T-GBC 23-2024 六堡茶中粗多糖含量的測定 分光光度法

ICS65.020.01CCSX55GBC廣西物品編碼與標準化促進會團體標準IT/GBC23—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由廣西壯族自治區(qū)分析測試研究中心提出并宣貫。本文件由廣西物品編碼與標準化促進會歸口。本文件起草單位：廣西壯族自治區(qū)分析測試研究中心、廣西南亞熱帶農業(yè)科學研究所、廣西壯族自治區(qū)產品質量檢驗研究院、廣西思浦林科技有限公司、廣西西大檢測有限公司、廣西壯族自治區(qū)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心、廣西壯族自治區(qū)標準技術研究院、廣西南寧信雄科技服務有限公司。本文件主要起草人：韋英亮、吳玲玲、鄧衛(wèi)利、黃靜、黃殿貴、寧盼盼、何善廉、黃超技、劉維明、劉雙斌、石梁穩(wěn)、韋天富、黃宏飛、蔣劍波、劉洋、鄧藝萍、潘揚昌、蘇紫敏、黃一帆、何禹欽、潘尚麗、班雁華、謝敏蓉、梁鑫佳、班書浩、梁賢智、王明釋、張思敏、陳桂鸞、陳德翼、韋猛、林葵、何明遠、陸云、黃韻霖、吳瓊婧、盤楊桂、韋麗麗、黃文杰、韋懌琳、楊劍、莫淇斐、覃石鳳。1T/GBC23—2024六堡茶中粗多糖含量的測定分光光度法本文件規(guī)定了六堡茶中粗多糖含量的分光光度法測定方法。本文件適用于六堡茶中粗多糖含量的測定。本文件方法的檢出限為0.5mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法DB45/T581六堡茶3術語和定義DB45/T581界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1粗多糖crudepolysaccharide以β-D-葡聚糖或α-D-葡聚糖或其他碳糖為主鏈的一系列高分子化合物。4方法原理粗多糖在濃硫酸的作用下，水解成單糖，并脫水生成糖醛衍生物，與苯酚反應生成橙黃色溶液，在485nm處有特征吸收，與標準系列比較定量。5試劑和材料5.1通用要求除非另有說明,本方法所用試劑分析純以上試劑,水為GB/T6682規(guī)定的三級水。5.2試劑5.2.1硫酸（H2SO4ρ=1.84g/mL。5.2.2無水乙醇（C2H5OH）。5.2.3苯酚（C6H6O），重蒸餾。5.3試劑配制5.3.180％乙醇溶液：取80mL乙醇,用水稀釋定容至100mL,混勻。5.3.280％苯酚溶液：稱取80g苯酚（5.2.3）于100mL燒杯中，加水溶解，轉移至100mL棕色容量瓶中并定容，搖勻后，置4℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩?.3.35％苯酚溶液：吸取5mL80％苯酚溶液（5.3.2），溶于75mL水中，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.4標準品D-無水葡萄糖(C6H12O6,CAS號:50-99-7):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準品，使用前應于105℃恒溫烘干至恒重。2T/GBC23—20245.5標準溶液配置0.1mg/mL標準葡萄糖溶液：取100mgD-無水葡萄糖（5.4），精密稱定，置于500mL燒杯中，加水溶解，轉移至1000mL容量瓶中并定容至刻度，搖勻后，置4℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩?儀器和設備6.1紫外可見分光光度計。6.2分析天平，感量為0.1mg。6.3超聲波提取器。6.4渦旋混合器。6.5離心機，4000r/min。7樣品制備與保存取200g樣品，粉碎后過60目篩處理后，混合均勻，常溫保存。8測定步驟8.1樣品處理稱取粉碎后樣品約1.0g（準確至0.0001g）。置于100mL具塞錐形瓶中，加入無水乙醇30mL，置超聲提取器中提取40min，之后于離心機以4000r/min離心10min，棄去上清液，殘渣加50mL水，超聲提取3次，每次30min，冷卻后用濾紙過濾，合并3次濾液，混勻后移取1mL到25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得樣品測定液。8.2繪制標準曲線移取0.1mg/mL的葡萄糖溶液（5.5）0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL分別置于具塞試管中，各加水補至1.0mL后，分別加入1.0mL5％苯酚溶液（5.3.3）和3.0mL硫酸（5.2.1），振蕩混合后，置水浴鍋中沸水加熱10min，冷卻至室溫后，用試劑空白作為參比溶液，用紫外可見分光光度計在485nm處測定吸光度。以葡萄糖溶液的濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制葡萄糖標準曲線。8.3比色測定精密吸取樣品測定液1.0mL于20mL具塞試管中，按步驟8.2操作，測定吸光度，重復3次，取吸光度平均值。8.4空白實驗除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進行平行操作。9結果計算樣品中粗多糖含量以質量分數(shù)ω計，單位以克每百克（g/100g）表示，按式（1）計算：式中：ρ——比色測定的吸光值扣除空白試驗值后，從標準曲線上查得樣品測定液的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；V1——樣品測定液的體積，單位為毫升（mLV2——樣品提取液的體積，單位為毫升（mLV3——配置樣品測定液所用的樣品提取液的體積，