血小板糖蛋白特異性抗體在骨髓增生異常綜合征患者中的表達(dá)及其意

1、血小板糖蛋白特異性抗體在骨髓增生異常綜合征患者中的表達(dá)及其意【摘要】本研究討論血小板糖蛋白特異性抗體在骨髓增生異常綜合征ds患者發(fā)病中的作用。采用改良的aipa法檢測(cè)血漿血小板糖蛋白特異性抗體(抗gpb/a抗體和抗gpb/抗體)。假設(shè)患者的d值大于正常d值的均數(shù)+3倍標(biāo)準(zhǔn)差那么為陽(yáng)性。結(jié)果說(shuō)明：ds組總陽(yáng)性率為16.67%(5/30)，itp組總陽(yáng)性率為46.67%(14/30)，兩者之間差異有顯著性p0.05。結(jié)論：部分ds患者的糖蛋白特異性抗體為陽(yáng)性，這說(shuō)明部分ds患者的血小板減少與免疫因素有關(guān)；血小板糖蛋白特異性抗體所致的血小板破壞在ds患者的血小板減少中可能具有一定作用，這為ds患者的

2、免疫抑制劑治療提供了新的根據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】骨髓增生異常綜合征血小板特異性抗體expressinfspeifiantibdiesagainstplateletglyprteinsinpatientsithdsanditssignifianedepartentfheatlgy,1departentfbstetris,2departentfediallabratryexainatin,thesendhspitalfshandnguniversity,jinan250033,hinakeyrdsyeldysplastisyndre;plateletspeifiantibdy;glyprteinjexph

3、eatl2022;15(1):95-98材料和方法一般資料血小板糖蛋白特異性抗體的檢測(cè)血漿的別離及保存edta抗凝血2l離心后取上清，置80保存。多孔板抗體包被準(zhǔn)備包被液10l,抗體終濃度為3g/l，加樣,100l/ell，塑料薄膜覆蓋,4過(guò)夜，用0.01l/lpbs+teen洗滌2次，每孔參加封閉液(0.01l/lpbs+teen+3%bsa)200l,置室溫下30分鐘，去除封閉液，控干，即用。單克隆抗體俘獲制備單克隆抗體sz2或hip8稀釋液(4g/l)，每孔參加50l單克隆抗體稀釋液，室溫孵育60分鐘(搖床)，用pbs+teen洗板3次，待用于aipa。改良aipa取型全血50l,edt

4、a抗凝，離心別離血小板，用pbs+edta洗滌2次，以2lpbs+edta重新懸浮血小板，調(diào)節(jié)血小板濃度至1109/l，移至ep管中,每管血小板1108個(gè)，每管參加100l待測(cè)血漿,在室溫下孵育60分鐘，pbs+edta洗滌3次，然后用溶解緩沖液(含蛋白酶抑制劑)110l溶解血小板,置于搖床上,4孵育30分鐘,離心30分鐘，取100l上清液以400l稀釋緩沖液稀釋?zhuān)訕佑谘蚩故蠓@單克隆抗體包被的96孔板上,設(shè)雙復(fù)孔,每孔參加100l稀釋上清，室溫孵育60分鐘(搖床)，0.01l/lpbs+teen洗滌4次，每孔參加100l堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗人igg13000，室溫孵育60分鐘(搖床)，0.

5、01l/lpbs+teen洗滌6次，加100lpnpp/底物緩沖液,孵育15-60分鐘,至顯色，全自動(dòng)酶標(biāo)儀分別于405n、495n波長(zhǎng)處觀察結(jié)果，405n處d值減去495n處d值為患者的d值,取2復(fù)孔的平均值為測(cè)定值，每板設(shè)4個(gè)正常對(duì)照,假設(shè)患者的d值大于正常d值的均數(shù)+3倍標(biāo)準(zhǔn)差那么為陽(yáng)性。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以陽(yáng)性率表示。兩個(gè)率的比較采用卡方檢驗(yàn)。d值采用t檢驗(yàn)。結(jié)果各組血漿gp特異性抗體程度抗gpb/ad值：ds組為0.2730.026；itp組為0.4870.732；正常對(duì)照組為：0.2640.013。抗gpb/d值：ds組為0.3530.032；itp組為0.5390.733；正常對(duì)照組

6、為：0.3190.024?？筭pd值ds組與正常對(duì)照組相比，p0.01，差異具有顯著性；itp組與正常對(duì)照組相比，p0.05，無(wú)顯著性差異表1。血漿gp特異性抗體aipa法檢測(cè)結(jié)果血漿gp特異性抗體ds組中抗gpb/a陽(yáng)性者4例，抗gpib/陽(yáng)性者2例，雙陽(yáng)性者1例；itp組中抗gpb/a陽(yáng)性者10例，抗gpib/陽(yáng)性者7例，雙陽(yáng)性者3例；正常對(duì)照組陽(yáng)性者為0表2。抗gpb/a特異性抗體陽(yáng)性率ds組為13.33%(4/30)，itp組為33.33%(10/30)，兩組比較：2=3.35，p0.05，差異無(wú)顯著性。與正常對(duì)照組比較：ds組p0.05，差異無(wú)顯著性；itp組p0.05，有顯著性差異

7、表2?？筭pb/特異性抗體陽(yáng)性率ds組為6.67%(2/30)，itp組為23.33%(7/30)，兩組比較：2=2.09，p0.05，差異無(wú)顯著性。與正常對(duì)照組比較：ds組和itp組p值均大于0.05，無(wú)顯著性差異表2?？傟?yáng)性率ds組為16.67%(5/30)，itp組為46.67%(14/30)，兩組比較：2=6.239，p0.05，兩組之間有顯著性差異。與正常對(duì)照組比較：ds組p0.05，差異無(wú)顯著性；itp組p0.05，有顯著性差異。表2。討論在巨核細(xì)胞和血小板外表存在著大量的糖蛋白(gp)，其中最重要的是gpb/a、gpib/。這些gp分子不僅是血小板發(fā)揮功能所必需的成分，而且可以作

8、為血小板自身抗體的靶抗原。改良aipa法對(duì)免疫性血小板減少的的診斷具有極高的特異性,可達(dá)95%，對(duì)血漿gpb/a和gpib/抗體檢測(cè)的敏感性達(dá)40%2。近年來(lái)的研究說(shuō)明，部分ds患者存在自身抗體和單克隆免疫球蛋白病，表現(xiàn)為多種免疫球蛋白程度升高和多種自身抗體的產(chǎn)生3，4，提示部分ds患者存在體液免疫方面的異常。ds的血小板減少的原因通常認(rèn)為是中樞性的，而burgeis等5對(duì)61例血小板減少的ds患者的血小板壽命進(jìn)展了觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)15%9/61的患者血小板壽命縮短3.5天，對(duì)其中6例病人行脾臟切除術(shù)，術(shù)后患者血小板均增高。這些結(jié)果提示，在某些病例可能同時(shí)有外周血血小板降低是由血小板破壞造成的，

9、那么，外周血小板的破壞是否有免疫因素參與、與血小板gp特異性自身抗體是否有關(guān)，目前國(guó)內(nèi)有關(guān)這方面的研究較少。為了明確血小板gp特異性自身抗體是否與ds患者的血小板減少有關(guān)。我們應(yīng)用先進(jìn)的改良aipa法檢測(cè)了30例ds患者血漿中血小板gp特異性自身抗體抗gpb/a抗體和gpib/抗體的表達(dá)。結(jié)果顯示，部分ds患者血漿中血小板gp特異性抗體為陽(yáng)性，提示部分ds患者的血小板減少與免疫因素有關(guān),是由血小板gp特異性抗體所致的血小板破壞造成的。這種破壞可能通過(guò)血小板gp特異性自身抗體與血小板膜外表糖蛋白結(jié)合完成的，一方面被抗體包被的血小板可通過(guò)巨噬細(xì)胞上的f受體與巨噬細(xì)胞相連，被巨噬細(xì)胞吞噬；另一方面抗

10、原抗體復(fù)合物可激活補(bǔ)體，直接破壞血小板，或通過(guò)3b與巨噬細(xì)胞上的3b受體結(jié)合，使血小板破壞增多。另外，巨核細(xì)胞外表亦表達(dá)gpb/a和gpib6，自身抗體與巨核細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合，可干擾巨核細(xì)胞的增生、成熟和血小板的產(chǎn)生，或在骨髓內(nèi)血小板即被活化的補(bǔ)體或巨噬細(xì)胞破壞，結(jié)果不僅使血小板破壞增加，而且使血小板生成減少7。這為ds的免疫抑制劑治療提供了新的根據(jù)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ds組與itp組抗gp特異性抗體總陽(yáng)性率的比較有顯著性差異，提示改良aipa法檢測(cè)患者血漿中血小板gp特異性抗體的表達(dá)有助于鑒別免疫性血小板減少和非免疫性血小板減少。致謝感謝山東大學(xué)齊魯醫(yī)院侯明教授及朱媛媛教師的支持與幫助！【參考文獻(xiàn)】5burgeise,auliert,rse,etal.rlefsplenetyinthetreatentfyeldysplastisyndresithperipheralthrblytpenia:areprtnsixases.leukeia,2001;15:950-9536vainhenker,deshapsjf,bastinj,etal.tnlnalant