SPE技術(shù)在畜禽產(chǎn)品殘留的分析應(yīng)用課件

報告人：單吉浩SPE技術(shù)在畜禽產(chǎn)品殘留分析中的應(yīng)用12/20/20221報告人：單吉浩SPE技術(shù)在畜禽產(chǎn)品殘留分析中的應(yīng)用1

食品與農(nóng)產(chǎn)品：殘留分析要求

高選擇性—降低或消除基質(zhì)干擾高靈敏度—痕量物質(zhì)可靠的結(jié)果：定量準(zhǔn)確度和化合物確認(rèn)—重現(xiàn)性，穩(wěn)定性和動態(tài)范圍—樣品基質(zhì)中低濃度目標(biāo)物質(zhì)的準(zhǔn)確定量—按照法規(guī)要求進(jìn)行確認(rèn)方法穩(wěn)定性—復(fù)雜樣品基質(zhì)，減少樣品凈化操作12/20/20222

食品與農(nóng)產(chǎn)品：殘留分析要求

高選擇性12/16/202殘留分析:樣品前處理的重要性

是影響實驗成敗的決定性步驟

—占樣品分析時間的比例最大(70-80%)–樣品預(yù)處理所用時間遠(yuǎn)多于色譜分離的時間

—占分析消耗總成本的比重最大

–消耗大量的溶劑及其它化學(xué)品

—對分析結(jié)果的重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性影響最大的環(huán)節(jié)—影響實驗結(jié)果好壞的最重要因素(回收率,%RSD）12/20/20223殘留分析:樣品前處理的重要性是影響實驗成敗的決定性步驟1樣品前處理的通用方法

高速離心取上清液過濾、超濾選擇性沉淀衍生反應(yīng)液-液萃取

固相提取(SolidPhaseExtract,SPE)12/20/20224樣品前處理的通用方法高速離心取上清液12/16/2022為什么要用SPE?

樣品濃縮–提高靈敏度

樣品凈化–提高靈敏度–延長系統(tǒng)不間斷開機(jī)時間–延長色譜柱壽命

比液－液萃取更快,節(jié)省溶劑可自動化批量處理重現(xiàn)性好12/20/20225為什么要用SPE?樣品濃縮12/16/20225不斷革新的SPE技術(shù)

1977–率先推出業(yè)界第一個硅膠基質(zhì)固相提取技術(shù)的商品化產(chǎn)品：Sep-Pak

1996–推出第一個水－浸潤性聚合物基質(zhì)SPE吸附劑(Oasis?HLB)–快速通用性反相SPE方法學(xué)1997–用于Oasis?HLB的先進(jìn)的新型方法學(xué)，可以獲得更干凈的本底(2D優(yōu)化方法學(xué))1999–推出混合機(jī)理吸附劑(Oasis?MCX和MAX)，從而可以對堿性和酸性化合物進(jìn)行高選擇性和高靈敏度的提取–Oasis?96孔提取板設(shè)計獲得R&D100大獎12/20/20226不斷革新的SPE技術(shù)197712/16/20226不斷革新的SPE技術(shù)2002–Waters最新革新SPE技術(shù)首次使得洗脫體積低至25μL無需揮發(fā)與重現(xiàn)配制，洗脫后直接進(jìn)樣即可是小體積樣品的理想提取工具靈敏度可以提高25x

2004–推出用于保留強(qiáng)堿(如季銨鹽)和強(qiáng)酸(如磺酸鹽)的WCX和WAX吸附劑12/20/20227不斷革新的SPE技術(shù)200212/16/20227SPE小柱的種類

根據(jù)吸附劑的劃分

–正相

Silica/Alumina(A,B,N)/Florisil/NH2/CN–反相

C18/tC18/C8/tC2/Porapak/RDX/NH2/CN–離子交換

SCX、MCX、PCX、WCX、MAX12/20/20228SPE小柱的種類根據(jù)吸附劑的劃分12/16/20228傳統(tǒng)(C18)SPE吸附劑的問題對極性化合物—保留不足

–藥物（農(nóng)藥）及代謝產(chǎn)物難以同時提取對堿性化合物回收不足—強(qiáng)硅羥基相互作用

–堿性樣品回收率低小柱跑干—不吸附

–操作過程需仔細(xì)控制回收率低，重現(xiàn)性差是其主問題。12/20/20229傳統(tǒng)(C18)SPE吸附劑的問題對極性化合物—保留不足12/理想的樣品處理方法除去干擾物在很寬的極性范圍內(nèi)，對酸性、堿性及中性化合物均有可重現(xiàn)的高回收率很容易實現(xiàn)自動化，對大量樣品進(jìn)行高通量處理容易使用并且耐受性好快速并且最終的成本低12/20/202210理想的樣品處理方法除去干擾物12/16/202210PEP(Polymerenhancedpolymer)：極性提高了的共聚物

具有反相SPE的最佳性質(zhì)pH：0-14，810m2/g親水性單體：親水”—使填料具有水可浸潤性質(zhì)—允許溶劑跑干而不會損失回收率和重現(xiàn)性“親脂”—提供對分析物的反相保留能力12/20/202211PEP(Polymerenhancedpolymer)C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響

(普魯卡因胺、醋氨酚、雷尼替丁、心得安、多慮平)12/20/202212C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響

(普魯C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響12/20/202213C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響12/1PEP可取代C18的優(yōu)勢–吸附容量更大

是C18的3到10倍，常用規(guī)格1mL/30mg（C18：100mg）–操作更簡便

小柱干涸不影響回收率–方法更通用

適合性質(zhì)各異的各種物質(zhì)的提取12/20/202214PEP可取代C18的優(yōu)勢–吸附容量更大12/16/202PEP可取代C18的優(yōu)勢–開發(fā)方法更容易

聚合物基質(zhì)，無硅醇基影響–對極性物質(zhì)的提取回收率更高

藥物(農(nóng)藥)及代謝產(chǎn)物同時提高12/20/202215PEP可取代C18的優(yōu)勢–開發(fā)方法更容易12/16/202樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法—此通用方法適于多種樣品基質(zhì)的絕大多數(shù)被測物。

—當(dāng)分析堿性化合物時，不要使用高有機(jī)含量的水溶液進(jìn)行清洗，因為PEP吸附劑中不含硅醇基。

—首先使用通用方法提取。若需進(jìn)一步降低干擾，可使用優(yōu)化方法12/20/202216樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法—此通用方法樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法12/20/202217樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法12/16/pH與化合物反相保留12/20/202218pH與化合物反相保留12/16/202218血清中的四環(huán)素12/20/202219血清中的四環(huán)素12/16/202219血清中四環(huán)素的提取結(jié)果比較

SPE化合物%回收率%RSDPEP二甲胺四環(huán)素94.81.4四環(huán)素1040.55C18二甲胺四環(huán)素52.82.82四環(huán)素68.42.446次實驗結(jié)果：加標(biāo)水平：2.5μg/mL

12/20/202220血清中四環(huán)素的提取結(jié)果比較SPE化合物四環(huán)素類殘留分析

（日本政府食品安全公告）2003年８月宣布有關(guān)來自中國的蝦中的四環(huán)素類藥物監(jiān)測（TetracyclineintheshrimpfromChina）–如果為養(yǎng)殖蝦，政府要求必須監(jiān)測四環(huán)素類藥物殘留(mandatory)–如果為非養(yǎng)殖蝦，政府推薦監(jiān)測殘留(voluntary)–需HPLC、熒光檢測器法規(guī)更新：蔬菜和蜂蜜加工的食品必須監(jiān)測殘留–法規(guī)以前不要求檢測農(nóng)藥殘留，但因在加工食品和蜂蜜中發(fā)現(xiàn)了許多農(nóng)藥，故現(xiàn)在要求檢測12/20/202221四環(huán)素類殘留分析

（日本政府食品安全公告）2003年８月宣食用肉中的四環(huán)素

12/20/202222食用肉中的四環(huán)素12/16/202222牛奶中的四環(huán)素

12/20/202223牛奶中的四環(huán)素12/16/202223四環(huán)素—食品分析的結(jié)果

化合物牛肉豬肉牛奶牛奶

0.5μg/g0.5μg/g25μg/L50μg/L4

土霉素96.2(5.7)103(5.0)70.7(3.5)67.7(5.8)四環(huán)素91.4(5.5)99.8(6.1)73.7(7.3)68.5(5.1)金霉素80.6(6.8)83.4(6.1)76.7(2.9)67.3(1.8）結(jié)果以%回收率表示,括號內(nèi)數(shù)字為%RSD

12/20/202224四環(huán)素—食品分析的結(jié)果化合物牛肉反相－離子交換雙重機(jī)理吸附劑

MCX：陽離子交換—反相吸附劑

—用于堿性物質(zhì)提取MAX：陰離子交換—反相吸附劑

—用于酸性物質(zhì)提取WCX：弱陽離子交換—反相吸附劑

—用于強(qiáng)堿性物質(zhì)(如季銨鹽類)提取WAX：弱陰離子交換—反相吸附劑

—用于強(qiáng)酸性物質(zhì)提取

12/20/202225反相－離子交換雙重機(jī)理吸附劑MCX：陽離子交換—反相吸附劑適合于堿性藥物提取的MCX小柱

12/20/202226適合于堿性藥物提取的MCX小柱12/16/202226雙機(jī)理吸附劑：堿性化合物的保留

12/20/202227雙機(jī)理吸附劑：堿性化合物的保留12/16/202227混合機(jī)理:陽離子交換與反相的保留

12/20/202228混合機(jī)理:陽離子交換與反相的保留12/16/202228MCXSPE通用方法

12/20/202229MCXSPE通用方法12/16/202229常見獸藥殘留的SPE推薦方法名稱規(guī)格 克侖特羅MCX/SCX/PCX 沙丁胺醇MCX/SCX/PCX 磺胺C18/PEP/AluminaB 氯霉素C18/PEP/Silica 氟喹諾酮PEP/C18硝基咪唑類藥物PEP/C18 己烯雌酚PEP/C18 四環(huán)素PEP/C18 萊克多巴胺AluminaA/MCX

12/20/202230常見獸藥殘留的SPE推薦方法12/16/202230SPE在殘留分析方面的成功實例

硝基咪唑類藥物：

JAOACInternational,2003,86(3),505-509四環(huán)素:

JchromatographyA,2003,987,227-233動物組織中鹽酸克倫特羅的SPE與GC/MS分析液相色譜通訊，37，13-1412/20/202231SPE在殘留分析方面的成功實例硝基咪唑類藥物：12/16/SPE在殘留分析方面的成功實例萊克多巴胺：Analyticachim,2003,483(1-2)P137-145氯霉素：動物源食品中氯霉素的液相色譜-質(zhì)譜測定,分析測試學(xué)報，2002，21增刊，185-186

磺胺：動物組織中磺胺類藥物殘留量檢測方法---HPLC法12/20/202232SPE在殘留分析方面的成功實例萊克多巴胺：12/16/202磺胺藥物樣品前處理—SPE法HLB雞組織中磺胺類藥物殘留量檢驗方法－高效液相色譜紫外檢測法–廣州出入境檢驗檢疫局食品檢驗處

B(堿性氧化鋁小柱)羊肉組織中七種磺胺殘留的測定–《Waters液相色譜通訊》35期，2002年動物源食品中磺胺類藥物殘留的檢測方法－高效液相色譜法–農(nóng)業(yè)部３８號文C18高效液相色譜法測定肉類奶粉中四種磺胺藥物殘留量的方法研究–《Waters液相色譜通訊》15期，1990年動物源食品中磺胺二甲嘧啶殘留檢測方法－高效液相色譜法–農(nóng)業(yè)部３８號文；12/20/202233磺胺藥物樣品前處理—SPE法HLB12/16/202233典型成功開發(fā)：

動物組織中磺胺藥物的殘留檢測方法—HPLC法—NY5029-2001農(nóng)業(yè)部“無公害畜產(chǎn)品例行監(jiān)測”專用方法艾杰爾科技——磺胺專用柱12/20/202234典型成功開發(fā)：

動物組織中磺胺藥物的殘留檢測方法—HPLC法動物源食品中磺胺類藥物殘留檢測方法

－高效液相色譜法

簡介

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心12/20/202235動物源食品中磺胺類藥物殘留檢測方法

－高效液相色譜法簡介1主要內(nèi)容一、適用范圍二、原理三、試劑和材料四、儀器設(shè)備五、檢驗步驟

12/20/202236主要內(nèi)容一、適用范圍12/16/2022361、適用范圍

本方法用于測定動物可食性組織中磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹噁啉（SQ）單個或混合物的殘留量。12/20/2022371、適用范圍本方法用于測定動物可食性組織中磺胺間甲氧嘧2．原理

組織經(jīng)乙腈提取后，其上清液加入正己烷進(jìn)行液液分配，取下層溶液加入正丙醇減壓干燥，殘留物用乙腈溶解，過Sep-Pak堿性氧化鋁柱,洗脫，干燥后定容，用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。

12/20/2022382．原理

組織經(jīng)乙腈提取后，其上清液加入正己烷進(jìn)行液液分3、試劑和材料

除特別注明外，所用試劑均為分析純；水為超純水。3.1磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品（SMM、SDM、SM2、SMZ和SQ），（Sigma公司，含量不少于98.9%）3.2甲醇色譜純3.3乙腈色譜純3.4正已烷3.5正丙醇3.6無水硫酸鈉12/20/2022393、試劑和材料除特別注明外，所用試劑均為分析純；水為超純水3、試劑和材料3.7堿性氧化鋁SPE柱（6毫升，500毫克）3.8磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL）分別精密稱取上述磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品各50mg，甲醇溶解并轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶，定容，搖勻。置-20℃以下冰箱中保存,有效期3個月。3.9磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液取磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲備液用流動相稀釋成濃度為0.05,0.1,0.2,0.5,1.0，2.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。置2℃-8℃冰箱中保存，有效期1周。12/20/2022403、試劑和材料3.7堿性氧化鋁SPE柱（6毫升，500毫4、儀器設(shè)備

4.1高效液相色譜儀（配紫外檢測器）4.2離心機(jī)4.13固相萃取裝置（配考克閥）4.4分析天平精度0.0001g4.5天平精度0.01g4.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀4.7振蕩器4.8勻漿機(jī)4.9渦動混合器4.10分液漏斗50mL4.11梨形瓶100mL4.12離心管50mL4.13微孔濾膜0.45μm12/20/2022414、儀器設(shè)備4.1高效液相色譜儀（配紫外檢測器）12/15檢驗步驟

5.1試料的制備5.1.1取絞碎后的供試樣品,作為供試試料。5.1.2取絞碎后的空白樣品,作為空白試料（陰性對照）。5.1.3取絞碎后的空白樣品5g,添加5μg/mL的工作液0.1mL，作為空白添加試料（陽性對照）。12/20/2022425檢驗步驟5.1試料的制備12/16/2022425檢驗步驟5.2提取和純化5.2.1組織樣品5.00g——5g無水硫酸鈉+25mL乙腈——均質(zhì)——振蕩10min——以3000r/min的速度離心5min——重復(fù)兩次——并兩次的上清液——加入正己烷30mL——振蕩10min——離心5min——取下層液體于100mL梨形瓶中。12/20/2022435檢驗步驟5.2提取和純化12/16/2022435檢驗步驟5.2.1（續(xù)）加正丙醇5mL，50℃下減壓干燥至干，殘留物用95%乙腈3ml溶解，過氧化鋁B柱。用5mL乙腈-水（95+5）過柱，不收集，再用10mL乙腈-水（70+30）洗脫。洗脫液中加入5mL正丙醇，50℃下減壓干燥至干，殘留物用2.0mL流動相溶解，溶液用濾膜過濾，作為試樣溶液，供高效液相色譜分析。12/20/2022445檢驗步驟5.2.1（續(xù)）12/16/2022445檢驗步驟5.3色譜條件5.3.1色譜柱：C18柱，250×4.6mm（i.d.），粒徑5μm，或相當(dāng)者；5.3.2流動相：乙腈-甲醇-水-乙酸(2+2+9+0.2)；5.3.3流速：1mL／min；5.3.4檢測波長：270nm；5.3.5進(jìn)樣量：20μL。12/20/2022455檢驗步驟5.3色譜條件12/16/2022455檢驗步驟5.5測定法5.5.1取試樣溶液和0.05μg/mL的對照溶液，作單點校準(zhǔn)，以峰面積計算。對照溶液及試樣溶液中磺胺類藥物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)，試樣溶液測定過程中應(yīng)參插注入對照溶液，以便準(zhǔn)確定量。5.5.2試劑空白試驗除不加試料外，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行平行操作。5.5.3結(jié)果計算和表述按下式計算供試組織中磺胺類藥物的殘留量：

Xi=(CSVA)/(ASm)12/20/2022465檢驗步驟5.5測定法12/16/2022465檢驗步驟5.6結(jié)果判定5.6.1線性范圍在0.02μg/mL～1.0μg/mL范圍考察線性，計算回歸方程，其相關(guān)系數(shù)≥0.995。5.6.2準(zhǔn)確度本方法在100μg/kg添加濃度水平上的回收率范圍為50%～110%。5.6.3允許相對偏差允許相對偏差≤26%。12/20/2022475檢驗步驟5.6結(jié)果判定12/16/202247SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用

樣品前處理：SPE法–參見：中華人民共和國農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：飼料中鹽酸克侖特羅的測定參見：中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)：動物組織中鹽酸克侖特羅的測定12/20/202248SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用

12/16SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T468—2005

動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法NY/XQ421-2003“動物尿液中鹽酸克倫特羅（瘦肉精）殘留的檢測氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法”

——起草單位：農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心12/20/202249SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用中華人民共和動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法

——原理對樣品在堿化的條件下用乙酸乙酯提取，合并提取液后，利用鹽酸克倫特羅易溶于酸性溶液的特點，用稀鹽酸反萃取，萃取的樣液pH調(diào)至5.2后用SCX固相萃取小柱凈化，分離的藥物殘留經(jīng)過雙三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后用帶有質(zhì)量選擇檢測器的氣相色譜儀測定。12/20/202250動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法——原理1動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法提取

(5±0.05)g動物肝組織——加入15mL乙酸乙酯——加入3mL10.0%碳酸鈉溶液——均質(zhì)——離心2min——上層有機(jī)溶劑——在殘渣中再次提取后——并合——加入5mL0.10mol/L的鹽酸——離心2min——重復(fù)萃取——合并下層溶液——2.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.2。

12/20/202251動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法提取12/1動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化

SCX小柱——5mL甲醇——5mL水——5mL30mmol/L鹽酸活化——萃取液上樣——5mL水——5mL甲醇——淋洗柱子——抽干SCX小柱——5mL4%氨化甲醇溶液——洗脫。衍生化在50℃水浴——氮氣吹干——100L甲苯——100LBSTFA——80℃衍生lh——冷卻——加入0.3mL甲苯——氣相色譜-質(zhì)譜分析。12/20/202252動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化12/16動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法GC/MS測定參數(shù)設(shè)定色譜柱：HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm（內(nèi)徑），0.25m（膜厚）；進(jìn)樣口：220℃；進(jìn)樣方式：不分流；進(jìn)樣體積：1L；柱溫：70℃（保持0.6min）,以25℃/min升溫至200℃（保持6min），以25℃/min升溫至280℃（保持5min）；載氣：氦氣，流速：0.9mL/min（恒流）；GC/MS傳輸線溫度：280℃；溶劑延遲：8min；EM電壓：高于調(diào)諧電壓200V；離子源(EI)溫度：200℃；四極桿溫度：160℃；選擇離子監(jiān)測:(m/z)86，212，262，27712/20/202253動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法GC/MS測定動物尿液中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化

依次用甲醇5mL、水5mL和30mmol/L鹽酸5mL潤洗固相萃取小柱，將上述備用液過柱，依次用水5mL、甲醇5mL淋洗，真空抽干，用4%氨化甲醇5mL洗脫SCX小柱，收集洗脫液于具塞玻璃試管中，50℃下氮氣吹干。在樣液過柱和洗脫過程中流速控制在1mL/min左右。12/20/202254動物尿液中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化12/16殘留分析SPE前處理應(yīng)用

小結(jié)

——以常規(guī)方法為起點——如需要，根據(jù)樣品性質(zhì)與基質(zhì)進(jìn)行方法優(yōu)化——對于堿性或酸性組分采用雙機(jī)理吸附劑

12/20/202255殘留分析SPE前處理應(yīng)用

小結(jié)——以常規(guī)方法為起點12/SPE小柱的典型應(yīng)用實例

磺胺：Sep-PakAl2O3(B),12cc/2g,WAT054260–動物源食品中磺胺類藥物殘留物檢測方法——HPLC金霉素：Sep-PakC18或者tC18–金霉素殘留的HPLC測定伊維菌素：Sep-PakC18或者tC18–伊維菌素殘留的HPLC測定法12/20/202256SPE小柱的典型應(yīng)用實例

磺胺：Sep-PakAl2O3SPE小柱的典型應(yīng)用實例

恩諾沙星，環(huán)丙沙星：Sep-PaktC18(含碳量≥16%)–動物性食品中恩諾沙星和環(huán)丙沙星殘留物檢測方法——HPLC噁喹酸，氟甲喹：Sep-PaktC18(含碳量≥16%)–動物性食品中噁喹酸和氟甲喹殘留物檢測方法——HPLC12/20/202257SPE小柱的典型應(yīng)用實例

恩諾沙星，環(huán)丙沙星：Sep-Pa國家科技攻關(guān)計劃課題畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全關(guān)鍵控制技術(shù)系列標(biāo)準(zhǔn)研究

(課題編號：2002BA906A75)

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心

12/20/202258國家科技攻關(guān)計劃課題12/16/202258國家科技攻關(guān)計劃子課題三種獸藥使用規(guī)范驗證和四種獸藥殘留檢測方法研究

(子課題編號：2002BA906A37-01)

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心2005年11月10日

12/20/202259國家科技攻關(guān)計劃子課題12/16/20225920種獸藥殘留檢測方法的技術(shù)要點22.1豬組織中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚殘留檢測方法研究（氣相色譜-質(zhì)譜法）

在堿化的條件下用乙酸乙酯提取豬組織樣品中己烯雌酚、已二烯雌酚和已烷雌酚殘留，然后通過碳酸鈉溶液和硅膠柱對洗脫物質(zhì)進(jìn)行凈化處理。凈化后的樣品平均分兩份進(jìn)行吹干后衍生，BSTFA衍生后進(jìn)行氣相色譜－質(zhì)譜分析。檢測限:0.25g/kg-0.5g/kg；回收率:60.9%～85.6%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%12/20/20226020種獸藥殘留檢測方法的技術(shù)要點12/16/20226022.1豬組織中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚殘留檢測方法研究（氣相色譜-質(zhì)譜法）

已二烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)衍生化后選擇離子模式下的總離子流圖豬肝添加樣品總離子流圖(已二烯雌酚添加濃度為4μg/kg)12/20/20226122.1豬組織中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚殘留檢測方法2.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）

試樣勻漿后,加入氘代雌二醇內(nèi)標(biāo),經(jīng)正己烷脫脂,經(jīng)HLB柱、硅膠柱、氨基柱凈化后，于液質(zhì)聯(lián)用儀上進(jìn)行測定。同位素內(nèi)標(biāo)定量。檢測限:1g/kg；回收率:97.1%～106.1%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%12/20/2022622.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）12.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）豬肝添加雌二醇色譜圖(從上至下添加濃度依次為0μg/kg,5μg/kg,2μg/kg,1μg/kg)

12/20/2022632.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）豬2.3豬尿液中丙酸睪酮殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）豬尿樣品經(jīng)固相萃取小柱凈化后，供液相色譜-質(zhì)譜儀測定。丙酸睪酮檢測限:1.0g/kg丙酸睪酮回收率:62.2%～73.5%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%丙酸睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖

空白豬尿中添加50μg/L的丙酸睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液后的SIR色譜圖

12/20/2022642.3豬尿液中丙酸睪酮殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）丙酸2.5豬組織及豬尿中克倫特羅、沙丁胺醇?xì)埩魴z測方法（氣相色譜-質(zhì)譜法）

試樣用高氯酸溶液勻漿、超聲加熱提取，用異丙醇+乙酸乙酯(40+60)萃取，有機(jī)相濃縮，經(jīng)弱陽離子交換柱進(jìn)行分離，用乙醇+濃氨水(98+2)溶液洗脫，洗脫液濃縮，經(jīng)N,O雙三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后于氣質(zhì)聯(lián)用儀上進(jìn)行測定。外標(biāo)法定量。檢測限:1g/kg；回收率:60.37%～93.86%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%12/20/2022652.5豬組織及豬尿中克倫特羅、沙丁胺醇?xì)埩魴z測方法（氣相色譜2.5豬組織及豬尿中克倫特羅、沙丁胺醇?xì)埩魴z測方法（氣相色譜-質(zhì)譜法）

豬肝加標(biāo)樣色譜圖(2g/kg)12/20/2022662.5豬組織及豬尿中克倫特羅、沙丁胺醇?xì)埩魴z測方法（氣相色2.6豬組織及豬尿中萊克多巴胺殘留檢測方法（氣相色譜-質(zhì)譜法）

樣品經(jīng)過高氯酸水解提取，用乙酸乙酯和異丙醇（4：6）再次提取后過SCX陽離子小柱凈化，用合適的溶劑選擇洗脫后,氮氣吹干，供高效液相色譜定量（質(zhì)譜檢測器）測定。外標(biāo)法定量。檢測限:1g/kg；回收率:66.47%～86.21%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%

12/20/2022672.6豬組織及豬尿中萊克多巴胺殘留檢測方法（氣相色譜-質(zhì)2.6豬組織及豬尿中萊克多巴胺殘留檢測方法（氣相色譜-質(zhì)譜法）300g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖

肉添加10g/kg質(zhì)譜圖12/20/2022682.6豬組織及豬尿中萊克多巴胺殘留檢測方法（氣相色譜-質(zhì)2.7豬組織中氯霉素殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）

樣品經(jīng)過乙腈-水（1+1）溶液、乙酸乙酯重復(fù)提取，用正己烷除去樣品中的脂肪等雜質(zhì)，C18固相萃取柱進(jìn)一步凈化，N2氣吹干后供高效液相色譜定量（質(zhì)譜檢測器）測定。外標(biāo)法定量。檢測限:0.1g/kg；回收率:67.4%～87.0%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%1g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液圖肉添加1g/kg圖12/20/2022692.7豬組織中氯霉素殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）12.7豬組織中氯霉素殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）

12/20/2022702.7豬組織中氯霉素殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）

122.8豬組織中粘桿菌素殘留檢測方法（液相色譜法）待測動物組織中殘留的粘桿菌素經(jīng)三氯乙酸-甲醇溶液提取，C18固相萃取柱凈化后，與熒光衍生化試劑反應(yīng)，用高效液相色譜（熒光檢測器）進(jìn)行檢測，外標(biāo)法定量。檢測限:75g/kg；定量限:150g/kg,回收率:80.1%～108.5%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%a：空白樣品圖b：添加0.05μg/g粘桿菌素樣品圖12/20/2022712.8豬組織中粘桿菌素殘留檢測方法（液相色譜法）2.9豬組織中磺胺類藥物殘留檢測方法（液相色譜法）

組織樣品經(jīng)乙腈提取后，在上清液中加入正己烷進(jìn)行液液分配，取下層溶液加入正丙醇減壓干燥，殘留物用乙酸乙酯溶解，過氨基鍵合小柱,以乙酸乙醇溶液洗脫，氮氣吹干后用流動相溶解，定容后用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。檢測限:3～5g/kg；回收率:65.1%～92.1%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%12/20/2022722.9豬組織中磺胺類藥物殘留檢測方法（液相色譜法）12/12.9豬組織中磺胺類藥物殘留檢測方法（液相色譜法）磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖豬肝添加磺胺類藥物色譜圖12/20/2022732.9豬組織中磺胺類藥物殘留檢測方法（液相色譜法）磺胺類藥2.10豬組織中乙酰甲喹殘留檢測方法（液相色譜法）動物組織勻漿用雙蒸水、三氯乙酸提取，經(jīng)C18固相小柱凈化，80%甲醇洗脫，收集洗脫液，作為試樣溶液供高效液相色譜（配紫外檢測器）分析，外標(biāo)法定量檢測限:50g/kg回收率:60.1%～83.1%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%空白豬肉組織試樣色譜圖

豬肉試樣中添加乙酰甲喹色譜圖12/20/2022742.10豬組織中乙酰甲喹殘留檢測方法（液相色譜法）空白豬肉2.11動物組織（豬、雞）中硝基咪唑類藥物多殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）待測動物組織中殘留的硝基咪唑類藥物用乙酸乙酯提取，液/液萃取分離,固相萃取柱凈化后，通過高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用的大氣壓化學(xué)電離正離子檢測（APCI+）方式,進(jìn)行選擇離子(SIR)檢測，外標(biāo)法定量，實現(xiàn)了三種硝基咪唑類化合物的多殘留確證。。檢測限:0.5-1.0g/kg；回收率:55.31%～88.66%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%豬肝加標(biāo)樣選擇離子檢測色譜圖.(a)洛硝噠唑(M/Z=201,2.0μg/kg);(b)甲硝唑（M/Z=172,1.0μg/kg）;(c)地美硝唑（M/Z=142,1.0μg/kg）

12/20/2022752.11動物組織（豬、雞）中硝基咪唑類藥物多殘留檢測方法（2.12動物（羊、豬）組織中伊維菌素類藥物多殘留檢測方法（液相色譜法）

待測動物組織中殘留的伊維菌素類藥物經(jīng)乙腈提取，堿性氧化鋁固相萃取柱凈化后，與熒光衍生化試劑反應(yīng)，用高效液相色譜（熒光檢測器）,進(jìn)行檢測，外標(biāo)法定量，實現(xiàn)了三種阿維菌素類藥物的多殘留分析。檢測限:1.0g/kg；回收率:63.5%～90.3%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%雞肉空白樣品色譜圖

雞肉加標(biāo)樣色譜圖(依次為阿維菌素、多拉菌素和依維菌素50μg/kg)

12/20/2022762.12動物（羊、豬）組織中伊維菌素類藥物多殘留檢測方法（2.13動物組織中氟苯尼考?xì)埩魴z測方法（液相色譜法）動物組織勻漿用乙腈提取，經(jīng)C18固相小柱凈化，60%甲醇洗脫，N2吹干，殘渣用流動相溶解，過膜，作為試樣溶液供高效液相色譜（配紫外檢測器）分析，外標(biāo)法定量。檢測限:10g/kg；定量限為20g/kg回收率:60.5%～103.0%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%空白豬肉組織試樣色譜圖

豬肉試樣中添加氟苯尼考色譜圖

12/20/2022772.13動物組織中氟苯尼考?xì)埩魴z測方法（液相色譜法）空白豬2.15雞組織中甲基鹽霉素殘留檢測方法（液相色譜法）

組織樣品經(jīng)異辛烷提取后，上清液用硅膠柱凈化分離，用甲醇洗脫，洗脫液濃縮后用甲醇/水溶解。以甲醇/冰乙酸/水作為流動相、香草醛為衍生劑，用高效液相色譜柱后衍生化法測定。檢測限:7g/kg；回收率:76.4%～93.1%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%雞腎空白色譜圖雞腎添加甲基鹽霉素色譜圖12/20/2022782.15雞組織中甲基鹽霉素殘留檢測方法（液相色譜法）雞腎空2.16雞組織中地克珠利、尼卡巴嗪多殘留檢測方法（液相色譜法）雞組織勻漿用乙腈（脂肪用90%乙腈）提取，經(jīng)堿性氧化鋁固相小柱凈化，回收液減壓蒸干，殘渣用流動相溶解，高速離心，作為試樣溶液供高效液相色譜（配紫外檢測器）分析，外標(biāo)法定量。地克珠利檢測限:250g/kg,定量限:500g/kg；尼卡巴嗪檢測限:100g/kg,定量限:200g/kg;回收率:70.0%～97.6%；批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%空白雞肉組織試樣色譜圖

雞肌肉試樣中添加地克珠利(250μg/kg）、尼克巴嗪（100μg/kg）色譜圖

12/20/2022792.16雞組織中地克珠利、尼卡巴嗪多殘留檢測方法（液相色譜休藥0h鹽霉素殘留檢測值遠(yuǎn)低于“農(nóng)業(yè)部第235號公告”所規(guī)定雞組織肌肉、脂肪、肝臟中鹽霉素最高殘留限量；休藥48h后，肉雞組織中鹽霉素檢測不出。驗證試驗結(jié)果表明，符合“農(nóng)業(yè)部第278號”公告對該類藥物休藥期的規(guī)定。12/20/202280休藥0h鹽霉素殘留檢測值遠(yuǎn)低于“農(nóng)業(yè)部第235號公

各試驗組肉雞不同組織中的環(huán)丙沙星消除速度較快，殘留迅速降到國家規(guī)定的最高殘留限量以下，符合“農(nóng)業(yè)部第278號公告”對該藥物在肉雞中的休藥期規(guī)定。12/20/202281各試驗組肉雞不同組織中的環(huán)丙沙星消除速度較快，殘留迅

12/20/20228212/16/20228212/20/20228312/16/202283

Thankyou12/20/202284Thankyou12/16/202284

報告人：單吉浩SPE技術(shù)在畜禽產(chǎn)品殘留分析中的應(yīng)用12/20/202285報告人：單吉浩SPE技術(shù)在畜禽產(chǎn)品殘留分析中的應(yīng)用1

食品與農(nóng)產(chǎn)品：殘留分析要求

高選擇性—降低或消除基質(zhì)干擾高靈敏度—痕量物質(zhì)可靠的結(jié)果：定量準(zhǔn)確度和化合物確認(rèn)—重現(xiàn)性，穩(wěn)定性和動態(tài)范圍—樣品基質(zhì)中低濃度目標(biāo)物質(zhì)的準(zhǔn)確定量—按照法規(guī)要求進(jìn)行確認(rèn)方法穩(wěn)定性—復(fù)雜樣品基質(zhì)，減少樣品凈化操作12/20/202286

食品與農(nóng)產(chǎn)品：殘留分析要求

高選擇性12/16/202殘留分析:樣品前處理的重要性

是影響實驗成敗的決定性步驟

—占樣品分析時間的比例最大(70-80%)–樣品預(yù)處理所用時間遠(yuǎn)多于色譜分離的時間

—占分析消耗總成本的比重最大

–消耗大量的溶劑及其它化學(xué)品

—對分析結(jié)果的重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性影響最大的環(huán)節(jié)—影響實驗結(jié)果好壞的最重要因素(回收率,%RSD）12/20/202287殘留分析:樣品前處理的重要性是影響實驗成敗的決定性步驟1樣品前處理的通用方法

高速離心取上清液過濾、超濾選擇性沉淀衍生反應(yīng)液-液萃取

固相提取(SolidPhaseExtract,SPE)12/20/202288樣品前處理的通用方法高速離心取上清液12/16/2022為什么要用SPE?

樣品濃縮–提高靈敏度

樣品凈化–提高靈敏度–延長系統(tǒng)不間斷開機(jī)時間–延長色譜柱壽命

比液－液萃取更快,節(jié)省溶劑可自動化批量處理重現(xiàn)性好12/20/202289為什么要用SPE?樣品濃縮12/16/20225不斷革新的SPE技術(shù)

1977–率先推出業(yè)界第一個硅膠基質(zhì)固相提取技術(shù)的商品化產(chǎn)品：Sep-Pak

1996–推出第一個水－浸潤性聚合物基質(zhì)SPE吸附劑(Oasis?HLB)–快速通用性反相SPE方法學(xué)1997–用于Oasis?HLB的先進(jìn)的新型方法學(xué)，可以獲得更干凈的本底(2D優(yōu)化方法學(xué))1999–推出混合機(jī)理吸附劑(Oasis?MCX和MAX)，從而可以對堿性和酸性化合物進(jìn)行高選擇性和高靈敏度的提取–Oasis?96孔提取板設(shè)計獲得R&D100大獎12/20/202290不斷革新的SPE技術(shù)197712/16/20226不斷革新的SPE技術(shù)2002–Waters最新革新SPE技術(shù)首次使得洗脫體積低至25μL無需揮發(fā)與重現(xiàn)配制，洗脫后直接進(jìn)樣即可是小體積樣品的理想提取工具靈敏度可以提高25x

2004–推出用于保留強(qiáng)堿(如季銨鹽)和強(qiáng)酸(如磺酸鹽)的WCX和WAX吸附劑12/20/202291不斷革新的SPE技術(shù)200212/16/20227SPE小柱的種類

根據(jù)吸附劑的劃分

–正相

Silica/Alumina(A,B,N)/Florisil/NH2/CN–反相

C18/tC18/C8/tC2/Porapak/RDX/NH2/CN–離子交換

SCX、MCX、PCX、WCX、MAX12/20/202292SPE小柱的種類根據(jù)吸附劑的劃分12/16/20228傳統(tǒng)(C18)SPE吸附劑的問題對極性化合物—保留不足

–藥物（農(nóng)藥）及代謝產(chǎn)物難以同時提取對堿性化合物回收不足—強(qiáng)硅羥基相互作用

–堿性樣品回收率低小柱跑干—不吸附

–操作過程需仔細(xì)控制回收率低，重現(xiàn)性差是其主問題。12/20/202293傳統(tǒng)(C18)SPE吸附劑的問題對極性化合物—保留不足12/理想的樣品處理方法除去干擾物在很寬的極性范圍內(nèi)，對酸性、堿性及中性化合物均有可重現(xiàn)的高回收率很容易實現(xiàn)自動化，對大量樣品進(jìn)行高通量處理容易使用并且耐受性好快速并且最終的成本低12/20/202294理想的樣品處理方法除去干擾物12/16/202210PEP(Polymerenhancedpolymer)：極性提高了的共聚物

具有反相SPE的最佳性質(zhì)pH：0-14，810m2/g親水性單體：親水”—使填料具有水可浸潤性質(zhì)—允許溶劑跑干而不會損失回收率和重現(xiàn)性“親脂”—提供對分析物的反相保留能力12/20/202295PEP(Polymerenhancedpolymer)C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響

(普魯卡因胺、醋氨酚、雷尼替丁、心得安、多慮平)12/20/202296C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響

(普魯C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響12/20/202297C18與PEP小柱相比：

—溶劑跑干對回收率的影響12/1PEP可取代C18的優(yōu)勢–吸附容量更大

是C18的3到10倍，常用規(guī)格1mL/30mg（C18：100mg）–操作更簡便

小柱干涸不影響回收率–方法更通用

適合性質(zhì)各異的各種物質(zhì)的提取12/20/202298PEP可取代C18的優(yōu)勢–吸附容量更大12/16/202PEP可取代C18的優(yōu)勢–開發(fā)方法更容易

聚合物基質(zhì)，無硅醇基影響–對極性物質(zhì)的提取回收率更高

藥物(農(nóng)藥)及代謝產(chǎn)物同時提高12/20/202299PEP可取代C18的優(yōu)勢–開發(fā)方法更容易12/16/202樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法—此通用方法適于多種樣品基質(zhì)的絕大多數(shù)被測物。

—當(dāng)分析堿性化合物時，不要使用高有機(jī)含量的水溶液進(jìn)行清洗，因為PEP吸附劑中不含硅醇基。

—首先使用通用方法提取。若需進(jìn)一步降低干擾，可使用優(yōu)化方法12/20/2022100樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法—此通用方法樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法12/20/2022101樣品前處理：

適于HPLC分析的通用SPE方法12/16/pH與化合物反相保留12/20/2022102pH與化合物反相保留12/16/202218血清中的四環(huán)素12/20/2022103血清中的四環(huán)素12/16/202219血清中四環(huán)素的提取結(jié)果比較

SPE化合物%回收率%RSDPEP二甲胺四環(huán)素94.81.4四環(huán)素1040.55C18二甲胺四環(huán)素52.82.82四環(huán)素68.42.446次實驗結(jié)果：加標(biāo)水平：2.5μg/mL

12/20/2022104血清中四環(huán)素的提取結(jié)果比較SPE化合物四環(huán)素類殘留分析

（日本政府食品安全公告）2003年８月宣布有關(guān)來自中國的蝦中的四環(huán)素類藥物監(jiān)測（TetracyclineintheshrimpfromChina）–如果為養(yǎng)殖蝦，政府要求必須監(jiān)測四環(huán)素類藥物殘留(mandatory)–如果為非養(yǎng)殖蝦，政府推薦監(jiān)測殘留(voluntary)–需HPLC、熒光檢測器法規(guī)更新：蔬菜和蜂蜜加工的食品必須監(jiān)測殘留–法規(guī)以前不要求檢測農(nóng)藥殘留，但因在加工食品和蜂蜜中發(fā)現(xiàn)了許多農(nóng)藥，故現(xiàn)在要求檢測12/20/2022105四環(huán)素類殘留分析

（日本政府食品安全公告）2003年８月宣食用肉中的四環(huán)素

12/20/2022106食用肉中的四環(huán)素12/16/202222牛奶中的四環(huán)素

12/20/2022107牛奶中的四環(huán)素12/16/202223四環(huán)素—食品分析的結(jié)果

化合物牛肉豬肉牛奶牛奶

0.5μg/g0.5μg/g25μg/L50μg/L4

土霉素96.2(5.7)103(5.0)70.7(3.5)67.7(5.8)四環(huán)素91.4(5.5)99.8(6.1)73.7(7.3)68.5(5.1)金霉素80.6(6.8)83.4(6.1)76.7(2.9)67.3(1.8）結(jié)果以%回收率表示,括號內(nèi)數(shù)字為%RSD

12/20/2022108四環(huán)素—食品分析的結(jié)果化合物牛肉反相－離子交換雙重機(jī)理吸附劑

MCX：陽離子交換—反相吸附劑

—用于堿性物質(zhì)提取MAX：陰離子交換—反相吸附劑

—用于酸性物質(zhì)提取WCX：弱陽離子交換—反相吸附劑

—用于強(qiáng)堿性物質(zhì)(如季銨鹽類)提取WAX：弱陰離子交換—反相吸附劑

—用于強(qiáng)酸性物質(zhì)提取

12/20/2022109反相－離子交換雙重機(jī)理吸附劑MCX：陽離子交換—反相吸附劑適合于堿性藥物提取的MCX小柱

12/20/2022110適合于堿性藥物提取的MCX小柱12/16/202226雙機(jī)理吸附劑：堿性化合物的保留

12/20/2022111雙機(jī)理吸附劑：堿性化合物的保留12/16/202227混合機(jī)理:陽離子交換與反相的保留

12/20/2022112混合機(jī)理:陽離子交換與反相的保留12/16/202228MCXSPE通用方法

12/20/2022113MCXSPE通用方法12/16/202229常見獸藥殘留的SPE推薦方法名稱規(guī)格 克侖特羅MCX/SCX/PCX 沙丁胺醇MCX/SCX/PCX 磺胺C18/PEP/AluminaB 氯霉素C18/PEP/Silica 氟喹諾酮PEP/C18硝基咪唑類藥物PEP/C18 己烯雌酚PEP/C18 四環(huán)素PEP/C18 萊克多巴胺AluminaA/MCX

12/20/2022114常見獸藥殘留的SPE推薦方法12/16/202230SPE在殘留分析方面的成功實例

硝基咪唑類藥物：

JAOACInternational,2003,86(3),505-509四環(huán)素:

JchromatographyA,2003,987,227-233動物組織中鹽酸克倫特羅的SPE與GC/MS分析液相色譜通訊，37，13-1412/20/2022115SPE在殘留分析方面的成功實例硝基咪唑類藥物：12/16/SPE在殘留分析方面的成功實例萊克多巴胺：Analyticachim,2003,483(1-2)P137-145氯霉素：動物源食品中氯霉素的液相色譜-質(zhì)譜測定,分析測試學(xué)報，2002，21增刊，185-186

磺胺：動物組織中磺胺類藥物殘留量檢測方法---HPLC法12/20/2022116SPE在殘留分析方面的成功實例萊克多巴胺：12/16/202磺胺藥物樣品前處理—SPE法HLB雞組織中磺胺類藥物殘留量檢驗方法－高效液相色譜紫外檢測法–廣州出入境檢驗檢疫局食品檢驗處

B(堿性氧化鋁小柱)羊肉組織中七種磺胺殘留的測定–《Waters液相色譜通訊》35期，2002年動物源食品中磺胺類藥物殘留的檢測方法－高效液相色譜法–農(nóng)業(yè)部３８號文C18高效液相色譜法測定肉類奶粉中四種磺胺藥物殘留量的方法研究–《Waters液相色譜通訊》15期，1990年動物源食品中磺胺二甲嘧啶殘留檢測方法－高效液相色譜法–農(nóng)業(yè)部３８號文；12/20/2022117磺胺藥物樣品前處理—SPE法HLB12/16/202233典型成功開發(fā)：

動物組織中磺胺藥物的殘留檢測方法—HPLC法—NY5029-2001農(nóng)業(yè)部“無公害畜產(chǎn)品例行監(jiān)測”專用方法艾杰爾科技——磺胺專用柱12/20/2022118典型成功開發(fā)：

動物組織中磺胺藥物的殘留檢測方法—HPLC法動物源食品中磺胺類藥物殘留檢測方法

－高效液相色譜法

簡介

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心12/20/2022119動物源食品中磺胺類藥物殘留檢測方法

－高效液相色譜法簡介1主要內(nèi)容一、適用范圍二、原理三、試劑和材料四、儀器設(shè)備五、檢驗步驟

12/20/2022120主要內(nèi)容一、適用范圍12/16/2022361、適用范圍

本方法用于測定動物可食性組織中磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹噁啉（SQ）單個或混合物的殘留量。12/20/20221211、適用范圍本方法用于測定動物可食性組織中磺胺間甲氧嘧2．原理

組織經(jīng)乙腈提取后，其上清液加入正己烷進(jìn)行液液分配，取下層溶液加入正丙醇減壓干燥，殘留物用乙腈溶解，過Sep-Pak堿性氧化鋁柱,洗脫，干燥后定容，用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。

12/20/20221222．原理

組織經(jīng)乙腈提取后，其上清液加入正己烷進(jìn)行液液分3、試劑和材料

除特別注明外，所用試劑均為分析純；水為超純水。3.1磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品（SMM、SDM、SM2、SMZ和SQ），（Sigma公司，含量不少于98.9%）3.2甲醇色譜純3.3乙腈色譜純3.4正已烷3.5正丙醇3.6無水硫酸鈉12/20/20221233、試劑和材料除特別注明外，所用試劑均為分析純；水為超純水3、試劑和材料3.7堿性氧化鋁SPE柱（6毫升，500毫克）3.8磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL）分別精密稱取上述磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)品各50mg，甲醇溶解并轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶，定容，搖勻。置-20℃以下冰箱中保存,有效期3個月。3.9磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)工作液取磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲備液用流動相稀釋成濃度為0.05,0.1,0.2,0.5,1.0，2.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。置2℃-8℃冰箱中保存，有效期1周。12/20/20221243、試劑和材料3.7堿性氧化鋁SPE柱（6毫升，500毫4、儀器設(shè)備

4.1高效液相色譜儀（配紫外檢測器）4.2離心機(jī)4.13固相萃取裝置（配考克閥）4.4分析天平精度0.0001g4.5天平精度0.01g4.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀4.7振蕩器4.8勻漿機(jī)4.9渦動混合器4.10分液漏斗50mL4.11梨形瓶100mL4.12離心管50mL4.13微孔濾膜0.45μm12/20/20221254、儀器設(shè)備4.1高效液相色譜儀（配紫外檢測器）12/15檢驗步驟

5.1試料的制備5.1.1取絞碎后的供試樣品,作為供試試料。5.1.2取絞碎后的空白樣品,作為空白試料（陰性對照）。5.1.3取絞碎后的空白樣品5g,添加5μg/mL的工作液0.1mL，作為空白添加試料（陽性對照）。12/20/20221265檢驗步驟5.1試料的制備12/16/2022425檢驗步驟5.2提取和純化5.2.1組織樣品5.00g——5g無水硫酸鈉+25mL乙腈——均質(zhì)——振蕩10min——以3000r/min的速度離心5min——重復(fù)兩次——并兩次的上清液——加入正己烷30mL——振蕩10min——離心5min——取下層液體于100mL梨形瓶中。12/20/20221275檢驗步驟5.2提取和純化12/16/2022435檢驗步驟5.2.1（續(xù)）加正丙醇5mL，50℃下減壓干燥至干，殘留物用95%乙腈3ml溶解，過氧化鋁B柱。用5mL乙腈-水（95+5）過柱，不收集，再用10mL乙腈-水（70+30）洗脫。洗脫液中加入5mL正丙醇，50℃下減壓干燥至干，殘留物用2.0mL流動相溶解，溶液用濾膜過濾，作為試樣溶液，供高效液相色譜分析。12/20/20221285檢驗步驟5.2.1（續(xù)）12/16/2022445檢驗步驟5.3色譜條件5.3.1色譜柱：C18柱，250×4.6mm（i.d.），粒徑5μm，或相當(dāng)者；5.3.2流動相：乙腈-甲醇-水-乙酸(2+2+9+0.2)；5.3.3流速：1mL／min；5.3.4檢測波長：270nm；5.3.5進(jìn)樣量：20μL。12/20/20221295檢驗步驟5.3色譜條件12/16/2022455檢驗步驟5.5測定法5.5.1取試樣溶液和0.05μg/mL的對照溶液，作單點校準(zhǔn)，以峰面積計算。對照溶液及試樣溶液中磺胺類藥物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)，試樣溶液測定過程中應(yīng)參插注入對照溶液，以便準(zhǔn)確定量。5.5.2試劑空白試驗除不加試料外，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行平行操作。5.5.3結(jié)果計算和表述按下式計算供試組織中磺胺類藥物的殘留量：

Xi=(CSVA)/(ASm)12/20/20221305檢驗步驟5.5測定法12/16/2022465檢驗步驟5.6結(jié)果判定5.6.1線性范圍在0.02μg/mL～1.0μg/mL范圍考察線性，計算回歸方程，其相關(guān)系數(shù)≥0.995。5.6.2準(zhǔn)確度本方法在100μg/kg添加濃度水平上的回收率范圍為50%～110%。5.6.3允許相對偏差允許相對偏差≤26%。12/20/20221315檢驗步驟5.6結(jié)果判定12/16/202247SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用

樣品前處理：SPE法–參見：中華人民共和國農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：飼料中鹽酸克侖特羅的測定參見：中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)：動物組織中鹽酸克侖特羅的測定12/20/2022132SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用

12/16SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T468—2005

動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法NY/XQ421-2003“動物尿液中鹽酸克倫特羅（瘦肉精）殘留的檢測氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法”

——起草單位：農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心12/20/2022133SPE在鹽酸克侖特羅（瘦肉精）

殘留檢測中的應(yīng)用中華人民共和動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法

——原理對樣品在堿化的條件下用乙酸乙酯提取，合并提取液后，利用鹽酸克倫特羅易溶于酸性溶液的特點，用稀鹽酸反萃取，萃取的樣液pH調(diào)至5.2后用SCX固相萃取小柱凈化，分離的藥物殘留經(jīng)過雙三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后用帶有質(zhì)量選擇檢測器的氣相色譜儀測定。12/20/2022134動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法——原理1動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法提取

(5±0.05)g動物肝組織——加入15mL乙酸乙酯——加入3mL10.0%碳酸鈉溶液——均質(zhì)——離心2min——上層有機(jī)溶劑——在殘渣中再次提取后——并合——加入5mL0.10mol/L的鹽酸——離心2min——重復(fù)萃取——合并下層溶液——2.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.2。

12/20/2022135動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法提取12/1動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化

SCX小柱——5mL甲醇——5mL水——5mL30mmol/L鹽酸活化——萃取液上樣——5mL水——5mL甲醇——淋洗柱子——抽干SCX小柱——5mL4%氨化甲醇溶液——洗脫。衍生化在50℃水浴——氮氣吹干——100L甲苯——100LBSTFA——80℃衍生lh——冷卻——加入0.3mL甲苯——氣相色譜-質(zhì)譜分析。12/20/2022136動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化12/16動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法GC/MS測定參數(shù)設(shè)定色譜柱：HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm（內(nèi)徑），0.25m（膜厚）；進(jìn)樣口：220℃；進(jìn)樣方式：不分流；進(jìn)樣體積：1L；柱溫：70℃（保持0.6min）,以25℃/min升溫至200℃（保持6min），以25℃/min升溫至280℃（保持5min）；載氣：氦氣，流速：0.9mL/min（恒流）；GC/MS傳輸線溫度：280℃；溶劑延遲：8min；EM電壓：高于調(diào)諧電壓200V；離子源(EI)溫度：200℃；四極桿溫度：160℃；選擇離子監(jiān)測:(m/z)86，212，262，27712/20/2022137動物組織中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法GC/MS測定動物尿液中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化

依次用甲醇5mL、水5mL和30mmol/L鹽酸5mL潤洗固相萃取小柱，將上述備用液過柱，依次用水5mL、甲醇5mL淋洗，真空抽干，用4%氨化甲醇5mL洗脫SCX小柱，收集洗脫液于具塞玻璃試管中，50℃下氮氣吹干。在樣液過柱和洗脫過程中流速控制在1mL/min左右。12/20/2022138動物尿液中鹽酸克倫特羅的測定－氣相色譜-質(zhì)譜法凈化12/16殘留分析SPE前處理應(yīng)用

小結(jié)

——以常規(guī)方法為起點——如需要，根據(jù)樣品性質(zhì)與基質(zhì)進(jìn)行方法優(yōu)化——對于堿性或酸性組分采用雙機(jī)理吸附劑

12/20/2022139殘留分析SPE前處理應(yīng)用

小結(jié)——以常規(guī)方法為起點12/SPE小柱的典型應(yīng)用實例

磺胺：Sep-PakAl2O3(B),12cc/2g,WAT054260–動物源食品中磺胺類藥物殘留物檢測方法——HPLC金霉素：Sep-PakC18或者tC18–金霉素殘留的HPLC測定伊維菌素：Sep-PakC18或者tC18–伊維菌素殘留的HPLC測定法12/20/2022140SPE小柱的典型應(yīng)用實例

磺胺：Sep-PakAl2O3SPE小柱的典型應(yīng)用實例

恩諾沙星，環(huán)丙沙星：Sep-PaktC18(含碳量≥16%)–動物性食品中恩諾沙星和環(huán)丙沙星殘留物檢測方法——HPLC噁喹酸，氟甲喹：Sep-PaktC18(含碳量≥16%)–動物性食品中噁喹酸和氟甲喹殘留物檢測方法——HPLC12/20/2022141SPE小柱的典型應(yīng)用實例

恩諾沙星，環(huán)丙沙星：Sep-Pa國家科技攻關(guān)計劃課題畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全關(guān)鍵控制技術(shù)系列標(biāo)準(zhǔn)研究

(課題編號：2002BA906A75)

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心

12/20/2022142國家科技攻關(guān)計劃課題12/16/202258國家科技攻關(guān)計劃子課題三種獸藥使用規(guī)范驗證和四種獸藥殘留檢測方法研究

(子課題編號：2002BA906A37-01)

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心2005年11月10日

12/20/2022143國家科技攻關(guān)計劃子課題12/16/20225920種獸藥殘留檢測方法的技術(shù)要點22.1豬組織中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚殘留檢測方法研究（氣相色譜-質(zhì)譜法）

在堿化的條件下用乙酸乙酯提取豬組織樣品中己烯雌酚、已二烯雌酚和已烷雌酚殘留，然后通過碳酸鈉溶液和硅膠柱對洗脫物質(zhì)進(jìn)行凈化處理。凈化后的樣品平均分兩份進(jìn)行吹干后衍生，BSTFA衍生后進(jìn)行氣相色譜－質(zhì)譜分析。檢測限:0.25g/kg-0.5g/kg；回收率:60.9%～85.6%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%12/20/202214420種獸藥殘留檢測方法的技術(shù)要點12/16/20226022.1豬組織中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚殘留檢測方法研究（氣相色譜-質(zhì)譜法）

已二烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)衍生化后選擇離子模式下的總離子流圖豬肝添加樣品總離子流圖(已二烯雌酚添加濃度為4μg/kg)12/20/202214522.1豬組織中已烯雌酚、已烷雌酚、已二烯雌酚殘留檢測方法2.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）

試樣勻漿后,加入氘代雌二醇內(nèi)標(biāo),經(jīng)正己烷脫脂,經(jīng)HLB柱、硅膠柱、氨基柱凈化后，于液質(zhì)聯(lián)用儀上進(jìn)行測定。同位素內(nèi)標(biāo)定量。檢測限:1g/kg；回收率:97.1%～106.1%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%12/20/20221462.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）12.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）豬肝添加雌二醇色譜圖(從上至下添加濃度依次為0μg/kg,5μg/kg,2μg/kg,1μg/kg)

12/20/20221472.2豬組織中雌二醇?xì)埩魴z測方法研究（液相色譜-質(zhì)譜法）豬2.3豬尿液中丙酸睪酮殘留檢測方法（液相色譜-質(zhì)譜法）豬尿樣品經(jīng)固相萃取小柱凈化后，供液相色譜-質(zhì)譜儀測定。丙酸睪酮檢測限:1.0g/kg丙酸睪酮回收率:62.2%～73.5%批內(nèi)變異系數(shù)≤15%，批間變異系數(shù)≤20%丙酸睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖

空白豬尿中添加50μg/L的丙酸睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液后的SIR色譜圖

12/20/20221482