生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)之微生物的檢測(cè)方法

檢測(cè)依據(jù)：

GB/T

5750.2-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣的采集和保存

GB/T?5750.12-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法微生物指標(biāo)本文主要包含

1.生活飲用水中的微生物指標(biāo)

2.水樣采集規(guī)則及注意事項(xiàng)

3.菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌的測(cè)定方法

4.對(duì)所檢測(cè)水樣的綜合分析生活飲用水中的微生物指標(biāo)菌落總數(shù)水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上有氧環(huán)境下，37℃培養(yǎng)48h后，所得1mL水樣所含菌落的總數(shù)。檢測(cè)意義：作為一般性污染的指標(biāo)，即評(píng)價(jià)被檢樣品的微生物污染程度和安全性。水樣菌落總數(shù)越多，說(shuō)明水被微生物污染程度越嚴(yán)重，病原微生物存在的可能性越大，但不能說(shuō)明污染的來(lái)源。總大腸菌群指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。檢測(cè)意義：作為糞便污染的指標(biāo)。水樣總大腸菌群的含量，表明水被糞便污染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。耐熱大腸菌群指一群在44-44.5℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。我國(guó)習(xí)慣上稱(chēng)之為“糞大腸菌群”。微生物指標(biāo)常規(guī)檢驗(yàn)流程圖一、水樣采集采樣原則：所采集的樣品具有代表性。采樣容器：不能是新的污染源：不吸收或吸附某些待測(cè)組分不與待測(cè)組分發(fā)生反應(yīng)。保證從采樣到分析期間樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。微生物樣品必須按一般無(wú)菌操作的基本要求采集，并保證在運(yùn)送、貯存過(guò)程中不受污染。自來(lái)水水樣：先將自來(lái)水龍頭用火焰燒灼3min滅菌再開(kāi)放水龍頭使水流5min(經(jīng)常用水的水龍頭放水1~3min)后，采集水樣于無(wú)菌玻璃瓶，約占瓶容量80%，以便搖勻水樣。水源水水樣：選有代表性的地點(diǎn)及可疑地方，一般距水面下10-15cm采集，采樣后在水中改好蓋子，再?gòu)乃腥〕觥Ｗ⒁馐马?xiàng)1.嚴(yán)格無(wú)菌操作。2.

做好標(biāo)記：采得水樣后應(yīng)立即記錄水樣名稱(chēng)、地點(diǎn)、時(shí)間等內(nèi)容。3.從速送檢。水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)超過(guò)2h，在4℃下保存不應(yīng)超過(guò)24h。二、菌落總數(shù)測(cè)定所需培養(yǎng)基和試劑：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、9mL無(wú)菌生理鹽水管。自來(lái)水水樣檢測(cè)操作步驟：1.以無(wú)菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣，注入滅菌平皿中。2.傾注約15mL已融化井冷卻到45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿；使水與培養(yǎng)基充分混勻（每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種，同時(shí)另用一個(gè)平只傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂養(yǎng)基作為空白對(duì)照）3.待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，即為水樣1mL中的菌落總數(shù)。4.培養(yǎng)完成后，用眼睛直接觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。結(jié)果分析與報(bào)告：計(jì)算平均菌落數(shù)，若菌落總數(shù)(CFU/mL)當(dāng)檢樣的菌落數(shù)為1~100時(shí)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告；大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字報(bào)告。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB5749-2006)規(guī)定生活飲用水菌落總數(shù)每毫升不得超過(guò)100個(gè)。水源水檢測(cè)操作步驟：1.以無(wú)操作方法吸取1mL充分混勻的水，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1:10稀釋液。2.吸取1:10的稀釋液1mL，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1:100稀師液，按同法依次稀釋成1:1000，1:1000釋液等備用（如此遞增稀釋一次，必須更換一支1m滅菌管）。3.然后用無(wú)菌極管取稀釋的水樣和2個(gè)~3個(gè)適釋度的水樣1mL，分別注入滅菌平皿內(nèi)。之后操作同自來(lái)水水樣的檢驗(yàn)步驟。結(jié)果分析與報(bào)告：計(jì)算平均菌落數(shù)，首先選擇平均菌落在30~300之間者進(jìn)行計(jì)算。一般水源水中菌落總數(shù)與水清潔程度的關(guān)系：注意事項(xiàng)1.菌落總數(shù)測(cè)定中，應(yīng)選擇合適的稀釋度進(jìn)行(生活飲用水，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升不得超過(guò)100個(gè)，因此以直接吸取1毫升到平板進(jìn)行培養(yǎng))2.各稀釋管、相應(yīng)半皿做好標(biāo)記。包括：水樣名稱(chēng)、稀釋度、時(shí)間、小組。3.嚴(yán)格無(wú)菌操作進(jìn)行水樣稀釋時(shí)，每一稀釋度均需更換吸管。4.傾注時(shí)，要注意營(yíng)養(yǎng)瓊脂的溫度。5.傾入瓊脂后要混勻，待瓊脂凝固后倒置培養(yǎng)。三、總大腸菌群測(cè)定所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基。多管發(fā)酵法步驟：初步發(fā)酵試驗(yàn)：采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。平板分離：對(duì)陽(yáng)性管培養(yǎng)物，接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基觀察菌落特征，并進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢。復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)：對(duì)典型和可疑菌落，接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，進(jìn)行復(fù)發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)。結(jié)果報(bào)告(MPN)：根據(jù)GB5750.12-2006所附檢索表報(bào)告結(jié)果。四、耐熱大腸菌群測(cè)定所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC肉湯、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基多管發(fā)酵法步驟：初步發(fā)酵試驗(yàn)：采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。耐熱培養(yǎng)：陽(yáng)性管接種在EC肉湯管中，44.5℃培養(yǎng)24h觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。平板培養(yǎng)：陽(yáng)性管接種在EMB平板上，36℃±1℃培養(yǎng)24h。結(jié)果報(bào)告(MPN)：根據(jù)GB5750.12-2006所附檢索表報(bào)告結(jié)果。五、大腸埃希氏菌測(cè)定所需培養(yǎng)基和試劑：EC-MUG培養(yǎng)基多管發(fā)酵法步驟：耐熱培養(yǎng)：將總大腸菌群初發(fā)酵中產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的管進(jìn)行大腸埃希氏菌檢測(cè)，接種此類(lèi)試管中的液體到EC-MUG管中，在培養(yǎng)箱或恒溫水浴中44.5℃培養(yǎng)24h。如使用恒溫水浴，在接種后30min內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，使水浴液面超過(guò)E