免疫學：免疫血清學技術課件

1、第13章 免疫學技術概論重點 免疫學技術類型 影響免疫血清學反應的因素第1節(jié) 免疫血清學技術概述免疫血清學技術類型：凝集試驗、沉淀試驗、標記抗體技術（免疫熒光抗體技術、免疫酶標記技術、放射免疫測定）、中和試驗等血清學反應的一般特點特異性和交叉性抗原與抗體結(jié)合機理血清學反應的影響因素：電解質(zhì)、溫度、酸堿度 帶現(xiàn)象：前帶 后帶第3節(jié) 血清學技術的應用及發(fā)展趨勢疫病診斷動植物生理活性物質(zhì)研究物種及微生物鑒定動植物形狀的免疫標記生物制品研究致病機理研究分子生物學研究發(fā)展趨勢第14章 凝聚性試驗 第1節(jié) 凝集試驗 直接凝集試驗：顆粒性抗原間接凝集試驗：間接血凝實驗、乳膠凝集試驗、炭素凝集試驗間接凝集試驗

2、：基本原理可溶性抗原（或抗體）+惰性載體（聚苯乙烯乳膠微粒、炭粒、綿羊紅細胞等） 抗原（或抗體）致敏載體 抗原（抗體）致敏載體+相應抗體（或抗原） 被動載體凝集（間接乳膠凝集、間接炭素凝集、間接紅細胞凝集等 ）環(huán)狀沉淀試驗雙向單擴散（輻射擴散）雙向雙擴散免疫電泳對流免疫電泳火箭免疫電泳環(huán)狀沉淀試驗原理：小試管內(nèi)，下層沉 淀素與上層沉淀原 在界面應，形成白 色沉淀環(huán)。用途：檢測皮毛中的炭疽 桿菌抗原（Ascoli試驗）標記抗體的制備：抗原免疫動物 抗體提取IgG標記標記抗體的提純標記抗體的鑒定熒光抗體染色：標本制備染色（直接法、間接發(fā)）應用：用AbF檢測抗原 （定性、定位）特點：敏感，需熒光顯微

3、鏡免疫酶標記技術原理：常用標記酶：辣根過氧化物酶（HRP）酶標抗體的制備：抗原免疫動物 抗體提取IgG標記（戊二醛法、過碘酸鈉法）標記抗體的提純標記抗體的鑒定常用免疫酶技術：免疫酶組織化學染色技術、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、斑點酶聯(lián)免疫吸附試驗（Dot-ELISA）應用：放射免疫分析原理：競爭性RIA 固相夾心RIAAg*(F)+Ab Ag*-Ab(B) + Ag Ag-Ab標記用同位素：3H、125I、32P、35S常用方法：液相放射免疫測定、固相非競爭放射免疫測定應用：用于藥物、激素、酶、腫瘤抗原等測定 中和試驗（病毒、毒素中和試驗）原理：病毒與抗血清中抗體特異結(jié)合后失去感 染易感動

4、物、雞或鴨胚、細胞活性例1 -NDV 911d雞胚 2448h雞胚死亡 -NDV+抗血清 911d雞胚 雞胚不死亡例2 口蹄疫病毒(FMDV) 47d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗血清 47d乳鼠 乳鼠不死亡例3 FMDV 仔豬腎傳代細胞(IB-RS-2)單層細胞 細胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、脫落、裂解FMDV+抗血清 IB-RS-2單層細胞 細胞無病變CPU用途：1.用已知血清鑒定病毒診斷病毒病2.用已知病毒檢測血清抗體診斷病毒感染，測定病毒免疫血清效價（中和價）免疫檢測新技術SPA免疫檢測技術免疫膠體金檢測技術：免疫膠體金光鏡染色法、免疫膠體金電鏡染色法、膠體金免疫層析法等免

5、疫轉(zhuǎn)印技術免疫核酸探針技術細胞免疫技術一E玫瑰花環(huán)試驗原理：人、豬、牛、羊等的T細胞膜上的CD2是綿羊紅細胞受體，馬、豬的T細胞膜上的CD2是豚鼠紅細胞的受體。E花環(huán) 二. 酸性醋酸萘酯酶測定 原理：酸性醋酸萘酯酶 醋酸萘酯 萘酚+醋酸離子 + 六偶氮副品紅 紅色反應物 + 甲基綠 紅黑色顆粒用途：1.鑒別T、B細胞；2.血液中T細胞計數(shù) 三淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（一）形態(tài)學試驗法原理：PHA+T細胞（有PHA受體） 轉(zhuǎn)化 大的淋巴母細胞 顯微鏡觀察計算轉(zhuǎn)化率 轉(zhuǎn)化率=(過渡型細胞+母細胞)/200個淋巴細胞100%特點：簡便，準確性較差 （二）3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）摻入法原理： 試驗管 對照管 PHA+T細胞+3H-TdR PHA+T細胞 轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化 淋巴母細胞 淋巴母細胞 （摻入3H-TdR） （無3H-TdR摻入） 液體閃爍儀測摻入 測CPM