較穩(wěn)定，但在酸性溶液中可水解，形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物。 3.不同pH條件下離子狀態(tài)不同，UV不同 1. 1. 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 氯氮卓氯氮卓 橙紅色橙紅色沉淀沉淀 阿普唑侖阿普唑侖 鹽酸氟西泮鹽酸氟西泮 KBiIKBiI4 4 也生成也生成橙紅色橙紅色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀顏色變深，放置后，沉淀顏色變深， 因此可以相互區(qū)別。因此可以相互區(qū)別。二、鑒別試驗阿普唑侖阿普唑侖 + + 遇硅鎢酸遇硅鎢酸 白色沉淀，藥典中用于鑒別。白色沉淀，藥典中用于鑒別。 ( (一一) )化學(xué)鑒別試驗化學(xué)鑒別試驗XXC氧瓶燃燒法破壞 地西泮地西泮 黃綠色黃綠色 黃色黃色 氯氮卓氯氮卓 黃色黃色 紫色紫色 艾司唑侖艾司唑侖 + H+ H2 2S