無菌室使用與管理方法

1、無菌室使用與管理方法無菌室標(biāo)準(zhǔn)無菌室是微生物檢測(cè)的重要場(chǎng)所與最根本的設(shè)施。 它是微生物檢測(cè)質(zhì)量保證 的重要物質(zhì)根底。因此它的設(shè)計(jì)要按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) -2001 ?潔凈廠房設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)? 、國(guó) 家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的?藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)試行 ?中第十八 條規(guī)定執(zhí)行。微生物實(shí)驗(yàn)室無菌室的施工、安裝、驗(yàn)收應(yīng)按國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) JGJ71-1990 ?無菌室的施工及驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)?執(zhí)行。對(duì)于微生物檢測(cè)工作者和使用 管理者來講， 更大量的工作是進(jìn)行正常管理到日常的使用。 無菌室的標(biāo)準(zhǔn)要符合 GMP 潔凈度標(biāo)準(zhǔn)要求。無菌室的使用管理工作1.無菌室要符合標(biāo)準(zhǔn)要求：無菌室應(yīng)采光良好、防止潮濕、遠(yuǎn)離廁所及污染 區(qū)。面積一

2、般不超過 10m2 ，不小于 5m2 ；高度不超過。由 1 2 個(gè)緩沖間、操 作間組成操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對(duì) ，操作間和緩沖間之間應(yīng)具備滅菌功 能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋 等，不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物；無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整，能耐受清洗消毒。 墻壁與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內(nèi)不應(yīng)安裝 下水道。無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度 100 級(jí) 或放置同等級(jí)別的超凈工作臺(tái)，室內(nèi)溫度控制18 26 C,相對(duì)濕度45% 65%。 緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置能到達(dá)空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空

3、氣潔凈級(jí)別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5Pa，無菌室區(qū)與室 外大氣的靜壓差大于 10Pa 。無菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，室內(nèi)光照應(yīng) 分布均勻，光照度不低于 300lx 。緩沖間和操作間所設(shè)置的紫外線殺菌燈 2 2.5w/m3 ，應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度，要求在操作面上達(dá) 40uw/m2 。不符合要求 的紫外殺菌燈應(yīng)及時(shí)更換。2.建立使用登記制度：藥廠各個(gè)微生物檢測(cè)檢驗(yàn)室都要建立使用登記制度。 在登記冊(cè)中可設(shè)置以下工程內(nèi)容：如使用日期、時(shí)間、使用人、設(shè)備運(yùn)行狀況、 溫度、濕度、潔凈度狀態(tài)沉降菌數(shù)、浮游菌數(shù)、塵埃粒子數(shù) 、報(bào)修原因、報(bào) 修結(jié)果、清潔工作臺(tái)面、地面、墻面、天花板、傳遞窗、門把手

4、、消毒液名 稱等。3建立使用標(biāo)準(zhǔn)操作標(biāo)準(zhǔn)SOP并嚴(yán)格管理：SOP內(nèi)容至少要有以下幾點(diǎn)： 1規(guī)定凈化系統(tǒng)使運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)間要求每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)開啟凈化系統(tǒng)使運(yùn)轉(zhuǎn)至少1h以上，同時(shí)開啟凈化臺(tái)和紫外燈。 2物品進(jìn)入無菌室根本要求：凡進(jìn)入無菌室的物品必須先在第一緩沖間 內(nèi)對(duì)外部外表用消毒劑消毒滅菌，再經(jīng)物流緩沖間、傳遞窗 1h 以上，及無菌空 氣吹干后送入無菌室。 注意帶纖維、 易發(fā)塵物品不得帶進(jìn)凈化實(shí)驗(yàn)室。 無菌室內(nèi) 固定物品不得任意搬出。 3人員進(jìn)入無菌室要求：實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入無菌室不得化裝、帶手表、戒指 等首飾；不得吃東西、嚼口香糖。應(yīng)清潔手后進(jìn)入第一緩沖間更衣，同時(shí)換上消 毒隔離拖鞋，脫去外衣，用消毒液消毒雙

5、手后戴上無菌手套， 換上無菌連衣帽不 得讓頭發(fā)、衣等暴露在外面 ，戴上無菌口罩。然后，換或是再戴上第二副無菌 手套，在進(jìn)入第二緩沖間時(shí)換第二雙消毒隔離拖鞋。再經(jīng)風(fēng)淋室 30s 風(fēng)淋后進(jìn)入無菌室4溫濕度觀察要求：觀察溫度計(jì)、濕度計(jì)上顯示的溫濕度是否在規(guī)定的 范圍內(nèi)，并作為實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄在案。 如發(fā)現(xiàn)問題應(yīng)及時(shí)尋找原因， 及時(shí)報(bào)修 和及時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主管，并將報(bào)修原因和結(jié)果記錄歸檔。5沉降菌落計(jì)數(shù)與浮游菌測(cè)定要求：在每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)，對(duì)操作室和層流 臺(tái)做微生物沉降菌落計(jì)數(shù)， 將結(jié)果記錄在使用登記本上， 并作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始數(shù) 據(jù)記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。 每周 1 次，或在無菌檢查等必要時(shí)， 在每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)對(duì)操

6、 作室和凈化臺(tái)進(jìn)行浮游菌測(cè)定， 將結(jié)果記錄在使用登記本上， 并作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原 始數(shù)據(jù)記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告上。6消毒要求：無菌室每周和每次操作前用 0.1% 新潔爾滅或 2%甲酚液或 其他適宜消毒液常用消毒劑的品種有： 520 倍稀釋的碘伏水溶液、 0.1% 新 潔爾滅溶液、 1：50的84 消毒液、75%乙醇溶液、 3%碘酒溶液、 5%石炭酸來 蘇兒消毒溶液、 2% 戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液處方：對(duì)羥基苯甲酸 甲酯；對(duì)羥基苯甲酸丙酯， 75%乙醇 10ml 等，所用的消毒劑品種與使用要進(jìn) 行有效性驗(yàn)證方可使用， 并定期更換消毒劑的品種 擦拭操作臺(tái)及可能污染的死 角，方法是用無菌紗布浸漬消毒溶液

7、清潔超凈臺(tái)的整個(gè)內(nèi)外表、 頂面、及無菌室、 人流、物流、緩沖間的地板、傳遞窗、門把手。清潔消毒程序應(yīng)從內(nèi)向外，從高 潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)。 逐步向外退出潔凈區(qū)域。 然后開啟無菌空氣過濾器及紫外燈 殺菌 1 2h ，以殺滅存留微生物。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭 工作臺(tái)面，除去室內(nèi)濕氣，用紫外燈殺菌 30min 。7其他要求：如遇停電，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)，離開無菌室。關(guān)閉所有電閘 重新進(jìn)入無菌室前至少開啟機(jī)房運(yùn)轉(zhuǎn) 1h 以上。4. 潔凈度檢查的要求與方法：無菌室在消毒處理后，無菌試驗(yàn)前及操作過程 中需檢查空氣中菌落數(shù)， 以此來判斷無菌室是否到達(dá)規(guī)定的潔凈度， 常有沉降菌 和浮游菌測(cè)定方法。1沉

8、降菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)：以無菌方式將 3 個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室， 在操作區(qū)臺(tái)面左、 中、右 各放1個(gè)；翻開平板蓋，在空氣中暴露30min后將平板蓋好，置°C士°C培養(yǎng)48h , 取出檢查， 3 個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均小于 1 個(gè)。2浮游菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)：用專門的采樣器， 宜采用撞擊法機(jī)制的采樣器， 一般采用狹縫式或離心式采 樣器，并配有流量計(jì)和定時(shí)器， 嚴(yán)格按儀器說明書的要求操作并定時(shí)校檢， 采樣 器和培養(yǎng)皿進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌， 使用的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊 脂培養(yǎng)基或藥典認(rèn)可的其他培養(yǎng)基。使用時(shí)，先開動(dòng)真空泵抽氣，時(shí)間不少于 5min ，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤、

9、轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上采樣器蓋子后 調(diào)節(jié)縫隙高度。置采樣口采樣點(diǎn)后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根 據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿置C 士2.5培養(yǎng)48h，取出檢查，浮游菌落數(shù)平均不得超過 5個(gè)/m3。每批培養(yǎng)基應(yīng)選定3只培養(yǎng)皿做對(duì) 照培養(yǎng)。無菌操作臺(tái)面或超凈工作臺(tái)還應(yīng)定期檢測(cè)其懸浮粒子，應(yīng)到達(dá) 100 級(jí) 一般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀檢測(cè)，并根據(jù)無菌狀況必要時(shí)置換過濾器。5. 定期進(jìn)行潔凈度再驗(yàn)證：定期每季度、半年、 1 年或當(dāng)無菌室設(shè)施發(fā)生重大改變時(shí)，要按國(guó)家標(biāo) 準(zhǔn) GB/T16292-16294-1996 ?醫(yī)藥工業(yè)無菌室區(qū)懸浮粒子、浮游菌和沉降 菌的測(cè)試方法

10、?進(jìn)行潔凈度再驗(yàn)證，以確保潔凈度符合規(guī)定， 保存驗(yàn)證原始記錄， 定期歸檔保存， 并將驗(yàn)證結(jié)果記錄在無菌室使用登記冊(cè)上， 作為實(shí)驗(yàn)環(huán)境原始依 據(jù)及趨勢(shì)分析資料。 并定期對(duì)無菌室的環(huán)境檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行趨勢(shì)分析和評(píng)估， 根據(jù) 評(píng)估結(jié)果， 了解無菌室設(shè)施環(huán)境質(zhì)量的穩(wěn)定狀況及變化趨勢(shì)， 決定是否有必要修 訂相應(yīng)的警戒和糾偏限度。6. 定期更換新的紫外燈管、更換凈化系統(tǒng)的初效、中效、高效頭： 定期至少每年 1 次更換新的紫外燈管，以確保紫外燈管滅菌持續(xù)有效。并同時(shí)在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔保存。至少 2 年 1 次，或按潔 凈度驗(yàn)證實(shí)際情況，定期更換初效、中效、高效頭。以確保凈化系統(tǒng)的功能持續(xù) 有效，并同時(shí)在使用登記本上做好更換記錄，定期歸檔保存。7. 使用過程中應(yīng)盡可能減少人員的走動(dòng)或活動(dòng)： 平時(shí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)盡可能減少 人員的走動(dòng)或活動(dòng)，同向無菌室的門要關(guān)閉或安裝自動(dòng)閉門器使其保持關(guān)閉狀 態(tài)。8. 潔凈度不符合規(guī)定時(shí)立即停止使用：發(fā)現(xiàn)潔凈度不符合規(guī)定時(shí)，應(yīng)立即停 止使用，尋找原因，徹底清潔、必須經(jīng)潔凈度再驗(yàn)證符合規(guī)定后，才再使用，并 同時(shí)將情況記錄在無菌室使用登記冊(cè)上，定期歸檔保存。9. 對(duì)進(jìn)入的外來人員或維修人員進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督： 非微生物室檢驗(yàn)人員不得 進(jìn)入無菌室，對(duì)必須進(jìn)入的外來人員或維修人員要進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督。10. 無菌室的日常管理：建立平安衛(wèi)生