第七章蛋白質(zhì)檢驗(yàn)

1、1第七章第七章 蛋白質(zhì)檢驗(yàn)蛋白質(zhì)檢驗(yàn) 人人類(lèi)白蛋白分子類(lèi)白蛋白分子 2n本章內(nèi)容概要：本章內(nèi)容概要：第二節(jié)第二節(jié) 體液蛋白質(zhì)測(cè)定體液蛋白質(zhì)測(cè)定第一節(jié)第一節(jié) 概述概述31 1、掌握掌握血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)；個(gè)別血漿蛋白質(zhì)（前血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)；個(gè)別血漿蛋白質(zhì)（前白蛋白、白蛋白）的來(lái)源和生理功能；血清總蛋白和白蛋白的白蛋白、白蛋白）的來(lái)源和生理功能；血清總蛋白和白蛋白的測(cè)定方法和原理。測(cè)定方法和原理。2 2、熟悉熟悉急性時(shí)相反應(yīng)蛋白的概念和種類(lèi)；血清球蛋白和纖維蛋急性時(shí)相反應(yīng)蛋白的概念和種類(lèi)；血清球蛋白和纖維蛋白原的測(cè)定方法白原的測(cè)定方法3 3、了解了解其他蛋白質(zhì)的來(lái)源和生理功能

2、；尿液蛋白和腦脊液蛋白其他蛋白質(zhì)的來(lái)源和生理功能；尿液蛋白和腦脊液蛋白的檢測(cè)的檢測(cè) 。n本章教學(xué)要求：本章教學(xué)要求：4第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述p機(jī)體蛋白質(zhì)機(jī)體蛋白質(zhì)：p體液蛋白質(zhì)的檢測(cè)：體液蛋白質(zhì)的檢測(cè)： 機(jī)體主要的機(jī)體主要的 生物大分子生物大分子含量：人體固體成分的含量：人體固體成分的45%種類(lèi)：種類(lèi)：10萬(wàn)，萬(wàn)，30005000種種/單細(xì)胞單細(xì)胞功能：生長(zhǎng)，代謝、血凝、運(yùn)輸、免功能：生長(zhǎng)，代謝、血凝、運(yùn)輸、免疫、信息傳遞、維持血漿膠體滲透壓疫、信息傳遞、維持血漿膠體滲透壓等等疾病發(fā)生疾病發(fā)生體液蛋白質(zhì)體液蛋白質(zhì)異常異常5要判斷異常要判斷異常首先要清楚正常的血漿蛋白質(zhì)組成，功能及分類(lèi)及特點(diǎn)首

3、先要清楚正常的血漿蛋白質(zhì)組成，功能及分類(lèi)及特點(diǎn)一、血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)一、血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)n組成：組成：種類(lèi)：種類(lèi)：1000種種 500種種 200種種含量：含量：g mg g來(lái)源：肝臟是蛋白質(zhì)主要的加工廠來(lái)源：肝臟是蛋白質(zhì)主要的加工廠6n功能：功能：營(yíng)養(yǎng)作用，修補(bǔ)組織蛋白;維持血漿膠體滲透壓：白蛋白維持75%80%的血漿滲透壓；作為PH緩沖系統(tǒng)的一部分：酸性或堿性蛋白質(zhì)；作為激素、維生素、脂類(lèi)、代謝產(chǎn)物、離子、藥物等的載體；體液免疫防御系統(tǒng)：作為免疫球蛋白與補(bǔ)體等免疫分子；催化作用：酶的本質(zhì)；代謝調(diào)控作用；作為底物，酶或中間產(chǎn)物抑制或激活組織蛋白酶；參與凝血與纖維蛋白溶解

4、；：除因子外均可7n分類(lèi)：分類(lèi)： 依據(jù)依據(jù)來(lái)源來(lái)源、分離方法分離方法和和生理功能生理功能來(lái)源來(lái)源肝生成：肝生成：絕大多數(shù)血漿蛋白質(zhì)絕大多數(shù)血漿蛋白質(zhì)其他組織細(xì)胞生成：其他組織細(xì)胞生成：免疫球蛋白免疫球蛋白和和蛋白類(lèi)激素蛋白類(lèi)激素8分離方法分離方法鹽析法：白蛋白鹽析法：白蛋白/球蛋白球蛋白（pH7.0半飽和的硫酸銨溶液）半飽和的硫酸銨溶液）電泳法：電泳法：醋酸纖維素薄膜電泳：醋酸纖維素薄膜電泳：5種種瓊脂糖凝膠電泳：瓊脂糖凝膠電泳：13種種聚丙烯酰胺凝膠電泳：聚丙烯酰胺凝膠電泳：30種種SDS聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：300種種分分辨辨率率增增高高-+纖維蛋白原纖維

5、蛋白原醋酸纖維素薄膜醋酸纖維素薄膜9即時(shí)可用的蛋白質(zhì)電泳標(biāo)準(zhǔn)即時(shí)可用的蛋白質(zhì)電泳標(biāo)準(zhǔn) 10功能分類(lèi)功能分類(lèi):11二、個(gè)別血漿蛋白質(zhì)二、個(gè)別血漿蛋白質(zhì)n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： MW=54000MW=54000，四個(gè)相同亞基構(gòu)成的四聚體。，四個(gè)相同亞基構(gòu)成的四聚體。n理化性質(zhì)：理化性質(zhì)：p p4.74.7，肝細(xì)胞合成，肝細(xì)胞合成，半壽期半壽期12 12 小時(shí)小時(shí)。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：免疫比濁法免疫比濁法免疫擴(kuò)散技術(shù)免疫擴(kuò)散技術(shù)。（一）前白蛋白（一）前白蛋白（PAPA）急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 12n功能：功能：營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)，載體功能（甲狀腺素營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)，載體功能（甲狀腺素維生素）。維生素）。n臨床意義臨

6、床意義：敏感性高的指標(biāo)；敏感性高的指標(biāo)； 降低：營(yíng)養(yǎng)不良，肝功不全，降低：營(yíng)養(yǎng)不良，肝功不全， 急性炎癥，惡急性炎癥，惡性腫瘤，性腫瘤， 肝硬化及腎炎時(shí)。肝硬化及腎炎時(shí)。n參考值參考值： 200400mg/L 200400mg/L 。13n結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：585585個(gè)個(gè)aaaa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，殘基構(gòu)成的單鏈多肽， MW=66458MW=66458，含，含17個(gè)個(gè)二硫二硫鍵。鍵。n理化性質(zhì)理化性質(zhì)：pI=4pI=45.85.8，肝細(xì)胞合成但不儲(chǔ)存，半衰期為，肝細(xì)胞合成但不儲(chǔ)存，半衰期為15-19 15-19 天，占總蛋白的天，占總蛋白的40%40%60%60%，p p7.47.4時(shí)帶負(fù)電。時(shí)帶負(fù)

7、電。n測(cè)定方法測(cè)定方法：色素結(jié)合法：色素結(jié)合法: :溴甲酚綠（溴甲酚綠（BCGBCG），溴甲酚紫（），溴甲酚紫（BCPBCP）, ,鹽析等。鹽析等。（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 14n功能功能：營(yíng)養(yǎng)作用，載體功能（高親和力），維持血漿滲透壓：營(yíng)養(yǎng)作用，載體功能（高親和力），維持血漿滲透壓和正常和正常p p值。值。n臨床意義臨床意義：合成受食物影響，敏感性較低。：合成受食物影響，敏感性較低。降低降低: :在營(yíng)養(yǎng)不良，肝功不全，急慢性肝疾病時(shí)在營(yíng)養(yǎng)不良，肝功不全，急慢性肝疾病時(shí); ;增高增高: :少見(jiàn)少見(jiàn), ,假性升高。假性升高。n參考值參考值：35-5

8、0 g/35-50 g/15n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)：394394個(gè)個(gè)aaaa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，含殘基構(gòu)成的單鏈多肽，含101012%12%的糖的糖MW=5.5 MW=5.5 萬(wàn)。萬(wàn)。n理化性質(zhì)理化性質(zhì)：pIpI值為值為4.84.8，占，占1-1-球蛋白區(qū)帶顯色的球蛋白區(qū)帶顯色的90。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：免疫化學(xué)法，電泳（酸性凝膠電泳或等電聚焦電免疫化學(xué)法，電泳（酸性凝膠電泳或等電聚焦電泳），利用蛋白酶抑制能力測(cè)定等。泳），利用蛋白酶抑制能力測(cè)定等。（三）（三）1-1-抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（AATAAT）急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 16n功能功能：蛋白酶抑制物（具有：蛋白酶抑制物（具有9090

9、的抑制蛋白酶活力）。如的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的p p依賴(lài)性。依賴(lài)性。n臨床意義：臨床意義：降低：血漿降低：血漿AATAAT僅見(jiàn)于胎兒呼吸迫綜合癥。僅見(jiàn)于胎兒呼吸迫綜合癥。升高：炎癥、術(shù)后，某些激素治療后。升高：炎癥、術(shù)后，某些激素治療后。n參考值：參考值： 0.83 0.831.99g/L 1.99g/L 17n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)：181181個(gè)個(gè)aaaa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，殘基構(gòu)成的單鏈多肽， MW=4MW=4萬(wàn)，萬(wàn)，含含45%45%的糖，的糖，其中唾液酸占其中唾液酸占11%11%12%12%。n理化性質(zhì)：理化性質(zhì)：p

10、I pI 值值2.72.73.53.5，肝合成，膿毒癥時(shí)粒細(xì)胞和單核，肝合成，膿毒癥時(shí)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞及某些腫瘤組織也可合成。細(xì)胞及某些腫瘤組織也可合成。 位于位于1-1-球蛋白區(qū)帶。球蛋白區(qū)帶。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：免疫化學(xué)法（擴(kuò)散免疫化學(xué)法（擴(kuò)散, ,濁度）濁度）, ,化學(xué)法（間接法），化學(xué)法（間接法），ELISAELISA法等法等（四）（四）1-1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAAG） 急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 18n功能：功能：與免疫防御功能有關(guān)，機(jī)制不詳；抑制血小板凝集與免疫防御功能有關(guān)，機(jī)制不詳；抑制血小板凝集影響膠原纖維形成；參與脂類(lèi)運(yùn)輸。影響膠原纖維形成；參與脂類(lèi)運(yùn)輸

11、。n臨床意義：臨床意義：升高：急性炎癥，組織損傷，風(fēng)濕，腫瘤，升高：急性炎癥，組織損傷，風(fēng)濕，腫瘤，AMI AMI ，潰結(jié)時(shí)；，潰結(jié)時(shí)；降低：營(yíng)養(yǎng)不良降低降低：營(yíng)養(yǎng)不良降低, , 嚴(yán)重肝損傷和雌激素作用。嚴(yán)重肝損傷和雌激素作用。n參考值：參考值：.25.252.0g/L 2.0g/L 。19n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)：590590個(gè)個(gè)aaaa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，殘基構(gòu)成的單鏈多肽， MW=6.5萬(wàn)萬(wàn)，含萬(wàn)萬(wàn)，含4%4%的糖。的糖。n理化性質(zhì)理化性質(zhì)：pI pI 值值.7-.7-.8.8，在白蛋白和，在白蛋白和1-1-球蛋白之間。球蛋白之間。胎兒肝卵黃囊合成，成人量微，升高由于腫瘤細(xì)胞合成。胎兒肝卵黃囊合成，

12、成人量微，升高由于腫瘤細(xì)胞合成。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：免疫化學(xué)法（擴(kuò)散免疫化學(xué)法（擴(kuò)散, ,火箭電泳）火箭電泳）,ELISA,ELISA等等（五）（五）甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)(AFP)20n功能：功能：胎兒血漿主要蛋白質(zhì)，調(diào)節(jié)肝細(xì)胞生長(zhǎng)和腦細(xì)胞發(fā)胎兒血漿主要蛋白質(zhì)，調(diào)節(jié)肝細(xì)胞生長(zhǎng)和腦細(xì)胞發(fā)育；抑制細(xì)胞和體液的免疫反應(yīng)；維持正常妊娠，防止母嬰育；抑制細(xì)胞和體液的免疫反應(yīng)；維持正常妊娠，防止母嬰排斥。排斥。n臨床意義：臨床意義：胎兒產(chǎn)前監(jiān)測(cè)（羊水或母血）胎兒產(chǎn)前監(jiān)測(cè)（羊水或母血）增高：原發(fā)性肝癌患者診斷和鑒別（增高：原發(fā)性肝癌患者診斷和鑒別（80%80%原發(fā)增高），原發(fā)增高）， 其他其他癌癥也

13、可見(jiàn)增高。癌癥也可見(jiàn)增高。n參考值：參考值：20-100g/L(20-100g/L(成人成人) ) 5g/L( 5g/L(新生兒新生兒) ) 21n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： 兩對(duì)肽鏈兩對(duì)肽鏈形成四聚體，有變異體。形成四聚體，有變異體。n理化性質(zhì)：理化性質(zhì)：肝合成，肝合成， pI pI 值為值為4.14.1，電泳位，電泳位a2 -a2 -球蛋白區(qū)帶球蛋白區(qū)帶n測(cè)定方法：測(cè)定方法：電泳法，免疫化學(xué)法（擴(kuò)散電泳法，免疫化學(xué)法（擴(kuò)散, ,濁度）濁度）, ,化學(xué)法等化學(xué)法等（六）（六）結(jié)合珠蛋白結(jié)合珠蛋白(Hp) (Hp) 急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 22n功能：功能：與紅細(xì)胞中釋出自由與紅細(xì)胞中釋出自由Hb

14、 Hb 結(jié)合結(jié)合, ,防止防止Hb Hb 從尿中丟失保存從尿中丟失保存鐵鐵, , 急性溶血后一周再生恢復(fù)。急性溶血后一周再生恢復(fù)。高效的過(guò)氧化物酶。高效的過(guò)氧化物酶。需鐵細(xì)菌的天然抑菌劑。需鐵細(xì)菌的天然抑菌劑。n臨床意義：臨床意義：升高：急性時(shí)相反應(yīng)；升高：急性時(shí)相反應(yīng)；降低：血管內(nèi)溶血時(shí)；雌激素作用。降低：血管內(nèi)溶血時(shí)；雌激素作用。n參考值參考值：0.5-2.2 g/L0.5-2.2 g/L23n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： MW=62MW=6280 80 萬(wàn)萬(wàn), ,分子量最大，由四個(gè)相同的亞基組分子量最大，由四個(gè)相同的亞基組成，含糖量約。成，含糖量約。n理化性質(zhì)：理化性質(zhì)：肝細(xì)胞與單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)中合成，

15、半壽期肝細(xì)胞與單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)中合成，半壽期5 5 天。天。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：免疫化學(xué)等免疫化學(xué)等（七）（七）2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG) (AMG) 24n功能：功能：與多種分子和離子結(jié)合，影響蛋白水解酶活性（主要與多種分子和離子結(jié)合，影響蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護(hù)某些酶的作用）。的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護(hù)某些酶的作用）。n臨床意義臨床意義：嬰幼兒及兒童比成人高；：嬰幼兒及兒童比成人高；升高：雌激素，低蛋白血癥可使其含量升高；升高：雌激素，低蛋白血癥可使其含量升高；降低：胰腺炎及前列腺癌時(shí)。降低：胰腺炎及前列腺癌時(shí)。n參考值：參考值：1.31-2.93g/L

16、1.31-2.93g/L25n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： MW=12-16 MW=12-16 萬(wàn)萬(wàn), 1046, 1046個(gè)個(gè)aaaa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，含殘基構(gòu)成的單鏈多肽，含糖約，每分子銅藍(lán)蛋白可結(jié)合個(gè)銅原子。糖約，每分子銅藍(lán)蛋白可結(jié)合個(gè)銅原子。n理化性質(zhì)理化性質(zhì)：肝合成：肝合成, ,巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成少量；巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞合成少量；pI pI 值值為為4.44.4， 具遺傳基因多態(tài)性具遺傳基因多態(tài)性。n測(cè)定方法測(cè)定方法：免疫化學(xué)（擴(kuò)散或比濁）等：免疫化學(xué)（擴(kuò)散或比濁）等（八）（八）銅藍(lán)蛋白銅藍(lán)蛋白(CER) (CER) 急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 26n功能：功能：具氧化酶活性且起抗氧化劑

17、作用，銅的無(wú)毒代謝庫(kù)具氧化酶活性且起抗氧化劑作用，銅的無(wú)毒代謝庫(kù)n臨床意義：臨床意義：增加增加感染感染, ,創(chuàng)傷創(chuàng)傷, ,腫瘤腫瘤; ; 降低降低-營(yíng)養(yǎng)不良，嚴(yán)重肝病及腎綜營(yíng)養(yǎng)不良，嚴(yán)重肝病及腎綜; ;協(xié)助診斷協(xié)助診斷Wilson Wilson 病病n參考值：參考值：0.21-0.53g/L0.21-0.53g/L27n結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)： MW=7.7 MW=7.7 萬(wàn)萬(wàn), ,單鏈糖蛋白，含糖約。單鏈糖蛋白，含糖約。n理化性質(zhì)：理化性質(zhì)：肝細(xì)胞合成，肝細(xì)胞合成， pI pI 值為值為5.5-5.9,5.5-5.9,半壽期半壽期7 7 天，可天，可逆結(jié)合多價(jià)離子如逆結(jié)合多價(jià)離子如Fe,Cu,Zn,Co

18、Fe,Cu,Zn,Co 等，一分子等，一分子TRF TRF 可結(jié)合兩個(gè)三可結(jié)合兩個(gè)三價(jià)鐵。價(jià)鐵。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：免疫擴(kuò)散法，放免法和免疫比濁法等。免疫擴(kuò)散法，放免法和免疫比濁法等。（九）（九）轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF) (TRF) 急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 28n功能：功能：運(yùn)輸鐵。運(yùn)輸鐵。n臨床意義：臨床意義：血血TRF TRF 濃度受鐵供應(yīng)調(diào)節(jié)，缺鐵濃度受鐵供應(yīng)調(diào)節(jié)，缺鐵TRF TRF 升，鐵治升，鐵治療后恢復(fù)。可用于貧血的診斷和對(duì)治療的監(jiān)測(cè)。療后恢復(fù)?？捎糜谪氀脑\斷和對(duì)治療的監(jiān)測(cè)。降低降低: :急性時(shí)相反應(yīng)、慢性肝病、營(yíng)養(yǎng)不良及蛋白丟失時(shí)；急性時(shí)相反應(yīng)、慢性肝病、營(yíng)養(yǎng)不良

19、及蛋白丟失時(shí)；升高：妊娠或雌激素會(huì)使其降低升高：妊娠或雌激素會(huì)使其降低; ;缺鐵性低色素貧血。缺鐵性低色素貧血。n參考值：參考值： 2.5-4.3 g/L (2.5-4.3 g/L (成人成人) ) 1.30-2.75 g/L (1.30-2.75 g/L (新新生兒生兒) )29n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： MW=11800MW=11800， 100100個(gè)個(gè)aaaa殘基構(gòu)成的單鏈多肽，分子中含殘基構(gòu)成的單鏈多肽，分子中含一對(duì)二硫鍵，不含糖。一對(duì)二硫鍵，不含糖。n理化性質(zhì)：理化性質(zhì)： pI pI 值為值為5.75.7，淋巴細(xì)胞合成，存在細(xì)胞表面，特，淋巴細(xì)胞合成，存在細(xì)胞表面，特別是淋巴和腫瘤細(xì)胞。釋放入

20、血循環(huán)。半衰期別是淋巴和腫瘤細(xì)胞。釋放入血循環(huán)。半衰期107 107 分鐘，幾乎分鐘，幾乎由腎小管回收。由腎小管回收。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：放射免疫化學(xué)等。放射免疫化學(xué)等。（十）（十）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG) (BMG) 30n功能：功能：分子量小，可自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，在腎小管分子量小，可自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，在腎小管幾乎全部重吸收，可監(jiān)測(cè)腎小管功能；是幾乎全部重吸收，可監(jiān)測(cè)腎小管功能；是HLAHLA鏈的輕鏈鏈的輕鏈部分。部分。 n臨床意義：臨床意義：增高：腎功能衰竭，炎癥及腫瘤時(shí)。增高：腎功能衰竭，炎癥及腫瘤時(shí)。n參考值：參考值：1.0 2.5 mg/L 1.0 2.5 mg/

21、L （血漿）（血漿） 31n結(jié)構(gòu)：結(jié)構(gòu)： MW11.5-14 MW11.5-14 萬(wàn)萬(wàn)，分子含個(gè)相同的亞基，亞基間靠，分子含個(gè)相同的亞基，亞基間靠非共價(jià)鍵連接成圓盤(pán)狀多聚體。非共價(jià)鍵連接成圓盤(pán)狀多聚體。n理化性質(zhì)：理化性質(zhì)：肝合成，肝合成， pI pI 值為值為6.26.2，電泳位于，電泳位于 r r 區(qū)帶區(qū)帶。n測(cè)定方法：測(cè)定方法：半定量沉淀法（早），免疫化學(xué)法。半定量沉淀法（早），免疫化學(xué)法。（十一）（十一）C-C-反應(yīng)蛋白質(zhì)反應(yīng)蛋白質(zhì)(CRP) (CRP) 急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 32n功能：功能：結(jié)合多糖，磷脂和核酸；激活補(bǔ)體，抗凝。結(jié)合多糖，磷脂和核酸；激活補(bǔ)體，抗凝。n臨

22、床意義：臨床意義：第一個(gè)認(rèn)定的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白第一個(gè)認(rèn)定的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白, ,是急性時(shí)相是急性時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)敏感指標(biāo)，在、創(chuàng)傷、感染、外科手術(shù)反應(yīng)的一個(gè)敏感指標(biāo)，在、創(chuàng)傷、感染、外科手術(shù)時(shí)含量迅速升高，達(dá)到正常的時(shí)含量迅速升高，達(dá)到正常的2000倍。倍。n參考值：參考值： 8.0mg/L 8.0mg/L （血漿）（血漿） 33三、疾病時(shí)的血漿蛋白質(zhì)三、疾病時(shí)的血漿蛋白質(zhì)n急性時(shí)相反應(yīng)蛋白：急性時(shí)相反應(yīng)蛋白：在急性炎癥或某些組織損傷時(shí)，有些在急性炎癥或某些組織損傷時(shí)，有些血漿蛋白質(zhì)含量會(huì)增高，有些會(huì)降低，這種現(xiàn)象稱(chēng)為血漿蛋白質(zhì)含量會(huì)增高，有些會(huì)降低，這種現(xiàn)象稱(chēng)為急性時(shí)急性時(shí)相反應(yīng)相反應(yīng)。而這些

23、血漿蛋白質(zhì)被稱(chēng)為。而這些血漿蛋白質(zhì)被稱(chēng)為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。（一）炎癥、創(chuàng)傷（一）炎癥、創(chuàng)傷 前述除了甲胎蛋白、前述除了甲胎蛋白、2 2 微球蛋白和微球蛋白和 2 2- -巨球蛋白巨球蛋白以外再加上纖維蛋白原的九種蛋白質(zhì)以外再加上纖維蛋白原的九種蛋白質(zhì)34n急性時(shí)相反應(yīng)蛋白分類(lèi)：急性時(shí)相反應(yīng)蛋白分類(lèi)：升高：升高：其他種蛋白質(zhì)。其他種蛋白質(zhì)。降低：降低：前白蛋白、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白前白蛋白、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白35n急性時(shí)相反應(yīng)機(jī)制：急性時(shí)相反應(yīng)機(jī)制： 當(dāng)機(jī)體受到損傷或炎癥時(shí)釋放小分子蛋白質(zhì)導(dǎo)致肝細(xì)胞當(dāng)機(jī)體受到損傷或炎癥時(shí)釋放小分子蛋白質(zhì)導(dǎo)致肝細(xì)胞中上述蛋白質(zhì)的合成增加或減少。中上述蛋白

24、質(zhì)的合成增加或減少。n急性時(shí)相反應(yīng)的應(yīng)用：急性時(shí)相反應(yīng)的應(yīng)用： 急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)急性時(shí)相反應(yīng)時(shí), ,血漿蛋白質(zhì)的變化和創(chuàng)傷的時(shí)間進(jìn)程有血漿蛋白質(zhì)的變化和創(chuàng)傷的時(shí)間進(jìn)程有關(guān)，可用于鑒別急性、亞急性和慢性病理狀態(tài)。關(guān)，可用于鑒別急性、亞急性和慢性病理狀態(tài)。3637（二）（二）肝臟肝臟疾?。杭膊。海ㄈㄈ┠I臟腎臟疾?。杭膊。耗I病早期腎病早期嚴(yán)重腎臟嚴(yán)重腎臟選擇性蛋白質(zhì)丟失選擇性蛋白質(zhì)丟失非選擇性蛋白質(zhì)丟失非選擇性蛋白質(zhì)丟失（四）（四）風(fēng)濕風(fēng)濕?。翰。好庖咔虻鞍?，免疫球蛋白，1 1- -酸性糖蛋白，結(jié)合珠蛋白及酸性糖蛋白，結(jié)合珠蛋白及升高升高（五）（五）遺傳性遺傳性缺陷：缺陷：多由于編碼相應(yīng)蛋白質(zhì)的

25、基因發(fā)生突變或缺失。多由于編碼相應(yīng)蛋白質(zhì)的基因發(fā)生突變或缺失。非典型的急性時(shí)相反應(yīng)，非典型的急性時(shí)相反應(yīng)，急性肝炎急性肝炎慢性肝硬化慢性肝硬化 見(jiàn)表見(jiàn)表8-38-33839第二節(jié)第二節(jié) 體液蛋白質(zhì)測(cè)定體液蛋白質(zhì)測(cè)定總蛋白測(cè)定總蛋白測(cè)定個(gè)別個(gè)別蛋白質(zhì)的測(cè)定蛋白質(zhì)的測(cè)定蛋白分離測(cè)定技術(shù)蛋白分離測(cè)定技術(shù)p發(fā)展趨勢(shì)發(fā)展趨勢(shì): :p測(cè)定體液標(biāo)本測(cè)定體液標(biāo)本: :血漿血漿：普遍：普遍尿液，腦脊液和胸腹水等尿液，腦脊液和胸腹水等：有選擇性的組織病變檢查：有選擇性的組織病變檢查40免疫化學(xué)法特異定量個(gè)別蛋白質(zhì)免疫化學(xué)法特異定量個(gè)別蛋白質(zhì)p體液蛋白質(zhì)的測(cè)定方法概括：體液蛋白質(zhì)的測(cè)定方法概括：常規(guī)：免疫濁度法、免

26、疫擴(kuò)散法，免疫電泳法，常規(guī)：免疫濁度法、免疫擴(kuò)散法，免疫電泳法，微量：放射免疫測(cè)定（微量：放射免疫測(cè)定（RIARIA），酶免疫測(cè)定法（），酶免疫測(cè)定法（ELA/ELISAELA/ELISA）41電泳測(cè)定：電泳測(cè)定：定量化學(xué)測(cè)定定量化學(xué)測(cè)定TPr，Alb電泳電泳 組成圖譜組成圖譜 半定量半定量 定量定量染料結(jié)合法，染料結(jié)合法，UVUV法，折光法等法，折光法等42一、血清總蛋白測(cè)定n假設(shè)：假設(shè)：、 純多肽鏈，含氮量平均為純多肽鏈，含氮量平均為16 % 16 % 、各種蛋白質(zhì)與化學(xué)試劑反應(yīng)性一致，僅為相對(duì)定量、各種蛋白質(zhì)與化學(xué)試劑反應(yīng)性一致，僅為相對(duì)定量43n測(cè)定依據(jù)：蛋白質(zhì)測(cè)定一般利用蛋白質(zhì)以下的

27、結(jié)構(gòu)或性質(zhì)測(cè)定依據(jù)：蛋白質(zhì)測(cè)定一般利用蛋白質(zhì)以下的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)1 1、元素組成測(cè)定：、元素組成測(cè)定：含含N N穩(wěn)定；穩(wěn)定；2 2、重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)：、重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)：具有多個(gè)肽鍵；具有多個(gè)肽鍵；3 3、酪氨酸和色氨酸與、酪氨酸和色氨酸與Folin-Folin-酚試劑反應(yīng)酚試劑反應(yīng)顯色顯色或或UV UV 吸收；吸收；4 4、與色素結(jié)合的能力：、與色素結(jié)合的能力：與染料以離子鍵或共價(jià)鍵連接；與染料以離子鍵或共價(jià)鍵連接；5 5、沉淀后借濁度測(cè)定：、沉淀后借濁度測(cè)定：光度計(jì)測(cè)定；光度計(jì)測(cè)定；6 6、光折射測(cè)定：、光折射測(cè)定：折射儀測(cè)定。折射儀測(cè)定。44n方法方法：1.1.凱氏定氮法參考方法凱氏定氮法參考方

28、法2.2.雙縮脲法雙縮脲法( ( 推薦推薦) ) 3.3.酚試劑法酚試劑法4.4.散射比濁法散射比濁法5.5.染料結(jié)合法染料結(jié)合法6. UV 6. UV 法法. .折光測(cè)定法折光測(cè)定法451.凱氏定氮法參考標(biāo)準(zhǔn)方法凱氏定氮法參考標(biāo)準(zhǔn)方法(0.05mg N 0.3g pro)消化消化用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨；（耗時(shí)）用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨；（耗時(shí)） 蒸餾蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)；用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)； 吸收吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使HH+ + ）滴定滴定用已標(biāo)定的無(wú)機(jī)酸滴用已標(biāo)定的無(wú)機(jī)酸滴（使（使H+ 恢復(fù)），恢復(fù)），計(jì)算總

29、氮量計(jì)算總氮量定蛋白定蛋白（總氮量總氮量- -非蛋白氮）非蛋白氮）6.25=6.25=蛋白含量蛋白含量納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應(yīng)生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應(yīng)生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含 量成正比。量成正比。 n原理：原理：46n評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確度高，精密度優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確度高，精密度高，靈敏度高，是公認(rèn)的參高，靈敏度高，是公認(rèn)的參考方法。考方法。缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，不適合常規(guī)檢測(cè)，血清各蛋不適合常規(guī)檢測(cè)，血清各蛋白含氮量會(huì)有所變化尤其是白含氮量會(huì)有所變化尤其是疾病時(shí)。疾病時(shí)。 n應(yīng)用：應(yīng)用：標(biāo)

30、準(zhǔn)蛋白的標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)定及校正其它常規(guī)方法及校正其它常規(guī)方法472.雙縮脲法雙縮脲法n原理：原理： 蛋白質(zhì)中的肽鍵蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-CONH-）在在堿性堿性溶液中能與溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生作用而產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。條件：至少含兩個(gè)肽鍵（條件：至少含兩個(gè)肽鍵（-CONH-CONH-）基團(tuán)才能和）基團(tuán)才能和CuCu2+2+形成絡(luò)合物形成絡(luò)合物, ,氨基酸及二肽無(wú)反氨基酸及二肽無(wú)反 應(yīng)應(yīng), ,三肽以上才能反應(yīng)。三肽以上才能反應(yīng)。 雙縮

31、脲生成 加熱加熱NH322H180022222N 端端C 端端48n評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，10g-120g/L10g-120g/L線性好，線性好，特異性與精密度好，批內(nèi)特異性與精密度好，批內(nèi)CV%CV%2%2%，顯色穩(wěn)定。，顯色穩(wěn)定。缺點(diǎn)：靈敏度較差，對(duì)蛋白質(zhì)含量低的體液標(biāo)本不適缺點(diǎn)：靈敏度較差，對(duì)蛋白質(zhì)含量低的體液標(biāo)本不適合。合。 n應(yīng)用：應(yīng)用：常規(guī)推薦方法。手工或上機(jī)使用。常規(guī)推薦方法。手工或上機(jī)使用。49二、血清白蛋白測(cè)定p方法方法：1.1.染料結(jié)合法染料結(jié)合法( ( 推薦推薦) ) 2 2. .免疫化學(xué)法免疫化學(xué)法3.3.電泳法電泳法4 4

32、. .鹽析法鹽析法501.1.染料結(jié)合法染料結(jié)合法( ( 推薦推薦) )n原理原理: : 血清血清ALBALB可通過(guò)可通過(guò)離子鍵或疏水鍵離子鍵或疏水鍵與包括與包括染料染料在內(nèi)的各種在內(nèi)的各種有機(jī)離子結(jié)合有機(jī)離子結(jié)合, ,而而GLBGLB很少結(jié)合外源性染料很少結(jié)合外源性染料, ,可在可在不分離不分離ALBALB與與GLBGLB的情況下直接測(cè)定的情況下直接測(cè)定ALBALB。染料染料BCGBCGBCPBCP優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)缺點(diǎn) 易于和非人源性白蛋白結(jié)合易于和非人源性白蛋白結(jié)合 與白蛋白結(jié)合特異性較差與白蛋白結(jié)合特異性較差 與與非人源性白蛋白結(jié)合力弱非人源性白蛋白結(jié)合力弱 與白蛋白結(jié)合特異性好與白蛋白結(jié)

33、合特異性好 在在3030秒內(nèi)測(cè)可提高特異性秒內(nèi)測(cè)可提高特異性51n應(yīng)用及評(píng)價(jià)應(yīng)用及評(píng)價(jià): : 嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間的嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間的BCGBCG法法既適合既適合手工手工也適合也適合自動(dòng)自動(dòng)化分析。化分析。臨床上推薦使用臨床上推薦使用。522 2. .免疫化學(xué)法免疫化學(xué)法n原理及特點(diǎn)原理及特點(diǎn):n應(yīng)用：應(yīng)用：特異性高特異性高,但成本較高但成本較高,費(fèi)時(shí)費(fèi)時(shí),生化檢驗(yàn)用的不多生化檢驗(yàn)用的不多.53p參考范圍參考范圍: :成人成人353555g/L.55g/L.p臨床意義：臨床意義：白蛋白升高：白蛋白升高：白蛋白降低：白蛋白降低：丟失過(guò)多丟失過(guò)多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成減少白蛋白合成減少 水腫水腫 先天性先天性ALBALB缺乏病缺乏病真性升高：未見(jiàn)真性升高：未見(jiàn)假性升高：機(jī)體明顯失水，或治療輸入過(guò)多白蛋白假性升高：機(jī)體明顯失水，或治療輸入過(guò)多白蛋白54三、血清球蛋白測(cè)定三、血清球蛋白測(cè)定p方法方法：間接法間接法: :TP-ALB=GLBTP-ALB=GLB直接法直接法: :乙醛酸比色法乙醛酸比色法(GLB(GLB中