L-精氨酸對慶大霉素致腎毒性的防治作用

1、    L-精氨酸對慶大霉素致腎毒性的防治作用        慶大霉素(GM)為臨床常用的一種抗生素，不合理應用可致腎損害。因此，對GM腎毒性致病機理的研究有重要的臨床意義。NO是近年來發(fā)現(xiàn)的具有多種生物學功能的小分子化合物，在調(diào)節(jié)腎臟生理功能及介導某些腎臟疾病中起重要作用。我們通過應用GM誘導急性腎損害的動物模型，測定此時大鼠體內(nèi)NO的含量，進而探討精氨酸L-arginine(L-arg)對腎毒性的防治作用。一、材料與方法1.GM及硝酸鹽等測定試劑均為分析純試劑，L-arg

2、為上海泊澳生物制品公司產(chǎn)品。2.動物分組及標本收集：雌性SD大鼠體重170200g 42只隨機分為三組。正常組14只，正常飲食，飲水，每日腹腔注射生理鹽水0.5ml 7天。GM組14只，GM 140mg*kg-1/d腹腔注射7天，正常飲水。GM+L-arg 組14只，L-arg 120mg*d-1/只，溶于3ml生理鹽水中灌胃7天，余同GM組。實驗第4天收集24h尿液，檢測尿NAG酶。實驗第8天收集24h尿液測尿滲透壓、尿肌酐、尿NAG酶、尿硝酸鹽及亞硝酸鹽。取血測BUN、Cr、血硝酸鹽及亞硝酸鹽，并計算Ccr。腎標本作光鏡、電鏡觀察。硝酸鹽及亞硝酸鹽測定用鍍銅鎘還原測定法。二、結果1.各組死

3、亡鼠數(shù)：正常組及GM+L-arg組無死亡，GM組實驗第6天死亡1只。2.尿量：正常組為8.78±1.68ml/24h，GM組為10.31±2.88ml/24h,GM+L-arg組為10.29±2.16ml/24h，三組間無顯著性差異。3.尿滲透濃度：GM組、GM+L-arg組明顯低于正常組(P0.01)；GM組與GM+L-arg組無顯著性差異(正常組為1134.29±224.69mmol/L，GM組為736.57±120.94mmol/L，GM+L-arg組為807.14±108.97mmol/L)。4.腎小球功能：見表1。5.尿NA

4、G酶：見表2。6.用藥7天三組間血硝酸鹽及亞硝酸鹽含量：三組間無顯著性差異。其平均值順序為GM組GM+L-arg組正常組(正常組11.703±2.20mol/L；GM組為15.72±3.10mol/L GM+L-arg組為13.56±2.04mol/L)。7.腎組織病理學檢查：(1)GM組：光鏡下腎小球大致正常，主要病變集中在腎小管，以近曲小管受累明顯，部分出現(xiàn)濁腫、空泡變性，部分出現(xiàn)壞死。遠曲小管受累較輕，間質(zhì)有大量炎性細胞浸潤。電鏡下見上皮細胞微絨毛消失。(2)GM+L-arg組：光鏡下整個病變較GM組輕，腎小球大致正常，近曲小管上皮細胞有少量壞死，主要以濁腫

5、、空泡變性為主。間質(zhì)有少量炎性細胞浸潤，蛋白管型、顆粒管型明顯。電鏡下見上皮細胞微絨毛減少。(3)光鏡下GM組、GM+L-arg組分別隨機選10個視野，經(jīng)IBAS計算壞死面積，GM組為6.882%，GM+L-arg組為1.168%。兩組有顯著性差異(P0.05)。 表1用藥7天三組間血BUN、Scr、Ccr及尿NO-x水平比較組別鼠數(shù)BUN(mmol/L)Scr(mol/L)Ccr(ml/min)NO-x(mol/24h)正常組146.616±0.95953.85±10.560.828±0.181233.71±345.39GM組1414.24±

6、4.12*248.77±67.85*0.119±0.078*550.23±166.63GM+L-arg組148.18±2.86152.2±46.940.251±0.096853.33±134.68與正常組比， P0.05； 與GM+L-arg組比，* P0.05 表2三組間尿NAG酶動態(tài)變化組別鼠數(shù)尿NAG酶(U/24h)用藥3天用藥7天正常組1416.63±2.46517.24±1.96GM組1476.3±18.16*63.18±19.98*GM+L-arg組1453.25±

7、;15.355.447±11.65與正常組比， P0.05；與GM+L-arg組比，* P0.05三、討論體內(nèi)L-arg在NOS及一些輔酶作用下生成NO和胍氨酸。NO半衰期很短，迅速氧化成NO-2+NO-3。測定24h尿液中NO-2+NO-3的變化可間接反映體內(nèi)NO的產(chǎn)生Am J Physiol,1993,265:886。本實驗中，我們發(fā)現(xiàn)24小時尿NO-2+NO-3含量，GM組明顯低于正常組，說明GM致腎損害時體內(nèi)NO處于低合成狀態(tài)。L-arg是體內(nèi)合成NO的重要底物，GM致急性腎損害時，腎臟合成L-arg下降，體內(nèi)L-arg處于相對不足狀態(tài)。因此給予L-arg改善體內(nèi)合成L-ar

8、g的不足，提高體內(nèi)NO生成水平，對腎功能改善產(chǎn)生有益作用。國外早在1980年代即用鈣離子拮抗劑防治GM誘發(fā)的急性腎衰Exp Mol Pathol,1985,43:107，其目的在于應用鈣離子拮抗劑的擴張血管作用，改善腎臟血流動力學。我們推測，NO在此起的作用與鈣離子拮抗劑相似。有趣的是用藥7天時，三組間血NO2-+NO3-無顯著性差異，但其平均值順序為正常組GM+L-arg組GM組，與Ccr順序相反。這說明對NO-2+NO-3的清除率為正常組GM+L-arg組GM組，這與國外報道一致Clin Chem,1996,423:440。尿NAG酶是監(jiān)測腎小管損傷的敏感指標。動態(tài)觀察其變化，用藥3天，GM組明顯高于GM+L-arg組，說明GM組損傷重。用藥7天，兩組差異不明顯，但分析每只動物尿酶變化，GM組大部分(8/13只)的結果較3天時更低，而GM+L-arg組織有少量(3/14只)出現(xiàn)上述情況，說明GM組腎小管損傷嚴重，與我們形態(tài)學觀察一致。GM致腎小管壞死與氧自由基的產(chǎn)生有關。一定濃度的NO在體內(nèi)具有對其它氧自由基清除的作用。我們推測本組實驗給予的L-arg對腎小管損傷的防治作用是通過產(chǎn)生一定濃度的NO，NO清除體