紫外可見分光光度計(jì)及其在食品檢驗(yàn)中的發(fā)展和應(yīng)用

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上紫外可見分光光度計(jì)及其在食品檢驗(yàn)中的發(fā)展和應(yīng)用摘要：紫外可見分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器，無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、食品、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域，還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門，紫外可見分光光度計(jì)都有廣泛而重要的應(yīng)用。本文分別就紫外-可見光分光光度法在食品工業(yè)中的這些應(yīng)用作了簡(jiǎn)要介紹。目前利用紫外-可見光分光光度法的各種方法正在逐步發(fā)展，而且隨著社會(huì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，紫外-可見光分光光度法在食品行業(yè)中的應(yīng)用也會(huì)越來(lái)越廣泛。本文將重點(diǎn)介紹uv-v計(jì)的原理，結(jié)構(gòu)，特點(diǎn)及其在食品檢測(cè)中的發(fā)展和應(yīng)用。關(guān)鍵詞：紫外可見分光光度計(jì)；食

2、品檢測(cè)Uv-vis spectrophotometer and its development and application in food inspectionAbstract: UV VIS spectrophotometer is a kind of very important analytical instrument. It has a long history in the chemical, biological, medical, material science, environmental science, environmental science, environm

3、ental science and other modern production and management departments, This article is ultraviolet-visible spectrophotometry respectively, the author introduce the application in food industry. Currently used ultraviolet-visible spectrophotometry methods are gradually developed, and with the developm

4、ent of the society and people living standard rise, ultraviolet-visible spectrophotometry application in the food industry also will be more and more widely. This article focuses on the principle of uv - v meter, structure, characteristics and its development and application in food and food testing

5、.Key words: uv-visible spectrophotometer; Food testing前言l9世紀(jì)50年代，首先出現(xiàn)了用千目觀比色法的納氏(Nessler)比色管，不久有杜氏(Duboscq)比色計(jì)，后者一直沿用到本世紀(jì)的40年代。1911年，使用硒光電池的Berg比色計(jì)制成。而這種光電比色計(jì)是分光光度計(jì)的雛形和基礎(chǔ)。本世紀(jì)3O年代看，由于秉燈、氫燈和各種棱鏡，光學(xué)器材和電學(xué)器材的發(fā)展，美國(guó)Beckman公司的第一臺(tái)分光光度計(jì)終于在1941年問(wèn)世。至60年代，紫外可見光分光光度計(jì)(UVV計(jì))基本上取代了光電比色計(jì) 1957年，美國(guó)Technicon公司按照Skaggs醫(yī)生

6、的方案，推出了世界上第一臺(tái)自動(dòng)化的食品生化分析儀。六十年代以后各種自動(dòng)化分析儀層出不窮。特別是70年代起，各種分光光度計(jì)與計(jì)算機(jī)聯(lián)姻，明顯地?cái)U(kuò)大了儀器功能 現(xiàn)在，分光光度計(jì)作為綜臺(tái)光學(xué)、電學(xué)(尤其是計(jì)算機(jī)技術(shù))和精密機(jī)械學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用， 已廣泛應(yīng)用于食品、藥品、工業(yè)和農(nóng)業(yè)等許多領(lǐng)域。其中以UVV計(jì)系列彰響最廣、應(yīng)用最普遍， 并且還是其他分光光度計(jì)(如原子吸收分光光度計(jì))的基礎(chǔ)。紫外可見分光光度法具有儀器價(jià)格低廉適用性廣泛，尤其是采用微機(jī)控制以來(lái)，該技術(shù)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，成為食品檢測(cè)中必備的一個(gè)常規(guī)儀器，食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值指食品中所含的熱能和營(yíng)養(yǎng)素能滿足人體營(yíng)養(yǎng)需要的程度。食品中的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)必須

7、通過(guò)一定的技術(shù)手段才能準(zhǔn)確檢測(cè)，每種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的定性與定量檢測(cè)都離不開科學(xué)的方法，本文簡(jiǎn)要介紹了紫外可見分光光度法檢測(cè)食品種的某些物質(zhì)的方法。更重要的是，“民以食為天，食以安為先”，食品安全關(guān)乎人們健康和國(guó)計(jì)民生。食品安全除了影響消費(fèi)者健康外，還與食品進(jìn)出口貿(mào)易、國(guó)家聲譽(yù)，乃至社會(huì)安定有著密切關(guān)系。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外食品安全問(wèn)題接連不斷，食品安全問(wèn)題已成為當(dāng)今各國(guó)政府、消費(fèi)者和科技界廣為關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題之一。紫外可見分光光度法在檢測(cè)食品中一些威脅人們健康的因素方面也有重要作用。其應(yīng)用范圍包括：定量分析，廣泛用于各種物料中微量、超微量和常量的無(wú)機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的測(cè)定。定性和結(jié)構(gòu)分析，紫外吸收光譜還可用于推斷

8、空間阻礙效應(yīng)、氫鍵的強(qiáng)度、互變異構(gòu)、幾何異構(gòu)現(xiàn)象等。反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究，即研究反應(yīng)物濃度隨時(shí)間而變化的函數(shù)關(guān)系，測(cè)定反應(yīng)速度和反應(yīng)級(jí)數(shù)，探討反應(yīng)機(jī)理。研究溶液平衡，如測(cè)定絡(luò)合物的組成，穩(wěn)定常數(shù)、酸堿離解常數(shù)等。紫外-可見光分光光度法在食品行業(yè)中的應(yīng)用主要可大致分為在食品成分分析中的應(yīng)用和在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用，其中在食品成分分析中的應(yīng)用主要有紫外-可見分光光度計(jì)在食品酶分析中的應(yīng)用、酸奶中維生素A的測(cè)定、水果汁中果糖的測(cè)定、番茄紅素的測(cè)定、甜蜜素的測(cè)定等；而在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用主要有分光光度法測(cè)定食品中硼砂、紫外可見分光光度法檢測(cè)食品中的鎘、紫外可見分光光度法測(cè)定食品中的蘇丹紅、用分光光度法測(cè)定

9、食品中吊白塊的含量等。1 紫外可見分光光度計(jì)的發(fā)展（一）基本情況1.紫外可見分光光度計(jì)簡(jiǎn)介1852年，(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液層厚度相等時(shí)，顏色的強(qiáng)度與呈色溶液的濃度成比例，從而奠定了分光光度法的理論基礎(chǔ)，這就是著名的比爾朗伯定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論應(yīng)用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域，并且設(shè)計(jì)了第一臺(tái)比色計(jì)。到1918年，制成了第一臺(tái)紫外可見分光光度計(jì)。此后，紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)不斷改進(jìn)，又出現(xiàn)自動(dòng)記錄、自動(dòng)打印、數(shù)字顯示、微機(jī)控制等各種類型的儀

10、器，使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷 提高，其應(yīng)用范圍也不斷擴(kuò)大。2.原理 分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。根據(jù)Lambert-Beer定律：A=bc，（A為吸光度，為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度）可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。3.結(jié)構(gòu) 無(wú)論哪一類分光光度計(jì)都由下列五部分組成，即光源、單色器、狹縫、樣品池，檢測(cè)器系統(tǒng)。(1)光源要求能提供所需波長(zhǎng)范圍的連續(xù)光譜，穩(wěn)定而有足夠的強(qiáng)度。常用的有白熾燈(鎢比燈、鹵鎢燈等)、氣體放電燈(氫燈、

11、氘燈及氙燈等)、金屬弧燈(各種汞燈)等多種。鎢燈和鹵鎢燈發(fā)射3202000nm連續(xù)光譜，最適宜工作范圍為3601000nm，穩(wěn)定性好，用作可見光分光光度計(jì)的光源。氫燈和氘燈能發(fā)射1504O0nm的紫外光，可用作紫外光區(qū)分光光度計(jì)的光源。紅外線光源則由納恩斯特(Nernst)棒產(chǎn)生。汞燈發(fā)射的不是連續(xù)光譜，能量絕大部分集中在253.6nm波長(zhǎng)外，一般作波長(zhǎng)校正用。(2)分光系統(tǒng)(單色器)單色器是指能從混合光波中分解出來(lái)所需單一波長(zhǎng)光的裝置，由棱鏡或光柵構(gòu)成。用玻璃制成的棱鏡色散力強(qiáng)，但只能在可見光區(qū)工作，石棱鏡工作波長(zhǎng)范圍為1854000nm，在紫外區(qū)有較好的分辨率而且也適用于可見光區(qū)和近紅外區(qū)

12、。棱鏡的特點(diǎn)是波長(zhǎng)越短，色散程度越好。所以用棱鏡的分光光度計(jì)，其波長(zhǎng)刻度在紫外區(qū)可達(dá)到02nm，而在長(zhǎng)波段只能達(dá)到5腫。有的分光光系統(tǒng)是衍射光柵，即在石英或玻璃的表面上刻劃許多平行線，刻線處不透光，于是通過(guò)光的干涉和衍射現(xiàn)象，較長(zhǎng)的光波偏折的角度大，較短的光波偏折的角度小，因而形成光譜。(3)狹縫狹縫是指由一對(duì)隔板在光通路上形成的縫隙，用來(lái)調(diào)節(jié)人射單色光的純度和強(qiáng)度，也直接影響分辨率。狹縫可在02mm寬度內(nèi)調(diào)節(jié)，由于棱鏡色散力隨波長(zhǎng)不同而變化，較先進(jìn)的分光光度計(jì)的狹縫寬度可隨波長(zhǎng)一起調(diào)節(jié)。(4)比色杯比色杯也叫樣品池或比色皿，用來(lái)盛溶液，各個(gè)杯子壁厚度等規(guī)格應(yīng)盡可能完全相等，否則將產(chǎn)生測(cè)定誤差

13、。玻璃比色杯只適用于可見光區(qū)，在紫外區(qū)測(cè)定時(shí)要用石英比色杯。(5)檢測(cè)器系統(tǒng)有許多金屬能在光的照射下產(chǎn)生電流，光愈強(qiáng)電流愈大，此即光電效應(yīng)。因光照射而產(chǎn)生的電流叫做光電流。受光器有兩種，一是光電池，二是光電管。光電池的組成種類繁多，最常用的是硒光電池。當(dāng)連續(xù)照射一段時(shí)間會(huì)產(chǎn)生疲勞現(xiàn)象而使光電流下降，要在暗中放置一些時(shí)候才能恢復(fù)。因此使用時(shí)不宜長(zhǎng)期照射，以防止光電池因疲勞而產(chǎn)生誤差。光電管裝有一個(gè)陰極和一個(gè)陽(yáng)極，陰極是用對(duì)光敏感的金屬(多為堿土金屬的氧化物)做成。光愈強(qiáng)，電子放出愈多，電子是帶負(fù)電的，被吸引到陽(yáng)極上而產(chǎn)生電流。光電管產(chǎn)生電流很小，需要放大。分光光度計(jì)中常用電子倍增光電管，在光照射

14、下所產(chǎn)生的電流比其他光電管要大得多，這就提高了測(cè)定的靈敏度。檢測(cè)器產(chǎn)生的光電流以某種方式轉(zhuǎn)變成模擬的或數(shù)字的結(jié)果，模擬輸出裝置包括電流表、電壓表、記錄器、示波器及與計(jì)算機(jī)聯(lián)用等，數(shù)字輸出則通過(guò)模擬/數(shù)字轉(zhuǎn)換裝置如數(shù)字式電壓表等。4.特點(diǎn)紫外可見分光光度法對(duì)于分析人員來(lái)說(shuō)，可以說(shuō)是最常用和有效的工具之一。幾乎每一個(gè)分析實(shí)驗(yàn)室都離不開紫外可見分光光度計(jì)。分光光度法具有以下主要特點(diǎn)。4.1 靈敏度高由于新的顯色劑的大量合成，并在應(yīng)用研究方面取得了可喜的進(jìn)展，使得對(duì)元素測(cè)定的靈敏度有所推進(jìn)特別是有關(guān)多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究，使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來(lái)的幾萬(wàn)提高到數(shù)十萬(wàn)。4.2 選擇性好

15、目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定，如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定，已有比較滿意的方法了。4.3 準(zhǔn)確度高對(duì)于一般的分光光度法，其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在13 范圍內(nèi)，如采用示差分光光度法進(jìn)行測(cè)量，則誤差可減少到0.x。4.4 適用濃度范圍廣可從常量(150)(尤其使用示差法)到痕量(1O-81O-6)(經(jīng)預(yù)富集后)。4.5 分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速、應(yīng)用廣泛由于各種各樣的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收，因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止，幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。在國(guó)際上發(fā)表的有關(guān)分析的論文總數(shù)中，光度法約

16、占28，我國(guó)約占所發(fā)表論文總數(shù)的33。（2） 國(guó)內(nèi)外的一些新發(fā)展紫外分光光度法在分析領(lǐng)域中的應(yīng)用已經(jīng)有數(shù)十年的歷史，至今仍是應(yīng)用最廣泛的分析方法之一。隨著分光元器件及分光技術(shù)、檢測(cè)器件與檢測(cè)技術(shù)、大規(guī)模集成制造技術(shù)等的發(fā)展，以及單片機(jī)、微處理器、計(jì)算機(jī)和DSP技術(shù)的廣泛應(yīng)用，分光光度計(jì)的性能指標(biāo)不斷提高，并向自動(dòng)化、智能化、高速化和小型化等方向發(fā)展，在分光元器件方面，經(jīng)歷了棱鏡、機(jī)刻光柵和全息光柵的過(guò)程，商品化的全息閃耀光柵已迅速取代一般刻畫光柵。在儀器控制方面，隨著單片機(jī)、微處理器的出現(xiàn)以及軟硬件技術(shù)的結(jié)合，從早期的人工控制進(jìn)步到了自動(dòng)控制。在顯示、記錄與繪圖方面，早期采用表頭(電位計(jì))指示

17、、繪圖儀繪圖，后來(lái)用數(shù)字電壓表數(shù)字顯示，如今更多地采用液晶屏幕或計(jì)算機(jī)屏幕顯示。在檢測(cè)器方面，早期使用光電池、光電管，后來(lái)更普遍地使用光電倍增管甚至光電二極管陣列。陣列型檢測(cè)器和凹面光柵的聯(lián)合應(yīng)用，使儀器的測(cè)量速度發(fā)生了質(zhì)的飛躍，且性能更加穩(wěn)定可靠，受到儀器用戶的青睞，最具有代表性的當(dāng)數(shù)安捷倫的HP8452/84533 J。在儀器構(gòu)型方面，從單光束發(fā)展為雙光束，現(xiàn)在幾乎所有高級(jí)分光光計(jì)都是雙光束的，有些高精度的儀器采用雙單色器，使得儀器在分辨率和雜散光等方面的性能大大提高，如Varian(瓦里安)的Cary 1/3/400。隨著集成電路技術(shù)和光纖技術(shù)的發(fā)展，聯(lián)合采用小型凹面全息光柵和陣列探測(cè)器

18、以及USB接口等新技術(shù)，已經(jīng)出現(xiàn)了一些攜帶方便、用途廣泛的小型化甚至是掌上型的紫外可見分光光度計(jì)。紫外可見光分光光度計(jì)等不同類別、不同等級(jí)和規(guī)格的檢測(cè)，僅在植床食品檢驗(yàn)中應(yīng)用已十分普遍最新自動(dòng)化生化分析儀也已經(jīng)進(jìn)入我國(guó)的食品食品檢驗(yàn)領(lǐng)域。二紫外可見分光光度技術(shù)的基本應(yīng)用1. 測(cè)定溶液中物質(zhì)的含量可見或紫外分光光度法都可用于測(cè)定溶液中物質(zhì)的含量。測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度已知的溶液)和未知液(濃度待測(cè)定的溶液)的吸光度，進(jìn)行比較，由于所用吸收池的厚度是一樣的。也可以先測(cè)出不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在選定的濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是一條直線，然后測(cè)定出未知液的吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到其相對(duì)

19、應(yīng)的濃度。含量測(cè)定時(shí)所用波長(zhǎng)通常要選擇被測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)，這樣做有兩個(gè)好處：(1)靈敏度大，物質(zhì)在含量上的稍許變化將引起較大的吸光度差異；(2)可以避免其他物質(zhì)的干擾。2用紫外光譜鑒定化合物使用分光光度計(jì)可以繪制吸收光譜曲線。方法是用各種波長(zhǎng)不同的單色光分別通過(guò)某一濃度的溶液，測(cè)定此溶液對(duì)每一種單色光的吸光度，然后以波長(zhǎng)為橫座標(biāo)，以吸光度為縱座標(biāo)繪制吸光度波長(zhǎng)曲線，此曲線即吸收光譜曲線。各種物質(zhì)有它自己一定的吸收光譜曲線，因此用吸收光譜曲線圖可以進(jìn)行物質(zhì)種類的鑒定。一定物質(zhì)在不同濃度時(shí)，其吸收光譜曲線中，峰值的大小不同，但形狀相似，即吸收高峰和低峰的波長(zhǎng)是一定不變的。紫外線吸收是由不飽和的

20、結(jié)構(gòu)造成的，含有雙鍵的化合物表現(xiàn)出吸收峰。紫外吸收光譜比較簡(jiǎn)單，同一種物質(zhì)的紫外吸收光譜應(yīng)完全一致，但具有相同吸收光譜的化合物其結(jié)構(gòu)不一定相同。除了特殊情況外，單獨(dú)依靠紫外吸收光譜決定一個(gè)未知物結(jié)構(gòu)，必須與其他方法配合。紫外吸收光譜分析主要用于已知物質(zhì)的定量分析和純度分析。 3.比較最大吸收波長(zhǎng)吸收系數(shù)的一致性由于紫外吸收光譜只含有23個(gè)較寬的吸收帶，而紫外光譜主要是分子內(nèi)的發(fā)色團(tuán)在紫外區(qū)產(chǎn)生的吸收，與分子和其它部分關(guān)系不大。具有相同發(fā)色團(tuán)的不同分子結(jié)構(gòu)，在較大分子中不影響發(fā)色團(tuán)的紫外吸收光譜，不同的分子結(jié)構(gòu)有可能有相同的紫外吸收光譜，但它們的吸收系數(shù)是有差別的。如果分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收波

21、長(zhǎng)相同，吸收系數(shù)也相同，則可認(rèn)為分析樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一物質(zhì)。4反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究借助于分光光度法可以得出一些化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù)，并從兩個(gè)或兩個(gè)以上溫度條件下得到的速度數(shù)據(jù)，得出反應(yīng)活化能。5.純度檢驗(yàn)紫外吸收光譜能測(cè)定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質(zhì)。如果化合物的紫外可見光區(qū)沒(méi)有明顯的吸收峰，而它的雜質(zhì)在紫外區(qū)內(nèi)有較強(qiáng)的吸收峰，就可以檢測(cè)出化合物中的雜質(zhì)。6.氫鍵強(qiáng)度的測(cè)定不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。7.絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定金屬離子常與有機(jī)物形成絡(luò)合物，多數(shù)絡(luò)合物在紫外可見區(qū)是有吸收的，我們可以利用分光光度

22、法來(lái)研究其組成。三在食品成分分析中的主要應(yīng)用紫外-可見分光光度計(jì)在食品酶分析中的應(yīng)用：1.酶對(duì)食品加工的影響酶是生物活細(xì)胞產(chǎn)生的一類具有催化功能的蛋白質(zhì)。酶除了具有高的催化效率特性外，還具有很高的專一性，利用它能選擇性地將個(gè)別食品組分改性，而不影響到其它組分。因此，酶在食品科學(xué)中相當(dāng)重要，通過(guò)酶的作用能引起食品原料的品質(zhì)發(fā)生變化，也能在比較溫和的條件下加工和改良食品。2.紫外-可見分光光度法測(cè)定酶活2.1 -半乳糖苷酶-半乳糖苷酶，又稱乳糖酶(Lactase)。能水解乳糖來(lái)降低乳制品的乳糖含量，從而提高乳制品的可消化性，用于低乳糖牛奶和非結(jié)晶型濃縮牛奶的生產(chǎn)及奶酪風(fēng)味的改變，同時(shí)還可用于生產(chǎn)低

23、聚半乳糖?！久富顪y(cè)定】以O(shè)NPG為底物測(cè)定-半乳糖苷酶活力?！久富疃x】以O(shè)NPG為底物，375保溫酶解，每分鐘釋放lmolL鄰硝基酚的酶量，定義為1個(gè)酶活力單位。2.2 超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，簡(jiǎn)稱SOD)是一種十分重要的生物體防止氧化損傷的酶類，是生物體內(nèi)超氧陰離子清除劑，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。SOD廣泛存在于各類生物體內(nèi)，所有好氧微生物細(xì)胞中都含有SOD。自1969年Mccord等人首次發(fā)現(xiàn)了SOD生物活性后，醫(yī)學(xué)界對(duì)其醫(yī)療作用做了許多研究，證明它具有抗衰老、抗腫瘤、抗輻射、抗缺血、提高人體免疫力等作用，被專家稱為21世紀(jì)最有前途的藥用酶。歐美

24、國(guó)家已開始將其應(yīng)用于醫(yī)療、食品、保健、化妝品等領(lǐng)域?！久富顪y(cè)定】在25 4.5ml 50mmolL pH8.3的K2HPO4- KH2PO4緩沖液中加入待測(cè)SOD樣液，再加入10ul 50mmolL的連苯三酚，迅速搖勻，倒人光徑lcm 的比色杯，在325nm波長(zhǎng)下每隔30s測(cè)一次A值。同時(shí)測(cè)定Sigma公司的SOD標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)所測(cè)樣品SOD活性進(jìn)行校正?！久富疃x】在lmL反應(yīng)液中，每分鐘抑制連苯三酚自氧化速率達(dá)50時(shí)的酶量為一個(gè)酶活單位， 即325nm 0.035ODmin為一個(gè)酶活單位。2.3 多酚氧化酶多酚氧化酶(PPO)是一類由核基因編碼在細(xì)胞質(zhì)中合成的含銅質(zhì)體的金屬酶，其作用機(jī)理在于銅

25、的氧化-還原作用。大麥中的多酚物質(zhì)經(jīng)過(guò)PPO的催化氧化后，具有單寧性質(zhì)，易和蛋白質(zhì)起交聯(lián)作用而沉淀出來(lái)，進(jìn)而影響啤酒的色澤、泡沫、風(fēng)味和非生物穩(wěn)定性。大麥中部分PPO以“潛伏”狀態(tài)存在，在浸麥過(guò)程中，可通過(guò)去除一些酶抑制劑、蛋白酶作用或其他的一些方式使其活性在浸麥過(guò)程中提高。在大麥發(fā)芽過(guò)程中，PPO的活力較高，影響著麥芽的質(zhì)量。因此，在制麥過(guò)程中應(yīng)該降低PPO活性。酶活測(cè)定】0.1mL酶液與lmL 0.1 molL鄰苯二酚(用pH 8.4檸檬酸-磷酸緩沖液配制)80反應(yīng)3min，用2mL 20TCA終止反應(yīng)，于波長(zhǎng)450nm處用分光光度計(jì)測(cè)定吸收值?！久富疃x】上述條件下，將每分鐘OD值增加0

26、.01定義為1個(gè)酶活力單位。紫外-可見分光光度法分析食品中的多種物質(zhì)： 酸奶中維生素A的測(cè)定酸奶是一種發(fā)酵奶制品，由于其豐富的營(yíng)養(yǎng)成分以及獨(dú)特的風(fēng)味、口感而深受人們的喜愛。酸奶中含有一定量的維生素A，作為人體必需的營(yíng)養(yǎng)元素，分析測(cè)定維生素A的含量具有重要的意義。目前分析維生素A的方法很多，有熒光分光光度法、氣相色譜潔、高壓液相色譜法、可見分光光度法。其中比較常用的是采用三氯化銻作為顯色劑的分光光度法，但這種方法有幾個(gè)缺點(diǎn)。首先，生成的藍(lán)色化合物不穩(wěn)定，很快褪色，比色測(cè)定必須在6s內(nèi)完成：其次，三氯化銻具有強(qiáng)腐蝕性及毒性；此外，很易吸水，受溫度、濕度的影響大，器皿裝過(guò)試劑后難于洗滌等。王明華等采

27、用紫外分光光度法分析測(cè)定酸奶中維生素A的含量，樣品經(jīng)過(guò)皂化、提取、除溶劑等步驟后，于328 nm處測(cè)定其吸光度，測(cè)得維生素A的回收率為103. 3%，平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.32，變異系數(shù)為0.01;同時(shí)進(jìn)行了維生素D對(duì)維生素A測(cè)定的干擾實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，維生素D的存在不影響維生素A的測(cè)定結(jié)果。該方法與三氯化銻比色法相比，操作簡(jiǎn)便、安全?！?】水果汁中果糖的測(cè)定果糖的測(cè)定法有高效液相色譜法、離子選擇電極法、傅里葉變換近紅外光譜法和分光光度法等，前三種方法的操作都較復(fù)雜，而分光度法報(bào)道的方法中均加入顯色劑，如間苯二酚，鐵氰化鉀等，這些物質(zhì)對(duì)環(huán)境有污染。占達(dá)東通過(guò)1 14研究發(fā)現(xiàn)：果糖在鹽酸的作用

28、下可生成羥甲基糠醛，通過(guò)對(duì)果糖在鹽酸介質(zhì)中的吸收光譜進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)在波長(zhǎng)291 nm處有最大吸收：果糖濃度在030 u g/mL范圍內(nèi)服從比爾走律。利用該研究用紫外分光光度法測(cè)定了蘋果鮮汁、鴨梨鮮汁和桶子鮮汁中的果糖含量。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)該方法具有很好的選擇性和較高的靈敏度，適用于組成較復(fù)雜的分析對(duì)象中的果糖含量測(cè)定。該方法具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏，對(duì)環(huán)境不造成污染，樣品無(wú)需預(yù)處理等特點(diǎn)?！?】番茄紅素的測(cè)定番茄紅素是一種具有多種生理功能的類胡蘿I、素，通常狀況下與其它類胡蘿I、素同時(shí)存在于多種生物體中。在實(shí)際研究中，番茄紅素的準(zhǔn)確測(cè)定始終是困擾研究人員的一個(gè)難題。目前的測(cè)定方法主要有：(1)以蘇丹紅

29、代替番茄紅素作為標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以測(cè)定番茄紅素的含量；(2)以石油醚或正己烷為溶劑，在472 nm比色測(cè)定其吸收光度，用摩爾消光系數(shù)(E1 00巾1 cm= 3450)來(lái)計(jì)算其中番茄紅素的含量；(3)依高壓液相色譜法，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)樣品的峰面積比來(lái)測(cè)定樣品中番茄紅素的含量?，F(xiàn)有這幾種測(cè)定番茄紅素的方法普遍存在著一定的缺陷，(1)和(2)不需要標(biāo)準(zhǔn)品，但其系統(tǒng)誤差較太，同時(shí)又不能排除B一胡蘿l、素等其它類胡蘿I、素的干擾；(3)要求番茄紅素的標(biāo)準(zhǔn)樣品，而高純度的番茄紅素本身穩(wěn)定性很差，不宜長(zhǎng)期存放，且價(jià)格非常昂貴，日常測(cè)定難度很大。而HPLC測(cè)定又要受到儀器設(shè)備及標(biāo)準(zhǔn)樣品的限制。張連富心1等

30、從番茄紅素及B一胡蘿l、素（影響番茄紅素測(cè)定的含量最多的類胡蘿l素）的紫外吸收光譜的差異入手，確定了以含2%二氯甲烷為溶劑、以502 nm吸收峰為檢測(cè)波長(zhǎng)的番茄紅素測(cè)定方法，避免了其它類胡蘿I、素的干擾，并將其轉(zhuǎn)化為用消光系數(shù)來(lái)計(jì)算的形式，避免了番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制約。溶液中番茄紅素的濃度在0. 00173.12 ug/mL范圍內(nèi)時(shí)，該檢測(cè)方法的可信度在90%以上?！?】食品中甜蜜素的測(cè)定用乙酸乙酯在酸性條件下提取食品中的甜蜜素,再以堿性水反提取,加入過(guò)量的次氯酸鈉將甜蜜素轉(zhuǎn)變?yōu)镹,N-二氯環(huán)己胺,溶于環(huán)己烷4,在波長(zhǎng)304nm處測(cè)定。儀器和試劑： 754紫外分光光度計(jì)為上海第二光學(xué)儀器廠產(chǎn)品

31、;乙酸乙酯、環(huán)己烷、10%()硫酸、0.1mol/L氫氧化鈉、20g/L次氯酸鈉溶液(均為分析純?cè)噭?;1.0g/L甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)液,由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供,1999年1月定值。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：分別吸取甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL(相當(dāng)于甜蜜素0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mg)于250mL分液漏斗中。各加入10%硫酸100mL,乙酸乙酯80mL振搖提取2min,棄水相。用30、20、20mL 0.1mol/L氫氧化鈉溶液振搖提取3次,每次1min,合并水相于另一250mL分液漏斗中。往水相加入環(huán)己烷10mL振搖提取1

32、min,棄去環(huán)己烷,加入10%硫酸15mL、環(huán)己烷10.0mL、20g/L次氯酸鈉溶液5mL,振搖2min,再加入20g/L次氯酸鈉溶液5mL,振搖2min,棄水相。先后用0.1mol/L氫氧化鈉、蒸餾水各50mL洗滌環(huán)己烷層,經(jīng)脫脂棉將環(huán)己烷濾于10mL比色管中,用環(huán)己烷調(diào)零,于波長(zhǎng)304nm處測(cè)定吸光度。樣品測(cè)定：1.液體食品稱取相當(dāng)含甜蜜素6.0mg樣品(如含二氧化碳,先加熱除去)于250mL分液漏斗中,以下同標(biāo)準(zhǔn)曲線方法測(cè)定。2.可溶于水的固體稱取相當(dāng)含甜蜜素6.0mg樣品加入適量的水溶解后,轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中,以下同標(biāo)準(zhǔn)曲線方法測(cè)定。3.不溶于水的固體稱取適量經(jīng)磨碎的固體于10

33、0mL容量瓶中,加水至刻度,不時(shí)搖勻,浸泡1h以上,取相當(dāng)于甜蜜素6.0mg的濾液于250mL分液漏斗中,以下同標(biāo)準(zhǔn)曲線方法測(cè)定?！?】三：在食品安全檢測(cè)中的主要應(yīng)用1 分光光度法測(cè)定食品中硼砂碉砂、硼酸曾作為食品的防腐劑和膨松劑添加到肉丸等食品中，增加食物的韌性、脆度，有增強(qiáng)食物口感及外觀的作用。硼砂、硼酸在體內(nèi)蓄積，排泄很慢，影響消化酶的作用，每日食用0.59引起食欲減退，妨礙營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收，成人食用1-39即可引起中毒，對(duì)人體有害，因此在我國(guó)硼砂、硼酸是禁用的食品添加劑。但從日常的檢測(cè)結(jié)果看，還是有食品在加工過(guò)程使用硼砂、硼酸。硼砂、硼酸的標(biāo)淮檢驗(yàn)方法是T5009.29 - 20032的硼

34、砂、硼酸定性試驗(yàn)，分別有姜黃試紙法和焰色反應(yīng)。為開發(fā)新方法3.4，現(xiàn)嘗試用濕式消解法消化樣品，電感耦合等離子體發(fā)射光譜法（ICP - AES法）測(cè)定食品中硼元素含量，以硼砂(Na28407 IOH，0計(jì))估算硼砂、硼酸的加入量。對(duì)68份樣品（包括牛肉丸、蝦餃、粽、牛百葉、豬肚、豬大腸）用國(guó)標(biāo)法定性測(cè)定和JCP - AES法定量測(cè)定，進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。紫外可見分光光度法檢測(cè)食品中的鎘分光光光度法是利用顯色劑與鎘離子形成穩(wěn)定的顯色絡(luò)合物后可用分光光度計(jì)測(cè)定。此法具有簡(jiǎn)便、儀器簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。胡勁梅等為了同時(shí)測(cè)定鉛和鎘，建立了以電荷耦合器件作為陣列光信號(hào)探測(cè)器，小型多色儀和專用微機(jī)組成的分光光度裝置，研究了

35、卟啉與鉛極譜法。和鎘顯色反應(yīng)的最佳條件。測(cè)定了合成試樣、陶瓷等浸泡液中鉛和鎘的含量。李秋萍等通過(guò)對(duì)新試劑2,6-二甲苯基重氮氨基偶氮苯與鎘顯色反應(yīng)研究，建立了檢測(cè)食品中鎘的新方法。葉瑞洪等通過(guò)分析比較FAAS、KIMIBK螯合萃取FAAS和鎘-碘化鉀-羅丹明B分光光度法三種方法，從靈敏度、檢出限、儀器價(jià)格等方面進(jìn)行比較，得出采用鎘一碘化鉀羅丹明B分光光度法測(cè)定食品中鎘的含量方法最為簡(jiǎn)單易行，操作快速，靈敏度高、選擇性好。樊月琴等研究了4-甲基-2,5.二磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯與鎘的顯色反應(yīng)可用于鎘的含量檢測(cè)。沈燕等合成的1-（5-硝基-2-吡啶）-3-（偶氮苯磺酸）三氮稀用于鎘的檢測(cè)結(jié)果較好

36、。吳繼魁等研究了meso-四（對(duì)羥基苯）卟琳光度法測(cè)定痕量鎘的方法。王亮等研究了【2-4-甲基喹啉】-偶氮丁-5二乙氨基苯酚與鎘的顯色反應(yīng)，結(jié)果令人滿意。李英杰等建立了以雙硫腙為顯色劑可同時(shí)測(cè)定鋅、鎘、鉛的方法。莊海燕等探討了在聚乙烯醇存在下，鎘（）-碘化鉀-羅丹明B分光光度法測(cè)定食品中微量鎘的可行性?！?】紫外可見分光光度法測(cè)定食品中的蘇丹紅蘇丹紅號(hào)是一種人工合成的化工染料，化學(xué)名稱為1-4-（苯基偶氮）偶氮-2-萘酚。蘇丹紅號(hào)為致癌物質(zhì)1，2，被禁止作為食品添加劑使用。我國(guó)和歐盟標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法為液相色譜法3，4，許多分析化學(xué)工作者對(duì)蘇丹紅染料的測(cè)定開展了研究，建立了一些有價(jià)值的測(cè)定方法，如H

37、PLC法5-7、分子印跡固相萃取法8、毛細(xì)管液相色譜-質(zhì)譜法9、電離質(zhì)樸同位素稀釋法10已應(yīng)用于蘇丹紅染料的測(cè)定。但是上述方法由于儀器和試劑昂貴而難以普及。筆者研究了樣品的處理方法，樣品提取液用薄層展開后，用分光光度法測(cè)定，所用設(shè)備簡(jiǎn)單，分析結(jié)果與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)HPLC法準(zhǔn)確度相當(dāng)。用分光光度法測(cè)定食品中吊白塊的含量吊白塊在使用過(guò)程中會(huì)分解出甲醛和二氧化硫，用分光光度法測(cè)量其在食品中的殘留量，判斷是否含有吊白塊。本方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高。甲醛合次硫酸氫鈉（NaHSO2CH2O.2H2O)俗稱吊白塊，易溶于水遇酸、堿、高溫即分解為甲醛和二氧化硫，作為增白劑、還原劑應(yīng)用于紡織印染工業(yè)由于甲醛已被國(guó)際上列為致癌物，所以吊白塊嚴(yán)禁在食品工業(yè)中使用但是近年來(lái)住市場(chǎng)發(fā)現(xiàn)個(gè)別小法商販，唯利是圖，在一些食品中使用吊白塊增加漂白效果嚴(yán)重的損害了消費(fèi)者的健康。為了維護(hù)消費(fèi)者的利益，保障廣大人民群眾的身體健康，建立食品中吊白塊的測(cè)定方法已迫在眉睫 吊白塊在使用過(guò)程中易分解，通過(guò)測(cè)定其分解產(chǎn)物甲醛、二氧化硫在食品的殘量判定是否含有吊白塊日前，我國(guó)已有的甲醛測(cè)定方法主要是針對(duì)包裝材料、