細菌內(nèi)毒素檢查法課件

1、細菌內(nèi)毒素檢查法王思理2000版較95版藥典修改要點新增加三個定義1.細菌內(nèi)毒素檢查用水2.鱟試劑靈敏度3.反應(yīng)終點濃度其他增加內(nèi)容前言：細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品的用途增加了復(fù)核鱟試劑靈敏度。試驗準(zhǔn)備：增加了試驗所和器皿應(yīng)確證無干擾細菌內(nèi)毒素的檢查。 鱟試劑靈敏度復(fù)核:增加了2管陰性對照。供試品干擾試驗:增加了標(biāo)準(zhǔn)對照 檢查法:鱟試劑的支數(shù)由原來4支增加為5支結(jié)果判斷: 細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則1.細菌內(nèi)毒素限值的確定：L=K/M2.干擾實驗3.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)4.鱟試劑5.細菌內(nèi)毒素檢查用水細菌內(nèi)毒素定量測定法（比濁法和顯色基質(zhì)法）1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)2.細菌內(nèi)毒素檢查用水3.鱟試劑：應(yīng)符合定量測定要求。4

2、.實驗準(zhǔn)備：同細菌內(nèi)毒素檢查法。細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的指導(dǎo)意義1.明確指明了制訂指導(dǎo)原則的目的是“為了將細菌內(nèi)毒素檢查法廣泛應(yīng)用于藥品、生物制品的質(zhì)量控制”講的非常明確。 2.首次從官方文件中肯定了細菌內(nèi)毒素定量測定法，這對促進“定量法”在我國應(yīng)用將起重大的促進作用。 細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的指導(dǎo)意義3.指導(dǎo)原則對細菌內(nèi)素限值作出了非常明確的規(guī)定：1、細菌內(nèi)毒素限值的確定 藥品、生物制品的細菌內(nèi)毒素限值(L)一般按以下公式確定：L=K/M4.在這次指導(dǎo)原則中只字未提熱源與細菌內(nèi)毒素兩法改變中的對比試驗，即今后在兩法改換中不必再做對比試驗。這樣必將大大加速我國兩法的改換進程。細菌內(nèi)

3、毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品981的研制概況1.我國細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品從1979年研制成功并正式建立至今共研制分發(fā)了六批。2.現(xiàn)行細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品981的研制與考核時間3.研制分四個階段細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品981的特點1.細菌內(nèi)毒素精品的提取2.細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品的賦形劑3.候選品的生產(chǎn)4.候選品的考核5. 協(xié)作標(biāo)定-新的國際標(biāo)準(zhǔn)品IS2為基 準(zhǔn)細菌內(nèi)毒素檢查法考察報告1. 王思理等一行4人于1998年1月16日-27日首次赴美國進行細菌內(nèi)毒素檢查法的專題考察。2.我們這次考察作了充分準(zhǔn)備,是帶著問題而去的,在出訪前又集中討論了要了解的重點問題. 3.這次考察將對我國細菌內(nèi)毒素檢查法的發(fā)展起到良好的

4、作用. 考察主要收獲一.鱟試劑的生產(chǎn)與管理1.鱟試劑生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的試劑均須按照美國聯(lián)邦法律的有關(guān)規(guī)定進行質(zhì)量控制并送FDA檢驗通過后方可銷售 。2.生產(chǎn)企業(yè)在批批送檢時須呈交所有質(zhì)量控制和原始記錄 。3.在對鱟試劑的靈敏度進行標(biāo)定時需同進使用美國內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品和鱟試劑參考標(biāo)準(zhǔn)品?？疾熘饕斋@三.細菌內(nèi)毒素檢查法用于藥品生產(chǎn)過程及最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制考察主要收獲四.由熱原檢查法改為細菌內(nèi)毒素檢查法1.細菌內(nèi)毒素限值的計算2.由熱原檢查法轉(zhuǎn)換為細菌內(nèi)毒素檢查法的條件是供試品在一定條件下不干擾鱟試驗，每個廠家每個品種做3批供試品的干擾試驗即可，不必進行對比試驗。 考察主要收獲五.細菌內(nèi)毒素檢查法1.

5、鱟試劑靈敏度復(fù)核的目的不是考察靈敏度是否準(zhǔn)確，而且考察操作是否準(zhǔn)確，以及工作標(biāo)準(zhǔn)品是否準(zhǔn)確 。2. 0.1ml規(guī)格的鱟試劑的生產(chǎn)與使用應(yīng)與國際接軌。3.對供試品進行常規(guī)檢查時，陽性對照對4個濃度，至少有兩個濃度，即2和0.25。同時供試品陽性對照不可缺少。每個濃度平等做兩管。4. 用于配制調(diào)節(jié)供試品酸堿度的氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、緩沖溶液等均嚴(yán)格要求細菌內(nèi)毒素檢查用水。 考察主要收獲六.其他1在計算大輸液的內(nèi)毒素限值時，M一般定為10ml/kg/hr。2.FDA的關(guān)于細菌內(nèi)毒素檢查法的Guldeline(指南)不具有法律效應(yīng)，它不是Regulation。3.美國藥典收裁的細菌內(nèi)毒素檢查法的法定

6、方法為凝膠法，其它兩種方法可以采用，但需做比較試驗。4.新藥在生產(chǎn)過程中和最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制均須要求采用細菌內(nèi)毒素檢查法。 幾點建議1.抓緊修訂和完善中國藥典2000年版附錄細菌內(nèi)毒素檢查法。2.制訂細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則，統(tǒng)一規(guī)范檢查中的有關(guān)問題。3.對鱟試劑實行批批檢定或統(tǒng)一發(fā)放細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，建議中檢所研究解決。4.擴大品種的應(yīng)用，建議藥典會制定原則，宜先將中國藥典95年版中要求進行熱原檢查法的品種改為細菌內(nèi)毒素檢查法，新藥應(yīng)積極推廣使用細菌內(nèi)毒素檢查法。關(guān)于如何在我國將熱原檢查法改為細菌內(nèi)毒素檢查法的記得建議建議二.要在我國大量品種實施細菌內(nèi)毒素檢查法的一個重要任務(wù)是必須要

7、作好細菌內(nèi)毒素檢查法系統(tǒng)工程的標(biāo)準(zhǔn)化工作。 細菌內(nèi)毒素檢查法系統(tǒng)工程標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)容1. 細菌內(nèi)毒素檢查法的修訂 2.細菌內(nèi)毒素檢查法擴大應(yīng)用指導(dǎo)原則的制定3.細菌內(nèi)毒素檢查法標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)范(SOP)的制訂4.細菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品的研制5.鱟試劑內(nèi)在質(zhì)量的研究建議三.明確了上述兩個問題，其首要的具體問題就是要科學(xué)地合理地確定細菌內(nèi)毒素的限值。 四. 將熱原檢查法改為細菌內(nèi)毒素檢查法，并且確定了內(nèi)毒素限值后，關(guān)鍵總是就是作好干擾試驗。 五.做好品種的選擇工作建議六.要在我國實施熱原檢查法改為細菌內(nèi)毒素檢查法的規(guī)范化。 1.規(guī)定內(nèi)毒素限值(L)2.由藥廠和鱟試劑廠相結(jié)合，共同做好供試品的干擾試驗，實現(xiàn)

8、兩個方法的轉(zhuǎn)換 。3. 要求各級藥檢所，做好配合和復(fù)核工作。 建議七、由藥典會制定兩法轉(zhuǎn)換申報程序總之為使2000年版藥典能有較多的品種采用細菌內(nèi)毒素檢查法，必須抓緊時間，充分利用這個良好機遇，做好品種匯總申報和審批工作。論藥品生物制品細菌內(nèi)毒素檢查限值的確定我國細菌內(nèi)毒素檢查法建立現(xiàn)狀可以概括的說：慢！主要原因：1.如何將熱原檢查法改為細菌內(nèi)毒素檢查法或者說如何以細菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法？至今還沒有一個明確的規(guī)定。2.如果科學(xué)地合理地確定細菌內(nèi)毒素檢查限值？尚未得到應(yīng)有的重視。一、如何科學(xué)地合理地確定細菌內(nèi)毒素檢查的限值L=K/MK值的確定 M值的確定 二、目前國內(nèi)在細菌內(nèi)毒素限值確定

9、中存在的問題 1.采用熱原檢查劑量就會造成細菌內(nèi)毒素檢查的內(nèi)毒素限值規(guī)定過嚴(yán)。2.細菌內(nèi)毒素限值L確定后，就根據(jù)L值進行稀釋和做干擾試驗。這樣它們的結(jié)果也需重新考慮了。3.目前大量的細菌內(nèi)毒素限值的實際確定、鱟試驗、發(fā)表文章、上報成果等多用“熱原檢查劑量”或“L=K/（fM），f為安全系數(shù)，一般為310”來確定L值。 再論細菌內(nèi)毒素限值的確定目前細菌內(nèi)毒素限值確定存在的問題主要問題是對“M為人用每公斤體重每小時最大劑量”作了如下的解釋： 1.把最大劑量解釋成“熱原檢查法劑量” 。2.把最大劑量解釋成“每小時的人用量的f倍” 。3.把最大劑量解釋成“熱原劑量或人用最大劑量” 。筆者認為科學(xué)地合理地確定細菌內(nèi)毒素限值不僅對我國建立細菌內(nèi)毒素檢查法至關(guān)重要，對保證被檢藥品的安全使用也十分重要。而且它還直接關(guān)系到判斷藥品合格與否，影響藥品能否出廠，同時與國際貿(mào)易和對外技術(shù)交流等都有十分密切的關(guān)系。 筆者認為雖然同一品種