THP1 細(xì)胞培養(yǎng)

1、生物實(shí)驗(yàn)：THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)        THP-1是人外周血的單核細(xì)胞系，最初來(lái)源于急性單核細(xì)胞性白血病患者。屬于懸浮細(xì)胞，適合用于轉(zhuǎn)染或感染實(shí)驗(yàn)。其表面抗原HLA型為：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。工具/原料· 培養(yǎng)基：RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093)· 胎牛血清：Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141)· 二甲亞砜：DMSO (SIGMA D2650)· 雙抗P/S (Penicillin/Streptomycin)（G

2、IBCO #15140-122）方法/步驟1. 1細(xì)胞培養(yǎng)：THP-1細(xì)胞培養(yǎng)于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)環(huán)境為37，5%CO2?？梢悦扛?-4天加一些新鮮的培養(yǎng)基，或直接傳代。2. 2細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到約8x105cells/ml左右時(shí)，即可進(jìn)行傳代。由于是懸浮細(xì)胞，可直接將細(xì)胞吸出，離心之后傳代。傳代最少濃度不應(yīng)少于1x105 cells/ml。3. 3細(xì)胞凍存：取差不多1x107個(gè)細(xì)胞，用1ml含有10%DMSO的FBS重懸，轉(zhuǎn)入凍存管，于-80冰箱過(guò)夜。第二天移入液氮中長(zhǎng)期保存。END注意事項(xiàng)· 細(xì)胞養(yǎng)不好，可能的原因有，THP-1細(xì)

3、胞特別依賴細(xì)胞濃度，ATCC上10 5到106每ML，是一個(gè)很高的密度，細(xì)胞少了就不太容易養(yǎng)好。· 細(xì)胞株的來(lái)源很重要，如直接來(lái)源于ATCC（American Type Culture Collection 美國(guó)模式菌種保藏中心）生命力要強(qiáng)于國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù)的。· 注意細(xì)胞的密度一定要高，介于5×105 106/ML之間，增值的快。細(xì)胞數(shù)量太少，不適合THP-1生長(zhǎng)，一般狀態(tài)不好的THP-1在培養(yǎng)了3天后數(shù)量仍然不多，繼續(xù)培養(yǎng)一天或者兩天，培養(yǎng)基 嚴(yán)重泛黃，細(xì)胞數(shù)會(huì)增加。這一點(diǎn)不同于同是單核細(xì)胞系的U937細(xì)胞。· THP-1細(xì)胞適合在細(xì)胞Ph環(huán)境偏酸性環(huán)境生長(zhǎng)，對(duì)培養(yǎng)基變化非常敏感，所以 盡量使用相同Ph的1640。· 傳代后切忌常移出培養(yǎng)箱觀察，否則會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，狀態(tài)變差，一般首先表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)顆粒變多。一般THP-1 生長(zhǎng)相當(dāng)快，對(duì)于狀態(tài)已經(jīng)不好的情況，建議傳代后34天再觀察，一般4天時(shí)間培養(yǎng)基已明顯泛黃，細(xì)胞數(shù)量巨增;1)THP-1細(xì)胞喜歡酸性條件，你不要老是換培養(yǎng)基。越酸的條件，細(xì)胞密度越大，細(xì)胞就長(zhǎng)得越好;2）不要頻繁換液，一般2-3次換液離心一次（只是補(bǔ)充培養(yǎng)基）3） 使用1640（ATCC推薦），注意加碳酸氫鈉2.5g就可