論文 高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用

1、高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用與發(fā)展 摘要：色譜分析作為重要的分離分析技術(shù)，已成為藥物研制開發(fā)、生產(chǎn)單位、藥品檢驗部門及醫(yī)院臨床檢驗等各個領(lǐng)域中藥物質(zhì)量控制必不可少的方法和技術(shù)。高效液相色譜法是20世紀60年代末70年代初出現(xiàn)的分析速度快、分離效率高、操作自動化的新型色譜分析方法。它已逐漸成為藥物分析領(lǐng)域中重要的分析手段及主要制備方式之一。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法 藥物分析  1.    前言高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography , HPLC），又稱“高壓液相色譜法”或“高速液相色譜法”，是20世紀

2、60年代末，在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上引入氣相色譜的理論與實驗方法，并加以改進而發(fā)展起來的一種重要分離分析方法。HPLC采用了高壓輸液泵，高效固定相和高靈敏度在線檢測器等技術(shù)，具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、色柱可以反復(fù)使用、流動相可選擇范圍寬、流出組容易收集、適用范圍廣和安全等優(yōu)點，特別適合揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物以及離子型化合物的分離分析測試，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)、生化、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等科學(xué)領(lǐng)域Error! Reference source not found.。近年來，高效液相色譜法在藥物分析中發(fā)揮著越來越重要的作用，主要是鑒別相關(guān)物質(zhì)、檢查藥物

3、中有關(guān)物質(zhì)的含量限度以及測定有效成分或主要成分含量，世界各國已將該法收載于藥典。本文就高效液相色譜法在藥物分析研究中的應(yīng)用和發(fā)展綜述如下。 2.    高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用2.1            高效液相色譜法在藥物鑒別中的應(yīng)用在HPLC法中，保留時間與組分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)有關(guān)，是定性的參數(shù)，可用于藥物的鑒別。如中國藥典收載的藥物頭孢羥氨芐的鑒別項下規(guī)定：在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應(yīng)與對照品主峰的保留時間一致

4、。頭孢拉定、頭孢噻酚鈉等頭孢類藥物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多種藥物均采用HPLC法進行鑒別。王維劍Error! Reference source not found.等以O(shè)DS柱，甲醇-0.5%乙酸(1:9)為流動相，DVD檢測器，波長329 nm測定了一種新型抗腫瘤藥替莫唑胺(temzolo-mide)，為申報新藥提供了數(shù)據(jù)。崔靜茹Error! Reference source not found.等以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，分別以甲醇-冰乙酸-水(30466)和以乙腈-0·1%磷酸液(991)為流動相，檢測波長分別為283 nm、207 nm，對半夏止咳糖漿中的陳

5、皮、麻黃進行鑒別，方法簡便準確，專屬性強，重復(fù)性好，可用于控制此中藥制劑的內(nèi)在質(zhì)量。王小平Error! Reference source not found.等還采用HPLC指紋圖譜法對蜂膠和樹膠進行鑒別。這些應(yīng)用無疑為進一步完善、開發(fā)藥物鑒別的方法提供了一種新的思路。2.2 高效液相色譜法在含量測定中的應(yīng)用用高效液相色譜法測定含量可以消除藥物中的雜質(zhì)，制劑中的附加劑及共存的藥物對測定的干擾，因此藥物成分含量測定中HPLC法應(yīng)用廣泛。杜洪光Error! Reference source not found.等采用HPLC法測定苯甲酸雌二醇貼片中苯甲酸雌二醇(EB)的含量，李立Erro

6、r! Reference source not found.等用HPLC法測鹽酸青藤堿含量，操作簡便，回收率高，快速準確。劉娜Error! Reference source not found.等以HPLC法測定2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-o-D-葡萄糖苷的含量，可用于舒冠膠囊的質(zhì)量控制。此外，張小華等應(yīng)用RP-HPLC法成功測定了阿莫西林-鹽酸環(huán)丙沙星可溶性粉的含量。李妮等采用RP-HPLC法測定鹽酸齊拉西酮的含量。胡云珍等采用RP-HPLC法測定佐米曲普坦的含量，并對其純度進行考察。2.3       

7、     高效液相色譜法在添加違禁藥物檢查中的應(yīng)用近年來，食品、藥品、保健品以及動物飼料等各方面頻頻出現(xiàn)非法添加違禁藥物的事件，這類成分往往對患者造成病情不受控制、藥物中毒等不良反應(yīng)，嚴重者甚至威脅到患者生命。高效液相色譜法對添加違禁藥物的日常檢驗工作提供了有力的技術(shù)支持。薛恒躍Error! Reference source not found.等建立化學(xué)官能團專屬性鑒別方法和高效液相色譜法對抗癲癇類中藥制劑中添加化學(xué)藥品苯巴比妥進行初步確認，用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)以對照品比對做最終確認，結(jié)果準確可靠。高青Error! Reference sour

8、ce not found.等采用氰基( 25 cm×4.6 mm)色譜柱，以0.01 mol/L庚烷磺酸鈉溶液(用20%磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.7)-乙腈(73)為流動相，柱溫35，流速1 mL/min，檢測波長230 nm，265 nm。在此色譜條件下，中藥制劑中非法添加的6種化學(xué)合成降壓藥（比索洛爾、吲達帕胺、硝苯地平、尼群地平、非洛地平及利血平）有很好的分離度，檢測靈敏度及最小檢出量均為2 ng；連續(xù)5針進樣色譜圖中各組分保留時間的相對標準偏差均小于1.0%。車寶泉Error! Reference source not found.等采用Utimates XB-C18色譜柱，梯度洗

9、脫：流動相A為含0.1%醋酸的20 mmol·L-1醋酸銨溶液，流動相B為甲醇,流速為1 mL·min-1。選擇正負離子全掃描方式檢測臨床常用的10種減肥藥，利用質(zhì)譜解析軟件研究了上述化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律，通過比較樣品峰與對照品峰的一級質(zhì)譜、二級質(zhì)譜質(zhì)荷比，確定樣品中是否摻雜了化學(xué)藥物。結(jié)果各色譜峰間分離度良好，質(zhì)譜分辨率符合要求，最小檢出量為2 ng至100 ng。  3.    高效液相色譜法在藥物分析中的發(fā)展3.1         

10、;   聯(lián)用技術(shù)隨著色譜技術(shù)的發(fā)展，結(jié)合計算機各種軟件的開發(fā)，使HPLC與各種檢測儀器聯(lián)用，更加拓寬了HPLC的應(yīng)用范圍。如HPLC與質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS)技術(shù)是以高效液相色譜為分離手段，以質(zhì)譜為鑒定工具的一種分離分析技術(shù)，具有高度的專屬性，對多數(shù)藥物的檢測靈敏度超過其他分析方法，使定量測試速度顯著加快，可以對混合物中的微量組分進行分析Error! Reference source not found.，在國外已成為測定低濃度生物藥品中藥物及代謝物的首選方法。液相色譜法與化學(xué)發(fā)光聯(lián)用(HPLC-CL)，已成為一種有效的痕量及超痕量分析技術(shù)，用于測定復(fù)雜的、含量低的混合物

11、中組分的分析Error! Reference source not found.。蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)對所有不揮發(fā)溶質(zhì)都有響應(yīng)，其特點是靈敏度高，檢出限為10ng，不受溶劑成分及溫度波動的影響，亦可用于梯度洗脫，HPLC與ELSD的聯(lián)用也已得到廣泛的應(yīng)用Error! Reference source not found.Error! Reference source not found.。3.2            微柱高效液相色譜法高效液相色譜法具有很多優(yōu)點但也存在一些不足

12、，如流動相消耗量大，所用溶劑大多有毒且價格昂貴等。特別是對于一些較復(fù)雜樣品的分析，用單相分離分析方法往往很難完成。微柱高效液相色譜由于填充粒度小而密集，就等效于理論塔板數(shù)的增多，可使色譜柱的柱效提高。采用內(nèi)徑較小的柱子，可使縱向擴散減少，峰展寬效應(yīng)大大降低，進而縮短了分析時間又提高了檢測靈敏度。采用微柱還可以分析極少量的樣品，使流動相用量大為減少，利于節(jié)約溶劑和環(huán)境保護Error! Reference source not found.。3.3            進樣富集處理對于流

13、體中待檢物含量較少，基質(zhì)干擾較大的待測物，直接使用高效液相色譜法檢測靈敏度不高，需對待測物進行富集處理，固相萃取(SPE)是近年發(fā)展起來一種樣品預(yù)處理技術(shù)，由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過程，操作簡單、省時、省力。SPE與HPLC技術(shù)結(jié)合已有很多成功的應(yīng)用Error! Reference source not found.。 4.    結(jié)束語高效液相色譜法是現(xiàn)代藥物分析中最高效、快捷的方法之一，具有專屬性強、靈敏度高

14、等特點，既可用于藥物分離，也可用于定性定量分型，適用范圍廣因此在藥物成分的分離與測定方面能夠充分發(fā)揮其它分析方法無與倫比的優(yōu)勢。而且隨著計算機軟件的開發(fā)、專家系統(tǒng)的應(yīng)用、檢測手段的進步、各種聯(lián)用技術(shù)的出現(xiàn)以及其他一些相關(guān)問題的解決，HPLC將稱為今后質(zhì)量規(guī)范化，國際化的重要途徑之一。 參考文獻1   劉斌. 高效液相色譜法在藥物分析領(lǐng)域中的應(yīng)用J. 中國中醫(yī)藥咨訊, 2009.1(4):107.2   孫毓慶. 現(xiàn)代色譜法及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用M. 北京:人民衛(wèi)生出版社.2000.3   呂璨慧，溫哲. 高效液相色譜在中藥研究中

15、的應(yīng)用進展J. 科技與生活, 2010(13):91.4   The United States pharmacopeial convention, Inc, The United States pharmacopeia XXIIIS. Appendix,1998. 17741777.5   British pharmacopoeia commission,British phavmacopiaS. Appendix, 2002. 140144.6   國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(二部)S. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2000

16、：附錄3234.7   王維劍,張軍仁,龐華. 替莫唑胺含量測定方法的研究J. 藥物分析雜志,2003 ,23 (5) :344.8   崔靜茹, 杜智敏. 半夏止咳糖漿的制備與鑒別J. 實用新鬧肺血管病雜志. 2008, 16(7): 61-63.9   王小平，林勵，白吉慶HPLC指紋圖譜法鑒別蜂膠和樹膠J陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，55(3)：13313510 杜洪光, 賴宇宏, 王麗等. HPLC法測定苯甲酸雌二醇貼片中藥物的含量及其體外透皮釋放量J. 北京化工大學(xué)學(xué)報. 2004, 31(2): 110-112.11 李立, 許

17、軍, 王如意等. 正清風(fēng)痛寧口崩片制備工藝及質(zhì)量標準研究J. 時珍國醫(yī)國藥. 2008, 19(5): 1195-1196.12 劉娜, 趙朝群, 王萌. 舒冠膠囊的制備及質(zhì)量標準研究J. 甘肅中醫(yī). 2008, 21(4): 47-49.13 張小華, 張龍, 李生其等. RP-HPLC法測定阿莫西林鹽酸環(huán)丙沙星可溶性粉的含量J. 中國獸藥雜志. 2004, 38(2): 26-28.14 李妮, 沈順, 仲艷等. RP-HPLC法測定鹽酸齊拉西酮的含量J. 復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）. 2004, 31(6): 656-657.15 胡云珍, 姚彤煒, 王向軍. 佐米曲普坦的含量測定與有關(guān)物質(zhì)檢查

18、的方法學(xué)研究J. 浙江大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）. 2004, 33(1): 37-40.16 薛恒躍, 王玉蘭, 于黎明等. 中藥制劑中添加化學(xué)藥品苯巴比妥的檢測方法研究J. 時珍國醫(yī)國藥. 2006, 17(2): 216-217.17 高青, 張韶, 車寶泉. 6種抗高血壓藥物液相色譜鑒別方法的研究J. 中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2005, 36(4): 330-333.18 車寶泉, 張喆, 黃曉君等. 液質(zhì)聯(lián)用檢查中藥制劑及保健食品中減肥類藥物J. 藥物分析雜志. 2009, 29(4): 633-635.19 謝英新, 王豐. HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)在藥學(xué)中的應(yīng)用J. 黑龍江醫(yī)藥. 2007, 20(5): 495-496.20 衛(wèi)洪清, 劉二保, 張敏. 高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光法在藥物分析中的運用J. 山