常用核酸染料

1、題目：常用核酸染料商品編號(hào)商品名稱激發(fā)/發(fā)射峰應(yīng)用規(guī)格D1306DAPI358/461blueSemi-permeant （半透性）AT-selective （AT-堿基專一性）Mycoplasma(支原體)Chromosome and nuclei counterstain Chromosome banding(復(fù)染劑)10mgD3571（dilactate,乳酸基團(tuán)，水溶性更好）D21490（高純度）H1398Hoechst 33258（二聯(lián)苯胺）；33342（三鹽酸亞精胺）；334580（五水）；激發(fā)峰不同。352/461 bluePermeant (全透性)AT-selectiveMi

2、nor groove-bindingdsDNA-selective binding（雙鏈DNA特異結(jié)合）Cell-cycle studies（細(xì)胞周期）Chromosome and nuclear counterstain（復(fù)染劑）100mgH3569（液體）10mlH21491（高純度）100mgP1304MPP3566P21493PI530/625Impermeant(非透性)Dead-cell stain（死細(xì)胞染料）Chromosome and nuclear counterstain（復(fù)染劑）100mg10ml100mgA1324ACMA419/483 blueUV？AT-selec

3、tive （AT-堿基專一性）Alternative to quinacrine for chromosome Q banding(Q顯帶) Membrane phenomena(膜現(xiàn)象, 陰陽(yáng)離子跨膜運(yùn)動(dòng))100mgS7563SYBR Green I nucleic acid gel stain* 10,000X concentrate in DMSO*494/521雙鏈DNA和寡核苷酸超敏感電泳凝膠染料；定量PCR500ulS75671mlS758550ul，共20瓶S7564SYBR® Green II RNA gel stain *10,000X concentrate in

4、 DMSO*492/513RNA和單鏈DNA染料500ulS75681mlS758650ul，共20個(gè)S7580SYBR® Green nucleic acid stain starter kit試劑盒包括50 µL of SYBR Green I 染料, 50 µL SYBR Green II RNA gel stain 染料和a SYBR Green/Gold gel stain photographic filter個(gè)S34854SYTO® 9-63 fluorescent nucleic acid stain - 5 mM solution in

5、 DMSO419/445-654/675細(xì)胞內(nèi)核酸染料，顏色全，藍(lán)色、綠色、橙色和紅色；與核酸結(jié)合弱，一般不用于復(fù)染劑，能看到染料的在胞質(zhì)內(nèi)擴(kuò)散250ulD1306Y3601N21485P3566DAPI：藍(lán)色YOYO-1：綠色Hoechst s769121:黃色PI: 橙色紅色藍(lán)色、綠色、黃色和橙紅色，核和染色體復(fù)染劑F1200Fura-2, pentapotassium salt細(xì)胞內(nèi)Ca離子指示劑，需微注射1 mgF1221Fura-2, AM乙酰羥甲基酯形式，不帶電荷的親脂性化合物，易于滲透脂膜進(jìn)入活細(xì)胞，釋放Fura-2，與Ca結(jié)合釋放熒光1 mgF1241fluo-3 AM488n

6、m特點(diǎn)：能用488nm可見(jiàn)光激發(fā)，對(duì)生理過(guò)程干涉小。適用廣10 x 50 µgF14201Fluo-4 AM488nm專利產(chǎn)品，信號(hào)更強(qiáng)10 x 50 µg1.核酸染色細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒Cat# Viable cell stainApoptotic cell stainDead cell stainExcitation Application V13240None AF488-Annexin VSYTOX® Green（非透性，深綠色）488nm都是綠色，還有其他通道可選，活細(xì)胞無(wú)色；用于Turkat cells;流式細(xì)胞儀V13241NoneAF488-Anne

7、xin VPI(red)488nm標(biāo)記Annexin V，凋亡細(xì)胞綠色，死細(xì)胞是紅色，活細(xì)胞無(wú)色；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V13242NoneFITC- Annexin VPI(red)488nm標(biāo)記Annexin V，凋亡細(xì)胞綠色，死細(xì)胞是紅色，活細(xì)胞無(wú)色；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V13243NoneYO-PRO®-1(選擇性透過(guò)，綠色)YO-PRO®-1PI(red)488nm標(biāo)記Annexin V，凋亡細(xì)胞中等綠色，死細(xì)胞核酸染色是紅色，活細(xì)胞無(wú)色；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V13244Hoechst 33342 DimHoechst 33342(Blue)-Bright（更

8、亮）PI(red)UV&488nm凋亡細(xì)胞更藍(lán);死細(xì)胞核酸染色是紅色和藍(lán)色，活細(xì)胞藍(lán)色；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V23200NoneBiotin-X annexin V and AF350 streptavidinPI(red)345nm&535nm標(biāo)記Annexin V，活細(xì)胞藍(lán)色，死細(xì)胞核酸染色是紅色；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V23201Hoechst 33342 DimYO-PRO®-1Hoechst 33342YO-PRO®-1PI(red)UV&488nm標(biāo)記核酸，活細(xì)胞藍(lán)標(biāo)記核酸，凋亡細(xì)胞綠色死細(xì)胞核酸染色是紅；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V351

9、12NoneR-Phycoerythtin- Annexin V(Orange)SYTOX® Green488nm標(biāo)記Annexin V，凋亡細(xì)胞橙色，死細(xì)胞核酸染色是紅；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V35113NoneAllophycocyanin- Annexin V(Far Red)SYTOX® Green488nm&633nm標(biāo)記Annexin V，凋亡細(xì)胞紫紅色，死細(xì)胞核酸染色是紅；流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡V35114C12-resauzurin(red)Allophycocyanin- Annexin V(Far Red)SYTOX® Green488

10、nm&633nm凋亡初期：凋亡細(xì)胞紫紅、活細(xì)胞中橙、無(wú)綠色死細(xì)胞，晚期：紫紅、淺橙、綠色，活細(xì)胞：深橙色V35116MitoTracker® RedAF488-Annexin VNone488nm凋亡初期：活細(xì)胞紅色、很少綠色，凋亡期：活細(xì)胞紅色、凋亡細(xì)胞綠色V35121DyeCycle VioletDyeCycle Violet7-AAD（只染死細(xì)胞、紅色）405nm&488or532活細(xì)胞很少紫色、凋亡細(xì)胞深紫色、死細(xì)胞紫色和紅色V35123NonePO-PRO-17-AAD405nm&488or532活細(xì)胞很少紫色、凋亡細(xì)胞深紫色、死細(xì)胞紫色和紅色V35

11、124NonePacific Blue Annexin7-AAD405nm&488or532活細(xì)胞很少紫色、凋亡細(xì)胞深紫色、死細(xì)胞紫色和紅色2.TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒Po-Brdu TUNEL Assay Kit凋亡過(guò)程，DNA鏈斷裂，TDT識(shí)別片段添加Brdu (dUTP), AF488-anti Brdu 抗體結(jié)合上去。另外試劑盒包括PIKit#Cat# substratedyeExcitation Application Kit#1A23210Brdu抗體AF488330nm凋亡細(xì)胞綠色，死細(xì)胞紅色3.蛋白酶細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒Caspase-3在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起信號(hào)放大作用

12、Kit#Cat# substratedyeExcitation Application Kit#1E13183Z-DEVDAMC330nm凋亡細(xì)胞藍(lán)色Kit#2E13184Z-DEVDR110496nm凋亡細(xì)胞綠色引用回復(fù)    特別的“染料”給特別的你：Invitrogen獨(dú)家的SYBR GreenER【字體：大 中 小】時(shí)間：2006年05月23日 來(lái)源：生物通-摘要：    要解決SYBR Green的非特異問(wèn)題，當(dāng)然不是只有一條途徑。所謂條條道路通羅馬，不同于Qiagen或者ABI利用的是提高DNA聚合酶的特異性，“曲線救國(guó)”

13、，Invitrogen公司采用直接改造SYBR Green的方法，發(fā)展出更特異更靈敏的熒光染料SYBR® GreenER qPCR Reagent System。SYBR Green系列熒光染料由于低毒、靈敏度度優(yōu)于EB而日漸受到科研用戶的歡迎，這個(gè)原屬于Molecular Probes公司的專利隨著Probes被并購(gòu)進(jìn)入Invitrogen的大家庭，Invitrogen要優(yōu)化它自然更方便啦。    SYBR® GreenER被Invitrogen稱為新一代定量PCR熒光檢測(cè)方法的核心技術(shù)之一，相比原有的SYBR Green，最大的優(yōu)勢(shì)的發(fā)光強(qiáng)

14、度更強(qiáng)更明亮，使得原來(lái)檢測(cè)不到的低豐度DNA的信號(hào)更容易被檢測(cè)到這也就意味著熒光染料的檢測(cè)靈敏度提高了，從原來(lái)的0.1ng左右提高到6pg，應(yīng)用在定量PCR檢測(cè)中就使得基因表達(dá)數(shù)據(jù)分析更為可靠。此外，對(duì)熒光染料構(gòu)造的修飾使得減少了染料分子對(duì)PCR反應(yīng)的抑制作用。SYBR GreenER和原有的SYBR Green一樣適用相同的濾光片，并不需要增加新的儀器或者新濾光片(filters)。SYBR GreenER可以看作是SYBR Green的兼容升級(jí)版了，具體的升級(jí)優(yōu)化如下： RealTime ready 智力大沖浪！答對(duì)5題，即獲贈(zèng)美國(guó)傲仕優(yōu)質(zhì)保溫杯！升級(jí)step one：快速反應(yīng)與高靈敏度增

15、加結(jié)果可靠性SYBR GreenER這種新穎的DNA結(jié)合染料的一個(gè)顯著特點(diǎn)就是在檢測(cè)信號(hào)上有了大幅度提高，同時(shí)也由于SYBR GreenER消除了一些原有SYBR Green對(duì)PCR反應(yīng)的影響（熒光染料結(jié)合入DNA小溝，阻礙擴(kuò)增反應(yīng)），因此反應(yīng)時(shí)間得到了提升。而對(duì)于定量PCR反應(yīng)來(lái)說(shuō)，時(shí)間越長(zhǎng)代表著反應(yīng)越有可能進(jìn)入平臺(tái)期，影響數(shù)據(jù)分析，因此快速的反應(yīng)也可以在一定程度上增加反應(yīng)的可靠性（見(jiàn)下圖）。（通過(guò)對(duì)目標(biāo)DNA的定量PCR擴(kuò)增，可以從圖中看出SYBR GreenER（綠色）比ABI SYBR® Green Master Mix (紅色)，以及 ABI Power SYBR®

16、; Green Master Mix (藍(lán)色)早3到4個(gè)循環(huán)得到數(shù)據(jù)）同時(shí)也正是由于SYBR GreenER在檢測(cè)信號(hào)方面的改進(jìn)，因此靈敏度在原有的基礎(chǔ)上又進(jìn)了一步，可以百分之百檢測(cè)到3pg gDNA（約一個(gè)人的基因組當(dāng)量），而這在同類產(chǎn)品中可是是并不常見(jiàn)的（見(jiàn)下）。靈敏度的提高對(duì)于檢測(cè)單拷貝基因是十分之重要的，尤其是對(duì)于稀有復(fù)制子，如果檢測(cè)不到很有可能在疾病診斷和治療方面出現(xiàn)紕漏，影響甚大。（這里我們特別就這個(gè)問(wèn)題咨詢了來(lái)自Q廠家的專家Ivy，因?yàn)樯媳碇蠶uantitect正是Q家花旦，Ivy表示，Quantitech可以檢測(cè)低至5個(gè)拷貝的模版，用10pg模版也能得到非常漂亮的曲線（

17、3;“酶”頭一蹙，計(jì)上心來(lái) Qiagen vs.ABI(II)參考文中圖片）（這里順便插一句，我們常常看到廠家的宣傳資料中有和其他品牌的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，這些做實(shí)驗(yàn)的專家們一般只擅長(zhǎng)做自家的產(chǎn)品，人家的產(chǎn)品做的結(jié)果都特不好，所以讀者還是要自己多看多思考哦！）而且Q廠家認(rèn)為光有靈敏度是不夠的，定量的特異性更是非常重要的，Q的特異性是通過(guò)引物設(shè)計(jì)和試劑盒中的酶和緩沖體系共同來(lái)實(shí)現(xiàn)的。試劑盒的特異性體現(xiàn)在：使用同樣的引物時(shí)，Q的體系反應(yīng)僅得到特異性產(chǎn)物，但是其他同類產(chǎn)品的體系會(huì)出現(xiàn)引物二聚體(NTC曲線上升)，Ct值偏高。）升級(jí)Step two：重復(fù)特異性可靠的定量PCR數(shù)據(jù)來(lái)自于高度的特異性和可重復(fù)性，這

18、也正是傳統(tǒng)SYBR Green的缺陷所在，要改善這一點(diǎn)，SYBR GreenER除了采用了新型的這種GreeER染料，而且在混合液里的DNA擴(kuò)增酶也進(jìn)行了化學(xué)修飾，保證其在常溫下不會(huì)擴(kuò)增以及可以長(zhǎng)時(shí)間4°C保存，這種熱啟動(dòng)酶活性減少了非特異性擴(kuò)增。另外SYBR GreenER也同樣采用了UNG，減少污染。這樣得到的混合體系即使是模板量從6pg到1ng都可以保證陰性對(duì)照（NTC，no template control，即將目的DNA以水取代作為模板）的熒光信號(hào)都保持在40持平水平（見(jiàn)下），說(shuō)明了這一混合液的高特異性和高重復(fù)性。升級(jí)Step three：適合不同系統(tǒng)的多種選擇SYBR G

19、reenER目前可以提供三種不同的體系以供選擇，包括· SYBR® GreenER kits for ABI PRISM® （包括 premixed ROX reference dye，獲得對(duì)照） · SYBR® GreenER kits for iCycler® （包括premixed fluorescein，獲得動(dòng)力學(xué)因子（dynamic well factors），可以用于參照） · SYBR® GreenER Universal（生物通專稿）細(xì)胞熒光化學(xué) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、進(jìn)步熟悉熒光顯微鏡的使用方法。2、初

20、步了解幾種常用的熒光染色方法。二、實(shí)驗(yàn)用品熒光顯微鏡、水浴鍋、載玻片、蓋玻片、鑷子、消毒牙簽三、實(shí)驗(yàn)原理熒光法較一般光學(xué)方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、方法簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，因此近年來(lái)熒光組織化學(xué)特別是免疫熒光技術(shù)有了很大的發(fā)展。利用熒光技術(shù)可研究細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分的分布與定位，研究細(xì)胞與組織中物質(zhì)的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)行病理鑒別以及細(xì)胞免疫等方面的研究。 當(dāng)用一種波長(zhǎng)的光(如紫外光)照射某種物質(zhì)時(shí)，這種物質(zhì)會(huì)在極短的時(shí)問(wèn)內(nèi)發(fā)射出較照射波長(zhǎng)為長(zhǎng)的光(可見(jiàn)的光)，這種光就稱為熒光。有些生物材料受到紫外線照射后能直接發(fā)出熒光稱自發(fā)熒光(或直接熒光)；有的生物材料受紫外線照射后并不發(fā)光，但當(dāng)它吸收熒光染料后，也同樣產(chǎn)生

21、熒光，稱間接熒光(或次生熒光)。與生物學(xué)有關(guān)的熒光現(xiàn)象有五種： 1、 自發(fā)熒光 如葉綠索、維生素A的紅色熒光、膠原纖維的藍(lán)綠色熒光、脂褐素的藍(lán)色熒光等。2、 誘發(fā)熒光 通過(guò)誘導(dǎo)劑作用而發(fā)的熒光，如甲醛蒸氣處理可誘發(fā)細(xì)胞和組織中生物單胺類(兒茶酚胺、5羥色胺等)產(chǎn)生熒光。3、熒光染料染色熒光 即經(jīng)染色后熒光染料與細(xì)胞中某些成分結(jié)合而產(chǎn)生的熒光。4、酶誘發(fā)熒光 通過(guò)細(xì)胞內(nèi)酶的作用，使某些不發(fā)熒光的物質(zhì)轉(zhuǎn)換為發(fā)熒光的產(chǎn)物。如細(xì)胞內(nèi)的脂酶可使不發(fā)熒光的二醋酸熒光素分解為發(fā)熒光的熒光素。 5、免疫熒光 熒光染料和抗體以共價(jià)鍵結(jié)合，這種標(biāo)記的抗體再和相應(yīng)的抗原形成抗原抗體復(fù)合物，經(jīng)激發(fā)后發(fā)射熒光，用以辨認(rèn)

22、抗原。細(xì)胞和組織所產(chǎn)生的熒光必須通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行觀察或通過(guò)顯微熒光光度計(jì)進(jìn)行定量測(cè)定。除少數(shù)生活物質(zhì)含有自發(fā)熒光外，大多數(shù)研究需外加熒光染料，進(jìn)行特異性結(jié)合而得以顯示。.四實(shí)驗(yàn)方法(一)幾種熒光染料對(duì)細(xì)胞染色的觀察 細(xì)胞吖啶橙熒光染色的觀察 ：吖啶橙是最經(jīng)典的靈敏的熒光染料，它可對(duì)細(xì)胞中的DNA和RNA同時(shí)染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。1將生長(zhǎng)有培養(yǎng)細(xì)胞的玻片或雞血涂片放入95%乙醇中固定1530分鐘，干燥；2在1%醋酸中酸化30秒；3在標(biāo)本片上滴加足量的001%吖啶橙磷酸緩沖染液，染色5-10分鐘；4用pH48磷酸緩沖液洗1分鐘；50.1molL氯化鈣分化

23、30秒或幾分鐘；6PBS漂洗三次，每次數(shù)秒鐘；7在干凈載玻片上滴滴PBS，將標(biāo)本片有細(xì)胞面向下臨時(shí)封固，或在血涂片上滴加磷酸緩沖液后加蓋玻片臨時(shí)封固；8在熒光顯微鏡下觀察，用藍(lán)紫光激發(fā)濾片，可見(jiàn)細(xì)胞核為綠色，細(xì)胞質(zhì)為橙紅色，但常因細(xì)胞質(zhì)的pH值的變化而呈棕色至鮮紅色。(二)活細(xì)胞雙熒光染色觀察細(xì)胞核和線粒體 一般的生物染料不能穿透細(xì)胞膜，只有當(dāng)細(xì)胞被固定后改變了細(xì)胞膜的通透性，染料才能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。但有些活體染料能進(jìn)入活細(xì)胞，并對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生毒性作用。熒光染料Ho33342和若丹明123都是活體染料。Ho33342能與細(xì)胞中DNA進(jìn)行特異的結(jié)合，若丹明123能與線粒體進(jìn)行特異的結(jié)合。采用兩種熒光染

24、料的混合染液可對(duì)一個(gè)活細(xì)胞的核和線粒體同時(shí)染色。1. 用牙簽在自己口腔頰粘膜處刮取上皮細(xì)胞涂于干凈載玻片上；2.滴一滴雙熒光染液(含025ugmL Ho33342和若丹明123 1ugmL的PBS液)于細(xì)胞上；3.加上蓋玻片(注意防止氣泡)，用指甲油把蓋玻片邊緣封好；4.用落射式熒光顯微經(jīng)觀察。先用高倍鏡觀察細(xì)胞核(采用紫外光激發(fā)濾片雙色束分離器內(nèi)裝阻斷濾片的組合插塊置于光路)，可見(jiàn)核發(fā)藍(lán)熒光。再換油鏡觀察線粒體(換用紫光或藍(lán)光的組合插塊)，在細(xì)胞核附近的胞質(zhì)中可見(jiàn)有一些發(fā)綠光的圓形和短稈狀顆粒分布，即為線粒體。五、熒光組化實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題1每種熒光染料，均有自己的最適PH值，此時(shí)熒光最

25、強(qiáng)。當(dāng)pH改變時(shí)，不僅熒光強(qiáng)度減弱，而且波長(zhǎng)將有所改變，因此熒光檢測(cè)時(shí)要在一定的PH值的緩沖液中進(jìn)行。2一放熒光染色在20。C以下時(shí)熒光比較穩(wěn)定，溫度升高常出現(xiàn)溫度猝滅。3在熒光觀察中，常因激發(fā)光的增強(qiáng)而使樣品熒光很快衰竭，造成觀察和照相困難。為此最好用能量小的長(zhǎng)波長(zhǎng)光進(jìn)行觀察，需照相時(shí)再適當(dāng)增強(qiáng)激發(fā)光。4一般熒光染液的濃度在萬(wàn)分之一以下，甚至億萬(wàn)分之一，也能使標(biāo)本著色。在一定的限度內(nèi)，熒光強(qiáng)度可隨熒光素的濃度增加而增強(qiáng)，但超過(guò)限度，熒光強(qiáng)度反而下降，這是由于熒光分子間的締合而使自身熒光猝滅所致。我發(fā)現(xiàn)用Goldview染色后,隨著電泳時(shí)間的延長(zhǎng),紫外照射下的熒光強(qiáng)度越來(lái)越弱,如下圖:不知道大

26、家用的時(shí)候有沒(méi)有類似的情況出現(xiàn)?有什么好的方法避免嗎? 呵呵,你是直接把Goldview加入到膠中進(jìn)行電泳吧.在電泳時(shí),一般我們都知道核酸由負(fù)級(jí)向正級(jí)泳動(dòng).但如果制膠時(shí)就加入EB或Goldview的話,這些熒光染料也有自己的泳動(dòng)方向-正級(jí)向負(fù)級(jí)!正好和核酸電泳遷移方向相反。你的電壓(160),呵呵,有些偏大(不曉得你的電泳槽和膠的長(zhǎng)度,但感覺(jué)還是蠻大,我們一般常的小于120).,10min后,Goldview泳動(dòng)到紅色上邊框處(下圖),15min后泳動(dòng)到蘭色上邊框處,20min后泳動(dòng)到綠色上邊框處,而紅、蘭、綠方框內(nèi)是沒(méi)有熒光染料或僅有微弱的殘留。由于沒(méi)有了Goldview染色，所以電泳20m

27、in后你觀察不到核酸著色帶。但隱約還是可以看到一點(diǎn)點(diǎn)微弱的著色（黃色豎線處）。不是Goldview染料有問(wèn)題，想避免這種情總發(fā)生，可以將Goldview加入電泳液（如果電泳槽體積小，電泳液更換不頻繁的話。嘿，為了節(jié)約嘛）；也可以制膠時(shí)不加入Goldview，先電泳，后染色；當(dāng)然，也可以把電壓調(diào)小些，電泳時(shí)間短一點(diǎn)！你再試試看！呵呵，EB也是一樣哦。EB染色有問(wèn)題的戰(zhàn)友同樣可以參考！ 馬上就要做熒光檢測(cè)了，可是在園子里一搜居然這么多方法不太明白ho雙染是不是說(shuō)可看出凋亡，可測(cè)出細(xì)胞壞死雙染后壞死細(xì)胞被染成紅色，凋亡細(xì)胞被染成亮蘭色？和是在板子里加完細(xì)胞就加，還是培養(yǎng)小時(shí)，細(xì)胞貼壁后再加？用孔板嗎

28、？不清楚，請(qǐng)各位高手幫忙！謝謝！Hoechest/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理是：早期死亡細(xì)胞膜通透性狀態(tài)的不同是區(qū)分細(xì)胞凋亡和壞死的一個(gè)重要指標(biāo)，凋亡細(xì)胞在進(jìn)入最終溶解階段前，胞膜通透性無(wú)明顯改變，相對(duì)分子質(zhì)量大的、能與DNA結(jié)合的熒光染料（如PI）不能進(jìn)入凋亡細(xì)胞內(nèi)，而相對(duì)分子質(zhì)量小的熒光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被細(xì)胞攝取。利用這一特點(diǎn)，將被檢測(cè)細(xì)胞懸液用熒光素染色，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞懸液中的細(xì)胞熒光強(qiáng)度可區(qū)分正常細(xì)胞、壞死細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。正常細(xì)胞由于對(duì)染料有抗拒性，熒光染色很淺，凋亡細(xì)胞主要攝取Hoecha染料，呈現(xiàn)強(qiáng)藍(lán)色熒光，而壞死細(xì)胞主要攝取碘化丙啶（PI）而呈強(qiáng)的紅色熒光。具體操作是待細(xì)胞處理結(jié)束后（貼壁不是標(biāo)準(zhǔn)），收集約10100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞（96孔板單孔應(yīng)該收集不到這么多的細(xì)胞），分別用PI和Hoecha染料染色后，進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析或熒光顯微鏡觀察。PI及Hoechest3342均使用340nm紫外線激發(fā)，前者熒光為紅色（620nm），后者熒光為藍(lán)色（480nm）。我做過(guò)熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡，但是Hoechst33342單染，效果同雙染差不多，具體操作如下，可供參考：將培養(yǎng)于含蓋玻片的24孔培養(yǎng)板中細(xì)胞，給予不同濃度