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文檔簡介
1、一 緒論1生物化學(xué)研究的對象和內(nèi)容是什么? 解答:生物化學(xué)主要研究:(1)生物機(jī)體的化學(xué)組成、生物分子的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及功能; (2)生物分子分解與合成及反應(yīng)過程中的能量變化; (3)生物遺傳信息的儲(chǔ)存、傳遞和表達(dá); (4)生物體新陳代謝的調(diào)節(jié)與控制。 2你已經(jīng)學(xué)過的課程中哪些內(nèi)容與生物化學(xué)有關(guān)。 提示:生物化學(xué)是生命科學(xué)的基礎(chǔ)學(xué)科,注意從不同的角度,去理解并運(yùn)用生物化學(xué)的知識(shí)。 3說明生物分子的元素組成和分子組成有哪些相似的規(guī)侓。 解答:生物大分子在元素組成上有相似的規(guī)侓性。碳、氫、氧、氮、磷、硫等 6 種是 解答 蛋白質(zhì)、核酸、糖和脂的主要組成元素。碳原子具有特殊的成鍵性質(zhì),即碳原子最外層的
2、4 個(gè)電子可使碳與自身形成共價(jià)單鍵、共價(jià)雙鍵和共價(jià)三鍵,碳還可與氮、氧和氫原子形成共 價(jià)鍵。碳與被鍵合原子形成 4 個(gè)共價(jià)鍵的性質(zhì),使得碳骨架可形成線性、分支以及環(huán)狀的多O 種多性的化合物。特殊的成鍵性質(zhì)適應(yīng)了生物大分子多樣性的需要。氮、氧、硫、磷元素構(gòu)成了生物分子碳骨架上的氨基(NH2) 、羥基(OH) 、羰基(C) 、羧基(COOH) 、巰基(SH) 、磷酸基(PO4 )等功能基團(tuán)。這些功能基團(tuán)因氮、硫和磷有著可變的氧化數(shù)及 氮和氧有著較強(qiáng)的電負(fù)性而與生命物質(zhì)的許多關(guān)鍵作用密切相關(guān)。 生物大分子在結(jié)構(gòu)上也有著共同的規(guī)律性。 生物大分子均由相同類型的構(gòu)件通過一 定的共價(jià)鍵聚合成鏈狀,其主鏈骨
3、架呈現(xiàn)周期性重復(fù)。構(gòu)成蛋白質(zhì)的構(gòu)件是 20 種基本氨基 酸。氨基酸之間通過肽鍵相連。肽鏈具有方向性(N 端C 端),蛋白質(zhì)主鏈骨架呈“肽單 位”重復(fù);核酸的構(gòu)件是核苷酸,核苷酸通過 3, 5-磷酸二酯鍵相連,核酸鏈也具有方 向性(5、3 ),核酸的主鏈骨架呈“磷酸-核糖(或脫氧核糖) ”重復(fù);構(gòu)成脂質(zhì)的構(gòu)件 是甘油、脂肪酸和膽堿,其非極性烴長鏈也是一種重復(fù)結(jié)構(gòu);構(gòu)成多糖的構(gòu)件是單糖,單糖 間通過糖苷鍵相連,淀粉、纖維素、糖原的糖鏈骨架均呈葡萄糖基的重復(fù)。二 蛋白質(zhì)化學(xué)1用于測定蛋白質(zhì)多肽鏈 N 端、C 端的常用方法有哪些?基本原理是什么? 解答: (1) N-末端測定法:常采用 2, 4 二硝
4、基氟苯法、Edman 降解法、丹磺酰氯法。 2, 4 二硝基氟苯(DNFB 或 FDNB)法:多肽或蛋白質(zhì)的游離末端氨基與 2, 4 二硝基氟苯 2, 4 DNFB) ( 反應(yīng) (Sanger 反應(yīng)) 生成 DNP多肽或 DNP蛋白質(zhì)。 , 由于 DNFB 與氨基形成的鍵對酸水解遠(yuǎn)比肽鍵穩(wěn)定,因此 DNP多肽經(jīng)酸水解后,只有 N末端氨基 酸為黃色 DNP氨基酸衍生物,其余的都是游離氨基酸。 丹磺酰氯(DNS)法:多肽或蛋白質(zhì)的游離末端氨基與與丹磺酰氯(DNSCl)反應(yīng) 生成 DNS多肽或 DNS蛋白質(zhì)。 由于 DNS 與氨基形成的鍵對酸水解遠(yuǎn)比肽鍵穩(wěn)定, 因此 DNS多肽經(jīng)酸水解后,只有 N末
5、端氨基酸為強(qiáng)烈的熒光物質(zhì) DNS氨基酸,其余的都 是游離氨基酸。 苯異硫氰酸脂(PITC 或 Edman 降解)法:多肽或蛋白質(zhì)的游離末端氨基與異硫氰 酸苯酯(PITC)反應(yīng)(Edman 反應(yīng)) ,生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白質(zhì)。在酸性有機(jī)溶劑中 加熱時(shí), N末端的 PTC氨基酸發(fā)生環(huán)化, 生成苯乙內(nèi)酰硫脲的衍生物并從肽鏈上掉下來, 除去 N末端氨基酸后剩下的肽鏈仍然是完整的。 氨肽酶法: 氨肽酶是一類肽鏈外切酶或叫外肽酶, 能從多肽鏈的 N 端逐個(gè)地向里切。 根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測出酶水解釋放的氨基酸種類和數(shù)量, 按反應(yīng)時(shí)間和殘基釋放量作動(dòng)力 學(xué)曲線,就能知道該蛋白質(zhì)的 N 端殘基序列。 (2)
6、C末端測定法:常采用肼解法、還原法、羧肽酶法。 肼解法:蛋白質(zhì)或多肽與無水肼加熱發(fā)生肼解,反應(yīng)中除 C 端氨基酸以游離形式存 在外,其他氨基酸都轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的氨基酸酰肼化物。 還原法: 肽鏈 C 端氨基酸可用硼氫化鋰還原成相應(yīng)的 氨基醇。 肽鏈完全水解后, 代表原來 C末端氨基酸的 氨基醇,可用層析法加以鑒別。 羧肽酶法:是一類肽鏈外切酶,專一的從肽鏈的 C末端開始逐個(gè)降解,釋放出游 離的氨基酸。被釋放的氨基酸數(shù)目與種類隨反應(yīng)時(shí)間的而變化。根據(jù)釋放的氨基酸量(摩爾 數(shù))與反應(yīng)時(shí)間的關(guān)系,便可以知道該肽鏈的 C末端氨基酸序列。 2測得一種血紅蛋白含鐵 0.426%,計(jì)算其最低相對分子質(zhì)量。一種純酶
7、按質(zhì)量計(jì)算含 亮氨酸 1.65%和異亮氨酸 2.48%,問其最低相對分子質(zhì)量是多少? 解答: (1)血紅蛋白:(最低相對分子質(zhì)量2 ) 酶 鐵的相對原子質(zhì)量 55.8 100 100 = 13 100 鐵的百分含量 0.426因?yàn)榱涟彼岷彤惲涟彼岬南鄬Ψ肿淤|(zhì)量相等,所以亮氨酸和異亮氨酸的殘基數(shù)之比為: 1.65%:2.48%=2:3,因此,該酶分子中至少含有 2 個(gè)亮氨酸,3 個(gè)異亮氨酸。 2 131.11100M r ( 最低) = 15900 1.65 3 131.11 100 M r ( 最低) = 15900 2.483指出下面 pH 條件下,各蛋白質(zhì)在電場中向哪個(gè)方向移動(dòng),即正極,負(fù)
8、極,還是保 持原點(diǎn)? (1)胃蛋白酶(pI 1.0) ,在 pH 5.0; (2)血清清蛋白(pI 4.9) ,在 pH 6.0; (3)-脂蛋白(pI 5.8) ,在 pH 5.0 和 pH 9.0; 解答:(1)胃蛋白酶 pI 1.0環(huán)境 pH 5.0,帶負(fù)電荷,向正極移動(dòng); (2)血清清蛋白 pI 4.9環(huán)境 pH 6.0,帶負(fù)電荷,向正極移動(dòng); (3)-脂蛋白 pI 5.8環(huán)境 pH 5.0,帶正電荷,向負(fù)極移動(dòng); -脂蛋白 pI 5.8環(huán)境 pH 9.0,帶負(fù)電荷,向正極移動(dòng)。 4何謂蛋白質(zhì)的變性與沉淀?二者在本質(zhì)上有何區(qū)別? 解答:蛋白質(zhì)變性的概念:天然蛋白質(zhì)受物理或化學(xué)因素的影響
9、后,使其失去原有的 生物活性,并伴隨著物理化學(xué)性質(zhì)的改變,這種作用稱為蛋白質(zhì)的變性。 變性的本質(zhì):分子中各種次級(jí)鍵斷裂,使其空間構(gòu)象從緊密有序的狀態(tài)變成松散無序 的狀態(tài),一級(jí)結(jié)構(gòu)不破壞。 蛋白質(zhì)變性后的表現(xiàn):生物學(xué)活性消失; 理化性質(zhì)改變:溶解度下降,黏度增 加,紫外吸收增加,側(cè)鏈反應(yīng)增強(qiáng),對酶的作用敏感,易被水解。 蛋白質(zhì)由于帶有電荷和水膜,因此在水溶液中形成穩(wěn)定的膠體。如果在蛋白質(zhì)溶液中 加入適當(dāng)?shù)脑噭?破壞了蛋白質(zhì)的水膜或中和了蛋白質(zhì)的電荷, 則蛋白質(zhì)膠體溶液就不穩(wěn)定 而出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。沉淀機(jī)理:破壞蛋白質(zhì)的水化膜,中和表面的凈電荷。 蛋白質(zhì)的沉淀可以分為兩類: (1)可逆的沉淀:蛋白質(zhì)
10、的結(jié)構(gòu)未發(fā)生顯著的變化,除去引起沉淀的因素,蛋白質(zhì)仍 能溶于原來的溶劑中,并保持天然性質(zhì)。如鹽析或低溫下的乙醇(或丙酮)短時(shí)間作用蛋白 質(zhì)。 (2)不可逆沉淀:蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變,蛋白質(zhì)變性而沉淀,不再能溶 于原溶劑。如加熱引起蛋白質(zhì)沉淀,與重金屬或某些酸類的反應(yīng)都屬于此類。 蛋白質(zhì)變性后,有時(shí)由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在,并不析出。因此變性蛋白質(zhì) 并不一定都表現(xiàn)為沉淀,而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已經(jīng)變性。5下列試劑和酶常用于蛋白質(zhì)化學(xué)的研究中:CNBr,異硫氰酸苯酯,丹磺酰氯,脲, 6mol/L HCl -巰基乙醇,水合茚三酮,過甲酸,胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,其中哪一個(gè)最 適合完成
11、以下各項(xiàng)任務(wù)? (1)測定小肽的氨基酸序列。 (2)鑒定肽的氨基末端殘基。 (3)不含二硫鍵的蛋白質(zhì)的可逆變性。若有二硫鍵存在時(shí)還需加什么試劑? (4)在芳香族氨基酸殘基羧基側(cè)水解肽鍵。 (5)在甲硫氨酸殘基羧基側(cè)水解肽鍵。 (6)在賴氨酸和精氨酸殘基側(cè)水解肽鍵。 解答: (1)異硫氰酸苯酯; (2)丹黃酰氯; (3)脲; -巰基乙醇還原二硫鍵; (4)胰 凝乳蛋白酶; (5)CNBr; (6)胰蛋白酶。 6由下列信息求八肽的序列。 (1)酸水解得 Ala,Arg,Leu,Met,Phe,Thr,2Val。 (2)Sanger 試劑處理得 DNP-Ala。 (3)胰蛋白酶處理得 Ala,Arg
12、,Thr 和 Leu,Met,Phe,2Val。當(dāng)以 Sanger 試劑處 理時(shí)分別得到 DNP-Ala 和 DNP-Val。 (4)溴化氰處理得 Ala,Arg,高絲氨酸內(nèi)酯,Thr,2Val,和 Leu,Phe,當(dāng)用 Sanger 試劑處理時(shí),分別得 DNP-Ala 和 DNP-Leu。 解答:由(2)推出 N 末端為 Ala;由(3)推出 Val 位于 N 端第四,Arg 為第三,而 Thr 為第二;溴化氰裂解,得出 N 端第六位是 Met,由于第七位是 Leu,所以 Phe 為第八; 由(4) ,第五為 Val。所以八肽為:Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe
13、。 7一個(gè) 螺旋片段含有 180 個(gè)氨基酸殘基,該片段中有多少圈螺旋?計(jì)算該 -螺旋片 段的軸長。 解答:180/3.6=50 圈,500.54=27nm,該片段中含有 50 圈螺旋,其軸長為 27nm。 8 一種四肽與 FDNB 反應(yīng)后, 5.7mol/LHCl 水解得到 DNP-Val 及其他 3 種氨基酸; 用 當(dāng)這四肽用胰蛋白酶水解時(shí)發(fā)現(xiàn)兩種碎片段;其中一片用 LiBH4(下標(biāo))還原后再進(jìn)行酸水 解,水解液內(nèi)有氨基乙醇和一種在濃硫酸條件下能與乙醛酸反應(yīng)產(chǎn)生紫(紅)色產(chǎn)物的氨基 酸。試問這四肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)是由哪幾種氨基酸組成的? 解答: 用 證明 N 端為 Val。 (1)四肽與 FDNB
14、 反應(yīng)后, 5.7mol/LHCl 水解得到 DNP-Val, (2)LiBH4 還原后再水解,水解液中有氨基乙醇,證明肽的 C 端為 Gly。 (3)水解液中有在濃 H2SO4 條件下能與乙醛酸反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色產(chǎn)物的氨基酸,說明此 氨基酸為 Trp。說明 C 端為 GlyTrp (4)根據(jù)胰蛋白酶的專一性,得知 N 端片段為 ValArg(Lys),以(1)(2)(3) 、 、 結(jié)果可知道四肽的順序:NValArg(Lys)TrpGlyC。 9概述測定蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的基本步驟。解答: (1)測定蛋白質(zhì)中氨基酸組成。 (2)蛋白質(zhì)的 N 端和 C 端的測定。 (3)應(yīng)用兩種或兩種以上不同的水解方
15、法將所要測定的蛋白質(zhì)肽鏈斷裂,各自得到一 系列大小不同的肽段。 (4)分離提純所產(chǎn)生的肽,并測定出它們的序列。 (5)從有重疊結(jié)構(gòu)的各個(gè)肽的序列中推斷出蛋白質(zhì)中全部氨基酸排列順序。 如果蛋白質(zhì)含有一條以上的肽鏈,則需先拆開成單個(gè)肽鏈再按上述原則確定其一級(jí)結(jié) 構(gòu)。 如是含二硫鍵的蛋白質(zhì), 也必須在測定其氨基酸排列順序前, 拆開二硫鍵, 使肽鏈分開, 并確定二硫鍵的位置。拆開二硫鍵可用過甲酸氧化,使胱氨酸部分氧化成兩個(gè)半胱氨磺酸。三 核酸1 電泳分離四種核苷酸時(shí),通常將緩沖液調(diào)到什么 pH?此時(shí)它們是向哪極移動(dòng)?移動(dòng)的快慢順序如何 將四種核苷酸吸附于陰離子交換柱上時(shí), 應(yīng)將溶液調(diào)到什么 pH? 如
16、果用逐漸降低 pH 的洗脫液對陰離子交換樹脂上的四種核苷酸進(jìn)行洗脫分離,其洗脫 順序如何?為什么? 解答: 電泳分離 4 種核苷酸時(shí)應(yīng)取 pH3.5 的緩沖液,在該 pH 時(shí),這 4 種單核苷酸 解答 之間所帶負(fù)電荷差異較大,它們都向正極移動(dòng),但移動(dòng)的速度不同,依次為: UMPGMPAMPCMP; 應(yīng)取 pH8.0,這樣可使核苷酸帶較多負(fù)電荷,利于吸附于陰離 子交換樹脂柱。雖然 pH 11.4 時(shí)核苷酸帶有更多的負(fù)電荷,但 pH 過高對分離不利。 當(dāng)不 考慮樹脂的非極性吸附時(shí),根據(jù)核苷酸負(fù)電荷的多少來決定洗脫速度,則洗脫順序?yàn)?CMPAMP GMP UMP,但實(shí)際上核苷酸和聚苯乙烯陰離子交換樹
17、脂之間存在著非極性 吸附, 嘌呤堿基的非極性吸附是嘧啶堿基的 3 倍。 靜電吸附與非極性吸附共同作用的結(jié)果使 洗脫順序?yàn)椋篊MP AMP UMP GMP。 2為什么 DNA 不易被堿水解,而 RNA 容易被堿水解 解答:因?yàn)?RNA 的核糖上有 2-OH 基,在堿作用下形成 2,3-環(huán)磷酸酯,繼續(xù)水解產(chǎn)生 解答 2-核苷酸和 3-核苷酸。DNA 的脫氧核糖上無 2-OH 基,不能形成堿水解的中間產(chǎn)物,故對 堿有一定抗性。 3一個(gè)雙螺旋 DNA 分子中有一條鏈的成分A = 0.30,G = 0.24, 請推測這一條 鏈上的T和C的情況。 互補(bǔ)鏈的A,G,T和C的情況。 解答: 解答 T + C
18、= 10.300.24 = 0.46; T = 0.30,C = 0.24,A + G = 0.46。 4對雙鏈 DNA 而言, 若一條鏈中(A + G)/(T + C)= 0.7,則互補(bǔ)鏈中和整個(gè) DNA 分 子中(A+G)/(T+C)分別等于多少? 若一條鏈中(A + T)/(G + C)= 0.7,則互補(bǔ)鏈中和整個(gè) DNA 分子中(A + T)/(G + C)分別等于多少 ? 解答: 設(shè) DNA 的兩條鏈分別為 和 則: A= T,T= A,G= C,C= G,因 解答 為:(A+ G)/(T+ C)= (T+ C)/(A+ G)= 0.7, 所以互補(bǔ)鏈中(A+ G)/(T+ C) =
19、1/0.7 =1.43;在整個(gè) DNA 分子中,因?yàn)?A = T, G = C,所以,A + G = T + C,(A + G) /(T + C)= 1; 假設(shè)同(1),則 A+ T= T+ A,G+ C= C+ G,所以,(A+ T)/ (G+ C) (A+ T)(G+ C) 0.7 ; = / = 在整個(gè) DNA 分子中, + T+ A+ T)(G+C+ (A / G+C)= 2(A+ T)/2(G+C)= 0.7 5T7 噬菌體 DNA(雙鏈 B-DNA)的相對分子質(zhì)量為 2.5107,計(jì)算 DNA 鏈的長度(設(shè)核苷酸對的平均相對分子質(zhì)量為 640)。 解答:0.34 (2.5107/6
20、40)= 1.3 104nm = 13m。6如果人體有 1014 個(gè)細(xì)胞,每個(gè)體細(xì)胞的 DNA 含量為 6.4 109 個(gè)堿基對。試計(jì)算人 體 DNA 的總長度是多少?是太陽地球之間距離(2.2 109 km)的多少倍?已知雙鏈 DNA 每 1000 個(gè)核苷酸重 1 10-18g,求人體 DNA 的總質(zhì)量。 解答:每個(gè)體細(xì)胞的 DNA 的總長度為:6.4 109 0.34nm = 2.176 109 nm = 2.176m, 解答 人體內(nèi)所有體細(xì)胞的 DNA 的總長度為:2.176m1014 = 2.1761011km,這個(gè)長度與太陽地 球之間距離 (2.2109 km) 相比為: 2.176
21、 1011/2.2 109 = 99 倍, 每個(gè)核苷酸重 1 10-18g/1000 = 10-21g,所以,總 DNA 6.4 1023 10-21 = 6.4 102 = 640g。 7 有一個(gè) X 噬菌體突變體的 DNA 長度是 15m, 而正常 X 噬菌體 DNA 的長度為 17m, 計(jì)算突變體 DNA 中丟失掉多少堿基對? 解答: 解答 (1715) 103/0.34 = 5.88 103bp 8概述超螺旋 DNA 的生物學(xué)意義。 解答: 解答 超螺旋 DNA 比松弛型 DNA 更緊密,使 DNA 分子的體積更小,得以包裝 在細(xì)胞內(nèi); 超螺旋會(huì)影響雙螺旋分子的解旋能力,從而影響到 D
22、NA 與其他分子之間的相 互作用; 超螺旋有利于 DNA 的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制及表達(dá)調(diào)控。 9為什么自然界的超螺旋 DNA 多為負(fù)超螺旋? 解答:環(huán)狀 DNA 自身雙螺旋的過度旋轉(zhuǎn)或旋轉(zhuǎn)不足都會(huì)導(dǎo)致超螺旋,這是因?yàn)槌菪?解答 將使分子能夠釋放由于自身旋轉(zhuǎn)帶來的應(yīng)力。 雙螺旋過度旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致正超螺旋, 而旋轉(zhuǎn)不足將 導(dǎo)致負(fù)超螺旋。雖然兩種超螺旋都能釋放應(yīng)力,但是負(fù)超螺旋時(shí),如果發(fā)生 DNA 解鏈(即氫 鏈斷開,部分雙螺旋分開)就能進(jìn)一步釋放應(yīng)力,而 DNA 轉(zhuǎn)錄和復(fù)制需要解鏈。因此自然界 環(huán)狀 DNA 采取負(fù)超螺旋,這可以通過拓?fù)洚悩?gòu)酶的操作實(shí)現(xiàn)。 10真核生物基因組和原核生物基因組各有哪些特點(diǎn)解答: 解
23、答 不同點(diǎn): 真核生物 DNA 含量高,堿基對總數(shù)可達(dá) 10,且與組蛋白穩(wěn)定結(jié)合形成染色體,具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。原核生物 DNA 含量低,不含組蛋白,稱為類核體,只有 一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。 真核生物有多個(gè)呈線形的染色體; 原核生物只有一條環(huán)形染色體。 真 核生物 DNA 中含有大量重復(fù)序列,原核生物細(xì)胞中無重復(fù)序列。 真核生物中為蛋白質(zhì)編 碼的大多數(shù)基因都含有內(nèi)含子(有斷裂基因);原核生物中不含內(nèi)含子。 真核生物的 RNA 是細(xì)胞核內(nèi)合成的, 它必須運(yùn)輸穿過核膜到細(xì)胞質(zhì)才能翻譯, 這樣嚴(yán)格的空間間隔在原核生 物內(nèi)是不存在的。 原核生物功能上密切相關(guān)的基因相互靠近,形成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位,稱操 縱子,真核生物
24、不存在操縱子。 病毒基因組中普遍存在重疊基因,但近年發(fā)現(xiàn)這種情況 在真核生物也不少見。相同點(diǎn):都是由相同種類的核苷酸構(gòu)成的的雙螺旋結(jié)構(gòu),均是遺傳信 息的載體,均含有多個(gè)基因。 11如何看待 RNA 功能的多樣性它的核心作用是什么解答:RNA 的功能主要有: 控制蛋白質(zhì)合成; 作用于 RNA 轉(zhuǎn)錄后加工與修飾; 解答 參與細(xì)胞功能的調(diào)節(jié); 生物催化與其他細(xì)胞持家功能;遺傳信息的加工;可能是 生物進(jìn)化時(shí)比蛋白質(zhì)和 DNA 更早出現(xiàn)的生物大分子。 其核心作用是既可以作為信息分子又可 以作為功能分子發(fā)揮作用。 12什么是 DNA 變性?DNA 變性后理化性質(zhì)有何變化? 解答:DNA 雙鏈轉(zhuǎn)化成單鏈的過
25、程稱變性。 解答 引起 DNA 變性的因素很多,如高溫、 超聲波、 強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑和某些化學(xué)試劑(如尿素,酰胺)等都能引起變性。 DNA 變性后的理 化性質(zhì)變化主要有: 天然 DNA 分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)解鏈變成單鏈的無規(guī)則線團(tuán),生物學(xué)活 性喪失; 天然的線型 DNA 分子直徑與長度之比可達(dá) 110,其水溶液具有很大的黏度。 變性后,發(fā)生了螺旋-線團(tuán)轉(zhuǎn)變,黏度顯著降低; 在氯化銫溶液中進(jìn)行密度梯度離心,變 性后的 DNA 浮力密度大大增加,故沉降系數(shù) S 增加; DNA 變性后,堿基的有序堆積被破 壞,堿基被暴露出來,因此,紫外吸收值明顯增加,產(chǎn)生所謂增色效應(yīng)。 DNA 分子具旋 光性,旋光
26、方向?yàn)橛倚?。由?DNA 分子的高度不對稱性,因此旋光性很強(qiáng),其a = 150。 當(dāng) DNA 分子變性時(shí),比旋光值就大大下降。 13哪些因素影響 Tm 值的大?。?解答:影響 Tm 的因素主要有: G-C 對含量。G-C 對含 3 個(gè)氫鍵,A-T 對含 2 個(gè)氫鍵, 解答 故 G-C 對相對含量愈高,Tm 亦越高(圖 3-29) 。在 0.15mol/L NaCl,0.015mol/L 檸檬酸鈉溶 液(1SSC)中,經(jīng)驗(yàn)公式為: (G+C)% =(Tm - 69.3) 2.44。 溶液的離子強(qiáng)度。離子強(qiáng) 度較低的介質(zhì)中,Tm 較低。在純水中,DNA 在室溫下即可變性。分子生物學(xué)研究工作中需核
27、酸變性時(shí),常采用離子強(qiáng)度較低的溶液。 溶液的 pH。高 pH 下,堿基廣泛去質(zhì)子而喪失 形成氫鍵的有力,pH 大于 11.3 時(shí),DNA 完全變性。pH 低于 5.0 時(shí),DNA 易脫嘌呤,對單鏈 DNA 進(jìn)行電泳時(shí),常在凝膠中加入 NaOH 以維持變性關(guān)態(tài)。 變性劑。甲酰胺、尿素、甲醛 等可破壞氫鍵,妨礙堿堆積,使 Tm 下降。對單鏈 DNA 進(jìn)行電泳時(shí),常使用上述變性劑。14哪些因素影響 DNA 復(fù)性的速度? 解答:影響復(fù)性速度的因素主要有: 復(fù)性的溫度,復(fù)性時(shí)單鏈隨機(jī)碰撞,不能形成 解答 堿基配對或只形成局部堿基配對時(shí), 在較高的溫度下兩鏈重又分離, 經(jīng)過多次試探性碰撞才 能形成正確的互
28、補(bǔ)區(qū)。所以,核酸復(fù)性時(shí)溫度不宜過低,Tm-25是較合適的復(fù)性溫度。 單鏈片段的濃度,單鏈片段濃度越高,隨機(jī)碰撞的頻率越高,復(fù)性速度越快。 單鏈片段 的長度,單鏈片段越大,擴(kuò)散速度越慢,鏈間錯(cuò)配的概率也越高。因面復(fù)性速度也越慢,即 DNA 的核苷酸對數(shù)越多,復(fù)性的速度越慢,若以 C0 為單鏈的初始濃度,t 為復(fù)性的時(shí)間,復(fù) 性達(dá)一半時(shí)的 C0t 值稱 C0t1/2,該數(shù)值越小,復(fù)性的速度越快。 單鏈片段的復(fù)雜度,在片 段大小相似的情況下,片段內(nèi)重復(fù)序列的重復(fù)次數(shù)越多,或者說復(fù)雜度越小,越容易形成互 補(bǔ)區(qū),復(fù)性的速度就越快。真核生物 DNA 的重復(fù)序列就是復(fù)生動(dòng)力學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)的,DNA 的 復(fù)雜度
29、越小,復(fù)性速度越快。15概述分子雜交的概念和應(yīng)用領(lǐng)域。 解答:在退火條件下,不同來源的 DNA 互補(bǔ)區(qū)形成雙鏈,或 DNA 單鏈和 RNA 單鏈的互 解答 補(bǔ)區(qū)形成 DNA-RNA 雜合雙鏈的過程稱分子雜交。 通常對天然或人工合成的 DNA 或 RNA 片段進(jìn) 行放射性同位素或熒光標(biāo)記,做成探針,經(jīng)雜交后,檢測放射性同位素或熒光物質(zhì)的位置, 尋找與探針有互補(bǔ)關(guān)系的 DNA 或 RNA。直接用探針與菌落或組織細(xì)胞中的核酸雜交,因未改 變核酸所在的位置,稱原位雜交技術(shù)。將核酸直接點(diǎn)在膜上,再與探針雜交稱點(diǎn)雜交,使用 狹縫點(diǎn)樣器時(shí),稱狹縫印跡雜交。該技術(shù)主要用于分析基因拷貝數(shù)和轉(zhuǎn)錄水平的變化,亦可
30、用于檢測病原微生物和生物制品中的核酸污染狀況。雜交技術(shù)較廣泛的應(yīng)用是將樣品 DNA 切割成大小不等的片段,經(jīng)凝膠電泳分離后,用雜交技術(shù)尋找與探針互補(bǔ)的 DNA 片段。由于 凝膠機(jī)械強(qiáng)度差,不適合于雜交過程中較高溫度和較長時(shí)間的處理,Southern 提出一種方 法,將電泳分離的 DNA 片段從凝膠轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)哪ぃㄈ缦跛崂w維素膜或尼龍膜)上,在進(jìn)行 雜交操作,稱 Southern 印跡法,或 Southern 雜交技術(shù)。隨后,Alwine 等提出將電泳分離 后的變性 RNA 吸印到適當(dāng)?shù)哪ど显龠M(jìn)行分子雜交的技術(shù),被戲稱為 Northern 印跡法,或 Northern 雜交。分子雜交廣泛用于測定
31、基因拷貝數(shù)、基因定位、確定生物的遺傳進(jìn)化關(guān)系 等。Southern 雜交和 Northern 雜交還可用于研究基因變異,基因重排,DNA 多態(tài)性分析和 疾病診斷。雜交技術(shù)和 PCR 技術(shù)的結(jié)合,使檢出含量極少的 DNA 成為可能。促進(jìn)了雜交技術(shù) 在分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。DNA 芯片技術(shù)也是以核酸的分子雜交為基礎(chǔ)的。 16概述核酸序列測定的方法和應(yīng)用領(lǐng)域。 解答:DNA 的序列測定目前多采用 Sanger 提出的鏈終止法,和 Gilbert 提出的化學(xué)法。 解答 其中鏈終止法經(jīng)不斷改進(jìn),使用日益廣泛。鏈終止法測序的技術(shù)基礎(chǔ)主要有: 用凝膠電 泳分離 DNA 單鏈片段時(shí),小片段移動(dòng),大片
32、段移動(dòng)慢,用適當(dāng)?shù)姆椒煞蛛x分子大小僅差一 個(gè)核苷酸的 DNA 片段。 用合適的聚合酶可以在試管內(nèi)合成單鏈 DNA 模板的互補(bǔ)鏈。反應(yīng) 體系中除單鏈模板外, 還應(yīng)包括合適的引物, 種脫氧核苷三磷酸和若干種適量的無機(jī)離子。 4 如果在 4 個(gè)試管中分別進(jìn)行合成反應(yīng), 每個(gè)試管的反應(yīng)體系能在一種核苷酸處隨機(jī)中斷鏈的 合成,就可以得到 4 套分子大小不等的片段,如新合成的片段序列為-CCATCGTTGA-,在 A 處隨機(jī)中斷鏈的合成,可得到-CCA 和-CCATCGTA 兩種片段,在 G 處中斷合成可得到-CCATCG 和-CCATCGTTG 兩種片段。在 C 和 T 處中斷又可以得到相應(yīng)的 2 套
33、片段。用同位素或熒光物 質(zhì)標(biāo)記這 4 套新合成的鏈,在凝膠中置于 4 個(gè)泳道中電泳,檢測這 4 套片段的位置,即可直 接讀出核苷酸的序列。 在特定堿基處中斷新鏈合成最有效的辦法,是在上述 4 個(gè)試管中按 一定比例分別加入一種相應(yīng)的 2,3-雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP) ,由于 ddNTP 的 3位無-OH, 不可能形成磷酸二酯鍵,故合成自然中斷。如上述在 A 處中斷的試管內(nèi),既有 dATP,又有 少量的 ddATP,新合成的-CCA 鏈中的 A 如果是 ddAMP,則鏈的合成中斷,如果是 dAMP,則鏈 仍可延伸。因此,鏈中有幾個(gè) A,就能得到幾種大小不等的以 A 為末端的片段。如果用放射
34、性同位素標(biāo)記新合成的鏈, 4 個(gè)試管中新合成的鏈在凝膠的 4 個(gè)泳道電泳后, 則 經(jīng)放射自顯影可檢測帶子的位置,由帶子的位置可以直接讀出核苷酸的序列。采用 T7 測序酶時(shí),一次 可讀出 400 多個(gè)核苷酸的序列。 近年采用 4 種射波長不同的熒光物質(zhì)分別標(biāo)記 4 種不同的雙 脫氧核苷酸,終止反應(yīng)后 4 管反應(yīng)物可在同一泳道電泳,用激光掃描收集電泳信號(hào),經(jīng)計(jì)算 機(jī)處理 可將序列直接打印出來。采用毛細(xì)管電泳法測序時(shí),這種技術(shù)一次可測定 700 個(gè)左 右核苷酸的序列,一臺(tái)儀器可以有幾十根毛細(xì)管同時(shí)進(jìn)行測序,且電泳時(shí)間大大縮短,自動(dòng) 測序技術(shù)的進(jìn)步加快了核酸測序的步伐, 現(xiàn)已完成了包括人類在內(nèi)的幾十個(gè)
35、物種的基因組測 序。 RNA 序列測定最早采用的是類似蛋白質(zhì)序列測定的片段重疊法,Holley 用此法測定酵 母丙氨酸 tRNA 序列耗時(shí)達(dá)數(shù)年之久。隨后發(fā)展了與 DNA 測序類似的直讀法,但仍不如 DNA 測序容易,因此,常將 RNA 反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ) DNA(cDNA) ,測定 cDNA 序列后推斷 RNA 的序列, 目前 16S rRNA 1 542 b 的全序列測定,23S rRNA 2 904 b 的全序列測定,噬菌體 MS2 RNA 3 569 b 的全序列測定均已完成。四 糖類的結(jié)構(gòu)與功能1書寫 -D-吡喃葡萄糖,L- (-)葡萄糖, -D- (+)吡喃葡萄糖的結(jié)構(gòu)式,并說明 D、
36、L;+、-; 、 各符號(hào)代表的意義。 解答:書寫單糖的結(jié)構(gòu)常用 D、L;d 或(+)、l 或(-); 、 表示。D-、L-是人為規(guī) 解答 定的單糖的構(gòu)型。是以 D-、L-甘油醛為參照物,以距醛基最遠(yuǎn)的不對稱碳原子為準(zhǔn), 羥基在 左面的為 L 構(gòu)型, 羥基在右的為 D 構(gòu)型。單糖由于具有不對稱碳原子,可使平面偏振光的偏 振面發(fā)生一定角度的旋轉(zhuǎn),這種性質(zhì)稱為旋光性。其旋轉(zhuǎn)角度稱為旋光度,偏振面向左旋轉(zhuǎn) 稱為左旋,向右則稱為右旋。d 或(+)表示單糖的右旋光性,l 或(-)表示單糖的左旋光性。 2寫出下列糖的結(jié)構(gòu)式: -D-葡萄糖-1-磷酸,2-脫氧- -D-呋喃核糖, -D-呋喃 果糖,D-甘油醛
37、-3-磷酸,蔗糖,葡萄糖醛酸。 解答:略。 3已知某雙糖能使本尼地(Benedict)試劑中的 Cu2+氧化成 Cu2O 的磚紅色沉淀,用 -葡 糖糖苷酶可將其水解為兩分子 -D-吡喃葡糖糖,將此雙糖甲基化后再水解將得到 2,3,4,6-四 氧甲基-D-吡喃葡糖糖和 1,2,3,6-四氧甲基-D-吡喃葡糖糖,試寫出此雙糖的名稱和結(jié)構(gòu)式。 蔗糖雙糖能使本尼地(Benedict)試劑中的 Cu2+氧化成 Cu2O 的磚紅色沉淀,說明該雙 解答: 糖具還原性,含有半縮醛羥基。用葡糖苷酶可將其水解為兩分子-D-吡喃葡糖, 說明 該雙糖是由-糖苷鍵構(gòu)成的。將此雙糖甲基化后再水解將得到 2,3,4,6-四
38、氧甲基-D-吡喃葡 糖糖和 1,2,3,6-四氧甲基-D-吡喃葡糖, 糖基上只有自由羥基才能被甲基化,說明-葡糖(1 4)葡糖構(gòu)成的為纖維二糖。 4根據(jù)下列單糖和單糖衍生物的結(jié)構(gòu):CH2 OH C HO H H C C C O H OH OHCHO H C OH HO H H C C C H OH OH CHO CHOH C NHCOCH3 HO C H HO HO H C C C H H OH H H HO C C C OH OH HCH2OHCH2OHCH2OHCH2OH(A)(B)(C)(D)(1)寫出其構(gòu)型(D 或 L)和名稱;(2)指出它們能否還原本尼地試劑;(3) 指出哪些能發(fā)生
39、成苷反應(yīng)。解答:(1) 構(gòu)型是以 D-,L-甘油醛為參照物,以距醛基最遠(yuǎn)的不對稱碳原子為準(zhǔn), 羥基 解答 在左面的為 L 構(gòu)型, 羥基在右的為 D 構(gòu)型。A、B、C 為 D 構(gòu)型,D 為 L 構(gòu)型。 (2) B、C、D 均有醛基具還原性,可還原本尼地試劑。A 為酮糖,無還原性。 (3) 單糖的半縮醛上羥基與非糖物質(zhì)(醇、酚等)的羥基形成的縮醛結(jié)構(gòu)稱為糖苷, B,C,D 均能發(fā)生成苷反應(yīng)。 5透明質(zhì)酸是細(xì)胞基質(zhì)的主要成分,是一種黏性的多糖,分子量可達(dá) 100000,由兩單 糖衍生物的重復(fù)單位構(gòu)成,請指出該重復(fù)單位中兩組分的結(jié)構(gòu)名稱和糖苷鍵的結(jié)構(gòu)類型。解答:透明質(zhì)酸的兩個(gè)重復(fù)單位是由D葡萄糖醛酸和
40、 N-乙酰氨基葡萄糖通過 解答 -1,3 糖苷鍵連接而成。 6纖維素和淀粉都是由 14 糖苷鍵連接的 D葡萄糖聚合物,相對分子質(zhì)量也相當(dāng), 但它們在物理性質(zhì)上有很大的不同, 請問是什么結(jié)構(gòu)特點(diǎn)造成它們在物理性質(zhì)上的如此差別 解釋它們各自性質(zhì)的生物學(xué)優(yōu)點(diǎn)。 解答:淀粉是葡萄糖聚合物,既有1,4 糖苷鍵,也有1,6 糖苷鍵,為多分支 解答 結(jié)構(gòu)。直鏈淀粉分子的空間構(gòu)象是卷曲成螺旋形的,每一回轉(zhuǎn)為 6 個(gè)葡萄糖基,淀粉在水溶 液中混懸時(shí)就形成這種螺旋圈。支鏈淀粉分子中除有-(1,4)糖苷鍵的糖鏈外,還有 -(1,6)糖苷鍵連接的分支處,每一分支平均約含 2030 個(gè)葡萄糖基,各分支也都是卷曲成螺 旋
41、。螺旋構(gòu)象是碘顯色反應(yīng)的必要條件。碘分子進(jìn)入淀粉螺旋圈內(nèi),糖游離羥基成為電子 供體,碘分子成為電子受體,形成淀粉碘絡(luò)合物,呈現(xiàn)顏色。其顏色與糖鏈的長度有關(guān)。 當(dāng)鏈長小于 6 個(gè)葡萄糖基時(shí),不能形成一個(gè)螺旋圈,因而不能呈色。當(dāng)平均長度為 20 個(gè)葡萄 糖基時(shí)呈紅色,紅糊精、無色糊精也因而得名。大于 60 個(gè)葡萄糖基的直鏈淀粉呈藍(lán)色。支 鏈淀粉相對分子質(zhì)量雖大,但分支單位的長度只有 2030 個(gè)葡萄糖基,故與碘反應(yīng)呈紫紅 色。纖維素雖然也是由 D-吡喃葡萄糖基構(gòu)成,但它是以-(1,4)糖苷鍵連接的一種沒有分 支的線性分子,它不卷曲成螺旋。纖維素分子的鏈與鏈間,能以眾多氫鍵像麻繩樣擰在一 起,構(gòu)成堅(jiān)
42、硬的不溶于水的纖維狀高分子(也稱纖維素微晶束),構(gòu)成植物的細(xì)胞壁。人 和哺乳動(dòng)物體內(nèi)沒有纖維素酶(cellulase),因此不能將纖維素水解成葡萄糖。雖然纖維素 不能作為人類的營養(yǎng)物,但人類食品中必須含纖維素。因?yàn)樗梢源龠M(jìn)胃腸蠕動(dòng)、促進(jìn)消化 和排便。 7說明下列糖所含單糖的種類、糖苷鍵的類型及有無還原性 (1)纖維二糖 (2)麥芽糖(3)龍膽二糖(4)海藻糖(5)蔗糖(6)乳糖解答:(1)纖維二糖含葡萄糖,1,4 糖苷鍵,有還原性。 解答 (2)麥芽糖含葡萄糖,1,4 糖苷鍵,有還原性。 (3)龍 膽二糖含葡萄糖,1,6 糖苷鍵,有還原性。 (4)海藻糖含葡萄糖,1,1 糖苷鍵, 無還原性。
43、 (5)蔗糖含葡萄糖和果糖,1,2 糖苷鍵,無還原性。 (6)乳糖含葡萄糖和半乳糖,1,4 糖苷鍵,有還原性。 8人的紅細(xì)胞質(zhì)膜上結(jié)合著一個(gè)寡糖鏈,對細(xì)胞的識(shí)別起重要作用。被稱為抗原決定基 團(tuán)。根據(jù)不同的抗原組合,人的血型主要分為 A 型、B 型、AB 型和 O 型 4 類。不同血型的 血液互相混合將發(fā)生凝血,危及生命。紅細(xì)胞 N Ac Glc 1, 4Gal 1, 2 Fuc 1, 3X 已知 4 種血型的差異僅在 X 位組成成分的不同。請指出不同血型(A 型、B 型、AB 型、 O 型)X 位的糖基名稱。 解答:A 型 X 位是 N-乙酰氨基-D-半乳糖; 解答 B 型 X 位是-D-半乳
44、糖; AB 型 X 位蒹有 A 型和 B 型的糖; O 型 X 位是空的。 9請寫出下列結(jié)構(gòu)式: (1) L巖藻糖 (3) N乙酰氨基D葡萄糖 解答:略。 10隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展,生命的奧秘正在逐漸被揭示。大量的研究已表明,各 種錯(cuò)綜復(fù)雜的生命現(xiàn)象的產(chǎn)生和疾病的形成過程均與糖蛋白的糖鏈有關(guān)。請閱讀相關(guān)資料, 列舉你感興趣的糖的生物學(xué)功能。 解答:略。 解答 (2)D半乳糖 (4) N乙酰氨基D半乳糖胺五 脂類化合物和生物膜1簡述脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和生物學(xué)作用。 解答:(1)脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn):脂質(zhì)是生物體內(nèi)一大類不溶于水而易溶于非極性有機(jī)溶劑的 有機(jī)化合物, 大多數(shù)脂質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是脂肪酸和醇形成
45、的酯及其衍生物。 脂肪酸多為 4 碳以 上的長鏈一元羧酸,醇成分包括甘油、鞘氨醇、高級(jí)一元醇和固醇。脂質(zhì)的元素組成主要為 碳、氫、氧,此外還有氮、磷、硫等。 (2)脂質(zhì)的生物學(xué)作用:脂質(zhì)具有許多重要的生物功能。脂肪是生物體貯存能量的主要形 式, 脂肪酸是生物體的重要代謝燃料, 生物體表面的脂質(zhì)有防止機(jī)械損傷和防止熱量散發(fā)的 作用。磷脂、糖脂、固醇等是構(gòu)成生物膜的重要物質(zhì),它們作為細(xì)胞表面的組成成分與細(xì)胞 的識(shí)別、 物種的特異性以及組織免疫性等有密切的關(guān)系。 有些脂質(zhì) (如萜類化合物和固醇等) 還具有重要生物活性,具有維生素、激素等生物功能。脂質(zhì)在生物體中還常以共價(jià)鍵或通過 次級(jí)鍵與其他生物分子
46、結(jié)合形成各種復(fù)合物,如糖脂、脂蛋白等重要的生物大分子物質(zhì)。 2概述脂肪酸的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。 解答:(1)脂肪酸的結(jié)構(gòu):脂肪酸分子為一條長的烴鏈(“尾”)和一個(gè)末端羧基(“頭”) 解答 組成的羧酸。烴鏈以線性為主,分枝或環(huán)狀的為數(shù)甚少。根據(jù)烴鏈?zhǔn)欠耧柡停蓪⒅舅岱?為飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸。 (2)脂肪酸的性質(zhì): 脂肪酸的物理性質(zhì)取決于脂肪酸烴鏈的長度和不飽和程度。烴鏈越長,非極性越強(qiáng), 溶解度也就越低。 脂肪酸的熔點(diǎn)也受脂肪酸烴鏈的長度和不飽和程度的影響。_ 脂肪酸中的雙鍵極易被強(qiáng)氧化劑, H2O2、 如 超氧陰離子自由基 O 2 ) 羥自由基 OH) ( 、 (等所氧化, 因此含不飽和脂肪酸
47、豐富的生物膜容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化作用, 從而繼發(fā)引起膜蛋 白氧化,嚴(yán)重影響膜的結(jié)構(gòu)和功能。 脂肪酸鹽屬于極性脂質(zhì),具有親水基(電離的羧基)和疏水基(長的烴鏈),是典型 的兩親性化合物,屬于離子型去污劑。 必需脂肪酸中的亞油酸和亞麻酸可直接從植物食物中獲得,花生四烯酸則可由亞油酸 在體內(nèi)轉(zhuǎn)變而來。它們是前列腺素、血栓噁烷和白三烯等生物活性物質(zhì)的前體。 3概述磷脂、糖脂和固醇類的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和生物學(xué)作用解答: 解答 . 磷脂包括甘油磷脂和鞘磷脂兩類,它們主要參與細(xì)胞膜系統(tǒng)的組成,少量存在于其 他部位。 (1)甘油磷脂的結(jié)構(gòu):甘油磷脂是由 sn-甘油-3-磷酸衍生而來,分子中甘油的兩個(gè)醇羥基 與脂肪酸成
48、酯,第三個(gè)醇羥基與磷酸成酯或磷酸再與其他含羥基的物質(zhì)(如膽堿、乙醇胺、 絲氨酸等醇類衍生物)結(jié)合成酯。 (2)甘油磷脂的理化性質(zhì): 物理性質(zhì):甘油磷脂脂雙分子層結(jié)構(gòu)在水中處于熱力學(xué)的穩(wěn)定狀態(tài),構(gòu)成生物膜的結(jié) 構(gòu)基本特征之一 化學(xué)性質(zhì):a. 水解作用:在弱堿溶液中,甘油磷脂水解產(chǎn)生脂肪酸的金屬鹽。如果用 強(qiáng)堿水解,甘油磷脂水解生成脂肪酸鹽、醇(XOH)和磷酸甘油。b. 氧化作用:與三酰 甘油相似, 甘油磷脂中所含的不飽和脂肪酸在空氣中能被氧化生成過氧化物, 最終形成黑色 過氧化物的聚合物。c. 酶解作用:甘油磷脂可被各種磷脂酶(PLA)專一水解。 (3)鞘磷脂即鞘氨醇磷脂,在高等動(dòng)物的腦髓鞘和紅
49、細(xì)胞膜中特別豐富,也存在于許多植 物種子中。鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷脂酰膽堿(少數(shù)磷脂酰乙醇胺)組成。 . 糖脂是指糖基通過其半縮醛羥基以糖苷鍵與脂質(zhì)連接的化合物。 糖脂可分為鞘糖脂、 甘油糖脂以及由固醇衍生的糖脂,其中鞘糖脂和甘油糖脂是膜脂的主要成分。 (1)鞘糖脂是神經(jīng)酰胺的 1 位羥基被糖基化形成的糖苷化合物。依據(jù)糖基是否含有唾液 酸或硫酸基成分,鞘糖脂又可分為中性鞘糖脂和酸性鞘糖脂。 中性鞘糖脂:又稱腦苷脂,是由神經(jīng)酰胺的 C1 上的羥基與一單糖分子(半乳糖、葡 萄糖等)以糖苷鍵結(jié)合而成,不含唾液酸成分。中性鞘糖脂一般為白色粉狀物,不溶于水、 乙醚,溶于熱乙醇、熱丙酮、吡啶及苯等,性
50、質(zhì)穩(wěn)定,不被皂化。它們不僅是血型抗原,而 且與組織和器官的特異性,細(xì)胞之間的識(shí)別有關(guān)。 酸性鞘糖脂:糖基部分含有唾液酸或硫酸基的鞘糖脂稱為酸性鞘糖脂。糖基部分含有 唾液酸的鞘糖脂常稱神經(jīng)節(jié)苷脂, 是最復(fù)雜的一類甘油鞘脂, 由神經(jīng)酰胺與結(jié)構(gòu)復(fù)雜的寡糖 結(jié)合而成,是大腦灰質(zhì)細(xì)胞膜的組分之一,也存在于脾、腎及其他器官中。 (2)甘油糖脂是糖基二酰甘油, 它是二酰甘油分子 sn-3 位上的羥基與糖基以糖苷鍵連接 而成。 甘油糖脂主要存在于植物和微生物中。 植物的葉綠體和微生物的質(zhì)膜含有大量的甘油 糖脂。它可能在神經(jīng)髓鞘形成中起作用。 . 固醇類也稱甾類,所有固醇類化合物都是以環(huán)戊烷多氫菲為核心結(jié)構(gòu),因
51、羥基的 構(gòu)型不同,可有 及 兩型。 膽固醇(也稱膽甾醇)是一種重要的甾醇類物質(zhì),一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。是動(dòng)物 組織中含量最豐富的固醇類化合物,有游離型和酯型兩種形式。存在于一切動(dòng)物細(xì)胞中,以 腦、神經(jīng)組織及腎上腺中含量特別豐富,其次為肝、腎、脾和皮膚及脂肪組織。4生物膜由哪些脂質(zhì)化合物組成的?各有何理化性質(zhì)? 解答:組成生物膜的脂質(zhì)主要包括磷脂、固醇及糖脂。 解答 (1)磷脂: 甘油磷脂,是生物膜的主要成分。是由 sn-甘油-3-磷酸分子中甘油的兩個(gè)醇羥基與脂 肪酸成酯,第三個(gè)醇羥基與磷酸成酯或磷酸再與其他含羥基的物質(zhì)(如膽堿、乙醇胺、絲氨 酸等醇類衍生物)結(jié)合成酯。 物理性質(zhì):純的甘油磷
52、脂是白色蠟狀固體,大多溶于含少量水的非極性溶劑中。用氯仿 甲醇混合溶劑很容易將甘油磷脂從組織中提取出來。 這類化合物又稱為兩性脂質(zhì)或稱極性 脂質(zhì),具有極性頭和非極性尾兩個(gè)部分。 化學(xué)性質(zhì): a.水解作用: 在弱堿溶液中, 甘油磷脂水解產(chǎn)生脂肪酸的金屬鹽。 強(qiáng)堿水解, 生成脂肪酸鹽、醇(XOH)和磷酸甘油。b.氧化作用:甘油磷脂中所含的不飽和脂肪酸 在空氣中能被氧化生成過氧化物,最終形成黑色過氧化物的聚合物。c.酶解作用:甘油磷 脂可被各種磷脂酶(PLA)專一水解。 鞘磷脂(SM) :鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷脂酰膽堿(少數(shù)為磷脂酰乙醇胺)組成。 鞘磷脂為白色晶體,性質(zhì)穩(wěn)定,不溶于丙酮和乙醚,而
53、溶于熱乙醇中,具兩性解離性質(zhì)。 (2)固醇:高等植物的固醇主要為谷甾醇和豆甾醇。動(dòng)物細(xì)胞膜的固醇最多的是膽固 醇。 膽固醇分子的一端有一極性頭部基團(tuán)羥基因而親水, 分子的另一端具有羥鏈及固醇的環(huán) 狀結(jié)構(gòu)而疏水。因此固醇與磷脂類化合物相似也屬于兩性分子。 物理性質(zhì):膽固醇為白色斜方晶體,無味、無臭,熔點(diǎn)為 148.5,高度真空條件下能 被蒸餾。膽固醇不溶于水,易溶于乙醚、氯仿、苯、丙酮、熱乙醇、醋酸乙酯及膽汁酸鹽溶 液中。介電常數(shù)高,不導(dǎo)電。 化學(xué)性質(zhì):膽固醇 C3 上的羥基易與高級(jí)脂肪酸(如軟脂酸、硬脂酸及油酸等)結(jié)合形成 膽固醇酯。 膽固醇的雙鍵可與氫、 溴、 碘等發(fā)生加成反應(yīng)。 膽固醇可被
54、氧化成一系列衍生物。 膽固醇易與毛地黃糖苷結(jié)合而沉淀, 這一特性可以用于膽固醇的定量測定。 膽固醇的氯仿溶 液與醋酸酐和濃硫酸反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)綠色(LiebermannBurchard 反應(yīng))。 (3)糖脂:是指糖基通過其半縮醛羥基以糖苷鍵與脂質(zhì)連接的化合物。鞘糖脂和甘油 糖脂是膜脂的主要成分。 鞘糖脂: 依據(jù)糖基是否含有唾液酸或硫酸基成分, 鞘糖脂又可分為中性鞘糖脂和酸性 鞘糖脂。中性鞘糖脂,是非極性的。鞘糖脂的疏水尾部伸入膜的脂雙層,極性糖基露在細(xì)胞 表面,它們不僅是血型抗原,而且與組織和器官的特異性,細(xì)胞之間的識(shí)別有關(guān)。中性鞘糖 脂一般為白色粉狀物,不溶于水、乙醚溶于熱乙醇、熱丙酮、吡啶及苯
55、等,性質(zhì)穩(wěn)定,不 被皂化。酸性鞘糖脂,糖基部分含有唾液酸或硫酸基的鞘糖脂。糖基部分含有唾液酸的鞘糖 脂常稱神經(jīng)節(jié)苷脂,不溶于乙醚、丙酮,微溶于乙醇,易溶于氯仿和乙醇的混合液。 甘油糖脂:是糖基二酰甘油,它是二酰甘油分子 sn-3 位上的羥基與糖基以糖苷鍵連接而成。 甘油糖脂主要存在于植物和微生物中。 植物的葉綠體和微生物的質(zhì)膜含有大量的甘 油糖脂。在哺乳動(dòng)物組織中也檢測出了半乳糖基甘油酯,可能在神經(jīng)髓鞘形成中起作用。 5何為必需脂肪酸?哺乳動(dòng)物體內(nèi)所需的必需脂肪酸都有哪些? 解答:哺乳動(dòng)物體內(nèi)能夠自身合成飽和及單不飽和脂肪酸,但不能合成機(jī)體必需的亞油 解答 酸、亞麻酸和花生四烯酸等多不飽和脂肪
56、酸。我們將這些機(jī)體生長必需的而自身不能合成, 必須由膳食提供的脂肪酸稱為必需脂肪酸。 6何為生物膜?主要組成是什么?各有何作用? 解答:任何細(xì)胞都以一層薄膜將其內(nèi)容物與環(huán)境分開,這層薄膜稱為細(xì)胞的質(zhì)膜。此外 解答 大多數(shù)細(xì)胞中還有許多內(nèi)膜系統(tǒng), 它們組成具有各種特定功能的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器如細(xì)胞 核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、高爾基體、過氧化酶體等,在植物細(xì)胞中還有葉綠體。所有 這些膜雖然組分和功能不同,但在電鏡下卻表現(xiàn)出大體相同的形態(tài)、厚度 69nm 的 3 片層 結(jié)構(gòu)。這樣細(xì)胞的外周膜和內(nèi)膜系統(tǒng)稱為“生物膜” 。 (1) 膜脂:其中磷脂、糖脂、固醇等脂質(zhì)物質(zhì)都屬于兩性分子。當(dāng)磷脂分散于水相時(shí)
57、, 分子的疏水尾部傾向于聚集在一起,避開水相,而親水頭部暴露在水相,形成具有雙分子層 結(jié)構(gòu)的封閉囊泡,通稱為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體的形成將細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境分開。膜脂不但是構(gòu)成生物 膜的重要物質(zhì)。而且與細(xì)胞識(shí)別、種的特異性、組織免疫性等有密切的關(guān)系。 (2) 膜蛋白:對物質(zhì)代謝(酶蛋白) 、物質(zhì)傳送、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、信息的接受與傳遞、支持 與保護(hù)均有重要意義。7一些藥物必須在進(jìn)入活細(xì)胞后才能發(fā)揮藥效,但它們中大多是帶電荷或有極性的, 因此不能靠被動(dòng)擴(kuò)散跨膜。 人們發(fā)現(xiàn)利用脂質(zhì)體運(yùn)輸某些藥物進(jìn)入細(xì)胞是很有效的辦法, 試 解釋脂質(zhì)體是如何發(fā)揮作用的。 解答:脂質(zhì)體是脂雙層膜組成的封閉的、內(nèi)部有空間的囊泡。離子和極性水溶性分子(包括 解答 許多藥物)被包裹在脂質(zhì)體的水溶性的內(nèi)部空間,負(fù)載有藥物的脂質(zhì)體可以通過血液運(yùn)輸, 然后與細(xì)胞的質(zhì)膜相融合將藥物釋放入細(xì)胞內(nèi)部。六 酶1作為生物催化劑,酶最重要的特點(diǎn)是什么? 解答:作為生物催化劑,酶最重要的特點(diǎn)是具有很高的催化效率以及高度專一性。 2酶分為哪幾大類?每一大類酶催化的化學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn)是什么?請指出以下幾種酶分 別屬于哪一大類酶: 1 磷酸葡糖異構(gòu)酶(phosphoglu
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