免疫室SOP文件

丙型肝炎病毒抗體檢測（酶聯(lián)免疫法）1、原理：本法采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理。在微孔條上預包被基因重組HCV結構和非結構區(qū)，配以酶標記IgG抗體及TMB顯色等其他試劑，檢測人血清或血漿中的丙型肝炎病毒抗體。2、標本采集與處理2.1 受檢者準備：對于體檢對象抽血前保持平時的飲食習慣，采血前應禁食4-6小時。2.2靜脈采血：除非是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3采血管：一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈的塑料管或玻璃試管作為容器。2.4標本處理：血液標本應盡快地送實驗室。本試劑使用樣品為人血清或血漿，含EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本實驗。 2.5標本接收：接收標本時應檢查標本是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管是否正確、試管是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。2.6標本儲存：樣品中應無微生物，可在2-8oc儲存1周，長期儲存應低溫凍存，避免反復凍融。 3、試劑與儀器：3.1測定試劑：3.1.1生產(chǎn)廠商：北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司3.1.2批準文號：國藥準字S200100143.1.3包裝：96T13.1.3試劑配置： 濃縮洗滌液 50ml1瓶 樣品稀釋液 12ml1瓶HCV酶標板 812孔或128孔 HCV酶標試劑 12 ml1瓶 HCV陽性對照 0.2ml1支 HCV陰性對照 0.2ml1支 底物液A、B液 各6ml1瓶 終止液 6ml1瓶 自封袋 1個 封版膜 2張 說明書 1份32測定儀器：3.2.1酶標儀： 上海安泰model MT-8583.2.2洗板機： ANALYTECH 8284、操作步驟：41配液：濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。42編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照3孔，陽性對照2孔和空白對照1孔（空白對照孔只加稀釋液不加樣品及酶標試劑）其余各孔加入100UL樣本稀釋液。43 加樣：分別在相應孔中加入待測樣品，陰，陽對照10微升，輕輕振蕩混勻。44溫育：用封版膜封版后，置37oc溫育60分鐘。45 洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。46加酶標抗體：空白對照孔不加 酶標試劑，每孔加入酶標記抗體100微升，輕輕振蕩混勻。47溫育：置37oc溫育30分鐘。48洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干49 顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色30分鐘。410終止：每孔加終止液1滴（50微升），輕輕振蕩混勻。411測定：10分鐘內測定結果，設定酶標儀單波長450 nm或雙波長450 nm /600-650 nm測定。用空白孔調零點后測定各孔A值。5：結果判斷51目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為丙型肝炎病毒抗體（抗HCV）陽性；無色者為丙型肝炎病毒抗體（抗HCV）陰性。52酶標儀檢測：521臨界值（CUT/OFF）計算：CUT/OFF=陰性對照孔A均值+0.12。（不足0.02按0.02計算）522陽性判定：樣品A值臨界值（CUTOFF）者判為抗HCV陽性。(注意初試陽性應重新取樣雙孔復試)523陰性判定：樣品A值臨界值（CUTOFF）者判為抗HCV陰性。 6：注意事項：61本品僅用于體外診斷，操作應按說明書嚴格進行。封版膜不能重復使用，不同批號酶標板、酶標試劑和陰陽對照不可混用，不能與其他廠家試劑混用。62避免在有揮發(fā)性物質及次氯酸類消毒劑（如84消毒液）的環(huán)境下操作。63 使用前請將試劑平衡至室溫（平衡30分鐘以上）實驗前將試劑輕輕振蕩混勻，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板條與干燥劑一起用自封袋密封2-8oc保存。過期試劑請勿使用。64加樣時必須使用加樣器，并經(jīng)常校對加樣器的準確性。加入不同樣品或不同試劑組分時，用更換加樣器吸頭和加樣槽，以防出現(xiàn)交叉污染。65洗滌時各孔均需加滿洗液，防止孔內有游離酶不能洗凈。使用洗板機應設定30-60秒浸泡時間。再洗板結束后，必須立即進行下一步，不可使酶標板干燥。避免長時間的中斷實驗步驟，以確保每孔實驗條件的均一。66結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。讀取結果時，應擦干酶標板底部，且孔內不能有氣泡。不要觸碰孔底部的外壁，指印或劃痕都可能影響板孔的讀值。67所有樣品、廢液和廢棄物都應按傳染物處理。終止液為硫酸，使用時必須注意安全。68顯色時必須加顯色劑A液后再加顯色劑B液，以免顯色過低。69由于ELISA反應原理的限制，本試劑檢測陰性并不排除HCV感染的可能。檢測的陽性結果必須結合臨床信息進行分析。7：臨床意義：檢測人血清或血漿中的HCV抗體。適用于血液的篩查及臨床丙型肝炎病毒感染的輔助診斷。梅毒螺旋體抗體（酶聯(lián)免疫法）1、原理：本試劑盒采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理。在微孔條上預包被梅毒螺旋體抗體基因重組抗原，配以酶標記抗原及TMB顯色劑等其他試劑，檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。2、標本采集與處理2.1 受檢者準備：對于體檢對象抽血前保持平時的飲食習慣，采血前應禁食4-6小時。2.2靜脈采血：除非是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3采血管：一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈的塑料管或玻璃試管作為容器。2.4標本處理：血液標本應盡快地送實驗室。本試劑使用樣品為人血清或血漿，含EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本實驗。2.5標本接收：接收標本時應檢查標本是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管是否正確、試管是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。2.6標本儲存：樣品中應無微生物，可在2-8oc儲存1周，長期儲存應低溫凍存，避免反復凍融。 3、試劑與儀器：3.1測定試劑：3.1.1生產(chǎn)廠商：北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司3.1.2批準文號：國藥準字S200100133.1.3包裝：96T13.1.3試劑配置： 濃縮洗滌液 50ml1瓶TP酶標板 812孔或128孔 TP酶標試劑 12 ml1瓶 TP陽性對照 0.2ml1支 TP陰性對照 0.2ml1支 顯色劑A、B液 各6ml1瓶 終止液 6ml1瓶 自封袋 1個 封版膜 2張 說明書 1份32測定儀器：3.2.1酶標儀： 上海安泰model MT-8583.2.2洗板機： ANALYTECH 8284、操作步驟：41配液：濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。42編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照3孔，陽性對照2孔和空白對照1孔（用雙波長檢測，可不設空白對照孔）43 加樣：分別在相應孔中加入待測樣品，陰，陽對照100微升，輕輕振蕩混勻。44溫育：用封版膜封版后，置37oc溫育60分鐘。45 洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。46加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶標記抗體100微升，輕輕振蕩混勻。47溫育：用封版膜封板后，置37oc溫育30分鐘。48洗滌：揭掉封版膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干49 顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色30分鐘。410終止：每孔加終止液1滴（50微升），輕輕振蕩混勻。411測定：10分鐘內測定結果，設定酶標儀波長于450 nm（建議雙波長450 nm /600-650 nm測定）用空白孔調零點后測定各孔A值。5：結果判斷51目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為梅毒螺旋體抗體（TP-AB）陽性；無色者為梅毒螺旋體抗體（TP-AB）陰性。52酶標儀檢測：521臨界值（CUT/OFF）計算：臨界值=陰性對照孔A均值+0.18。522陽性判定：樣品A值臨界值（CUTOFF）者判為TP陽性。(注意:初試陽性應重新取樣雙孔復試)523陰性判定：樣品A值臨界值（CUTOFF）者判為TP陰性。 6：注意事項：61本品僅用于體外診斷，操作應按說明書嚴格進行。封版膜不能重復使用，不同批號酶標板、酶標試劑和陰陽對照不可混用，不能與其他廠家試劑混用。62避免在有揮發(fā)性物質及次氯酸類消毒劑（如84消毒液）的環(huán)境下操作。63 使用前請將試劑平衡至室溫（平衡30分鐘以上）實驗前將試劑輕輕振蕩混勻，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板條與干燥劑一起用自封袋密封2-8oc保存。過期試劑請勿使用。64加樣時必須使用加樣器，并經(jīng)常校對加樣器的準確性。加入不同樣品或不同試劑組分時，用更換加樣器吸頭和加樣槽，以防出現(xiàn)交叉污染。65洗滌時各孔均需加滿洗液，防止孔內有游離酶不能洗凈。使用洗板機應設定30-60秒浸泡時間。再洗板結束后，必須立即進行下一步，不可使酶標板干燥。避免長時間的中斷實驗步驟，以確保每孔實驗條件的均一。66結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。讀取結果時，應擦干酶標板底部，且孔內不能有氣泡。不要觸碰孔底部的外壁，指印或劃痕都可能影響板孔的讀值。67所有樣品、廢液和廢棄物都應按傳染物處理。終止液為硫酸，使用時必須注意安全。68顯色時必須加顯色劑A液后再加顯色劑B液，以免顯色過低。69由于ELISA反應原理的限制，本試劑檢測陰性并不排除HCV感染的可能。檢測的陽性結果必須結合臨床信息進行分析。7：臨床意義：檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。適用于血液的篩查及臨床梅毒螺旋體抗體感染的輔助診斷。乙肝五項操作規(guī)程1、目的：通過對乙型肝炎病毒抗原、抗體系統(tǒng)的檢測，用于乙肝的臨床診斷，還可應用于對供血員的乙肝篩選、乙肝流行病學的調查，了解各地人群乙型肝炎感染狀況。此外，還可用于乙肝疫苗免疫效果的觀察。2、方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）試驗過程大致分三個步驟：包被：將已知抗原或抗體通過物理吸附結合到固相載體表面，使抗原或抗體固相化。抗原抗體反應：先后加入被檢標本和酶標記物，使之與固相抗原或抗體發(fā)生免疫反應而被結合固定，經(jīng)洗滌除去游離的酶標記物。酶促反應：在反應體系中加入酶的相應底物，使之發(fā)生酶促反應而顯色。3. 臨床意義：HBV抗原抗體血清學標志與臨床關系較為復雜，必須結合臨床特點，對各項檢測結果進行綜合分析，必要時進行HBV-DNA的檢測。常見的HBV抗原、抗體血清學標志物檢測結果的分析見下表：HBsAgHBsAbHBcAbHBeAgHBeAb結果分析IgMIgG潛伏期、感染早期或無癥狀攜帶者急性乙型肝炎/急性乙型肝炎后期或慢性感染曾感染過HBV感染過HBV或接種乙型肝炎疫苗后乙型肝炎表面抗原（HBsAg）1、原理：采用抗-HBs包被反應板，加入待測樣本，經(jīng)孵育后，加入抗-HBs-HRP,當樣本中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結合并與抗- HBs-HRP結合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP復合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之則無顯色反應。2、標本采集與處理2.1 受檢者準備：對于體檢對象抽血前保持平時的飲食習慣，采血前應禁食4-6小時。2.2靜脈采血：除非是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3采血管：一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈的塑料管或玻璃試管作為容器。2.4標本處理：血清：采血后，室溫下自然放置1-2小時，待血液凝固、血塊收縮后，在于3000轉每分鐘離心15分鐘，吸出血清待用。血漿：采血后，樣本和抗凝劑輕輕顛倒混勻6-8次后，充分離心，將血漿與血細胞分離后，吸出血漿待用。2.5標本接收：接收標本時應檢查標本是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管是否正確、試管是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。2.6標本儲存：一般該標本應隨到隨做，血清和血漿標本在2-8oc保存。如需長期保存，可在-20保存，并避免反復凍融。3、試劑與儀器：3.1測定試劑：3.1.1生產(chǎn)廠商：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司3.1.2批準文號：國藥準字S109101483.1.3包裝：48T1、96T13.1.3試劑配置： 25倍濃縮稀釋液 40ml1瓶HBsAg微孔反應板 96孔 HBsAg酶結合物 6.2 ml1瓶 HBsAg陽性對照 1.0 ml1瓶 HBsAg陰性對照 1.0 ml1瓶 顯色液A、B液 各8.0 ml1瓶 終止液 7 ml1瓶 封板紙 5片 說明書 1份32測定儀器：3.2.1酶標儀： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳機： ANALYTECH828 4、操作步驟：41配液：配制工作濃度洗滌液（以純化水做25倍稀釋）42編號：將樣品對應微孔按序編號（共預留陰性對照孔3孔、陽性對照1孔、建議預留空白對照1孔）43加樣：加入75微升待測樣本和陰、陽性對照與反應孔中。44溫育：用封片紙覆蓋反應板后，置37oc溫育60分鐘。45加酶標抗體：取出反應板，撕去封片，在已加入待測樣本和陰性、陽性對照孔中加入50微升酶結合物。微孔振蕩器或手工輕輕振蕩10秒鐘。46溫育：用封片紙覆蓋反應板后，置37oc溫育30分鐘。46洗滌：461手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。462洗板機：將孔內液體甩干。選擇5次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。47顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，用封板紙覆蓋反應板后，將反應板放置37oc孵育30分鐘。48終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。49測定：用酶標儀讀數(shù)，波長450nm。（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm或630相近的波長）若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對照孔校零，然后讀取各孔OD值。5：結果判斷51目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性。52酶標儀檢測：521臨界值（CUT/OFF）計算：COV:Cut-off Value參考值PC：陽性對照OD值NCx:陰性對照平均OD值。NCx=(NC1+NC2+NC3)3檢測有效性：NCx0.1、PC1.0,則檢測結果有效。COV=NCx+0.100S:待測樣品的OD值，S/COV：待測樣本和COV的比值。522陽性判定：樣品OD值S/COV1.0者判為HBsAg陽性。523陰性判定：樣品OD值S/COV1.0者判為HBsAg陰性。6：注意事項：61從冷藏環(huán)境中取出時應室溫平衡至室溫后方可使用，未用完的微孔條用加有干燥劑的自封袋密封保存。在平衡試劑的同時，待測樣本需平衡至室溫后再行測試。62使用前試劑應搖勻。63顯色過程必須封片。所有封片紙不能重復使用。64結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。65嚴格按操作步驟進行，不同批次試劑不可混用。66洗板機洗板是應時常檢查加液頭，確保其暢通無阻塞，洗板是所用的吸水紙請勿反復使用。洗板機的管路用純化水沖洗，以防阻塞和腐蝕。67待測樣品不可用NaN3防腐。68本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。7：臨床意義：檢測人血清或血漿樣本中的乙型肝炎病毒表面抗原，用于血源篩查及臨床乙型肝炎病毒感染的輔助判斷。 乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）1、原理：采用純化HBsAg包被反應板，加入待測樣品，同時加入HBsAg-HRP，如待測樣品中含有抗-HBs時，該抗-HBs就與包被HBsAg、HBsAg-HRP結合形成HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP復合物。加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應，反之就顯色反應。2、標本采集與處理2.1 受檢者準備：對于體檢對象抽血前保持平時的飲食習慣，采血前應禁食4-6小時。2.2靜脈采血：除非是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3采血管：一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈的塑料管或玻璃試管作為容器。2.4標本處理：血清：采血后，室溫下自然放置1-2小時，待血液凝固、血塊收縮后，在于3000轉每分鐘離心15分鐘，吸出血清待用。血漿：采血后，樣本和抗凝劑輕輕顛倒混勻6-8次后，充分離心，將血漿與血細胞分離后，吸出血漿待用。2.5標本接收：接收標本時應檢查標本是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管是否正確、試管是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。2.6標本儲存：一般該標本應隨到隨做，血清和血漿標本在2-8oc保存。如需長期保存，可在-20保存，并避免反復凍融。3、試劑與儀器：3.1測定試劑：3.1.1生產(chǎn)廠商：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司3.1.2批準文號：國藥準字2009第34007023.1.3包裝：48T1、96T13.1.3試劑配置： 25倍濃縮稀釋液 40ml1瓶HBsAb包被板 96孔 HBsAb酶標記抗體 6.21ml1瓶 HBsAb陽性對照 1.0ml1瓶 HBsAb陰性對照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶終止液 7.0ml1瓶 封片 2片說明書 1份32測定儀器：3.2.1酶標儀： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳機： ANALYTECH828 4、操作步驟：41配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（20*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。42編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）43加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。44加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。45溫育：置37oc溫育30分鐘。46洗滌：461手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。 462洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。47顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。48終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。49測定：用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。5：結果判斷51目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（抗HBs）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（抗HBs）陰性。52酶標儀檢測：521臨界值（CUT/OFF）計算：COV=陰性對照平均OD值2.1。（陰性對照孔OD值低于0.05者按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。522陽性判定：樣品的OD值大于或等于COV值時，說明HBsAg陽性。523陰性判定：樣品OD值小于COV值時，說明為HBsAg陰性。6：注意事項：61從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置37應室溫平衡30分鐘方可使用，余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時，待測樣品需置室溫平衡30分鐘后在進行測試。62使用前試劑應搖勻，并棄去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重復使用。64結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。65嚴格按操作步驟進行，不同批次試劑不得混用。66待測標本不可用NaN3防腐，如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。67本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。乙型肝炎核心抗體（抗-HBc）1、原理：采用基因工程重組HbcAg包被反應板，加入待測樣品，同時加入抗-HBc-HRP，與抗原形成競爭結合，如待測樣品中抗-HbcAg含量高，則抗-HBc-HRP與HbcAg結合少，加入TMB底物時顯色淡，反之則顯色深。2、標本采集與處理2.1 受檢者準備：對于體檢對象抽血前保持平時的飲食習慣，采血前應禁食4-6小時。2.2靜脈采血：除非是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3采血管：一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈的塑料管或玻璃試管作為容器。2.4標本處理：血清：采血后，室溫下自然放置1-2小時，待血液凝固、血塊收縮后，在于3000轉每分鐘離心15分鐘，吸出血清待用。血漿：采血后，樣本和抗凝劑輕輕顛倒混勻6-8次后，充分離心，將血漿與血細胞分離后，吸出血漿待用。2.5標本接收：接收標本時應檢查標本是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管是否正確、試管是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。2.6標本儲存：一般該標本應隨到隨做，血清和血漿標本在2-8oc保存。如需長期保存，可在-20保存，并避免反復凍融。3、試劑與儀器：3.1測定試劑：3.1.1生產(chǎn)廠商：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司 3.1.2批準文號：國藥準字2008第34007003.1.3包裝：48T1、96T13.1.3試劑配置： 25倍濃縮稀釋液 40ml1瓶HBcAb包被板 96孔 HBcAb酶標記抗體 6.21ml1瓶 HBcAb陽性對照 1.0ml1瓶 HBcAb陰性對照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶終止液 7.0ml1瓶 封片 2片說明書 1份32測定儀器：3.2.1酶標儀： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳機： ANALYTECH828 4、操作步驟：41配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。42編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）43加樣：將待測樣本用生理鹽水1:30稀釋。（稀釋樣本檢測結果為臨床意義；樣本原液加樣，檢測結果為流行病學意義。用戶可根據(jù)實際情況選擇。）分別在相應孔中加入稀釋樣本50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。44加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。45溫育：置37oc溫育30分鐘。46洗滌：461手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。462洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。47顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。48終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。49測定：用用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。5：結果判斷51目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陽性；無色者為乙型肝炎表面抗體（HBcAb）陰性。52酶標儀檢測：521臨界值（CUT/OFF）計算：未稀釋樣品CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N0.3。1:30稀釋樣品CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N0.5。522陽性判定：樣品OD值小于COV，說明該樣品HBcAb陽性。523陰性判定：樣品OD值大于或等于COV,說明該樣品HBcAb陰性。6：注意事項：61從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置37應室溫平衡30分鐘方可使用，余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時，待測樣品需置室溫平衡30分鐘后在進行測試。62使用前試劑應搖勻，并棄去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重復使用。64結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。65嚴格按操作步驟進行，不同批次試劑不得混用。66待測標本不可用NaN3防腐，如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。67本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。乙型肝炎e抗原（HBeAg）1、原理：采用抗-HBe包被反應板，加入待測樣品，同時加入抗-HBe-HRP，如待測樣品中含有HBeAg時就與包被抗-HBe、抗-HBe-HRP結合形成復合物，加入底物產(chǎn)生顯色反應，反之就無顯色反應。2、標本采集與處理2.1 受檢者準備：對于體檢對象抽血前保持平時的飲食習慣，采血前應禁食4-6小時。2.2靜脈采血：除非是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3采血管：一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈的塑料管或玻璃試管作為容器。2.4標本處理：血清：采血后，室溫下自然放置1-2小時，待血液凝固、血塊收縮后，在于3000轉每分鐘離心15分鐘，吸出血清待用。血漿：采血后，樣本和抗凝劑輕輕顛倒混勻6-8次后，充分離心，將血漿與血細胞分離后，吸出血漿待用。2.5標本接收：接收標本時應檢查標本是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管是否正確、試管是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。2.6標本儲存：一般該標本應隨到隨做，血清和血漿標本在2-8oc保存。如需長期保存，可在-20保存，并避免反復凍融。3、試劑與儀器：3.1測定試劑：3.1.1生產(chǎn)廠商：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司3.1.2批準文號：國藥準字2009第34007023.1.3包裝：48T1、96T13.1.3試劑配置： 25倍濃縮稀釋液 40ml1瓶HBeAg包被板 96孔 HBeAg酶標記抗體 6.21ml1瓶 HBeAg陽性對照 1.0ml1瓶 HBeAg陰性對照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶終止液 7.0ml1瓶 封片 2片說明書 1份32測定儀器：3.2.1酶標儀： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳機： ANALYTECH828 4、操作步驟：41配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。42編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）43加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。44加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。45溫育：置37oc溫育30分鐘。46洗滌：461手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置浸泡30-60秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。462洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。47顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。48終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。49測定：用用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。5：結果判斷51目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，有明顯黃色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陽性；無色者為乙型肝炎e抗原（HBeAg）陰性。52酶標儀檢測：521臨界值（CUT/OFF）計算：CUT/OFF=陰性對照孔OD均值N2.1。（陰性對照孔OD值低于0.05者按0.05計算，高于0.05按實際OD值計算）522陽性判定：樣品OD值大于或等于COV值時，說明該樣品HBeAg陽性。523陰性判定：樣品OD值小于COV值時，說明該樣品HBeAg陰性。6：注意事項：61從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置37應室溫平衡30分鐘方可使用，余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時，待測樣品需置室溫平衡30分鐘后在進行測試。62使用前試劑應搖勻，并棄去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重復使用。64結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。65嚴格按操作步驟進行，不同批次試劑不得混用。66待測標本不可用NaN3防腐，如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。67本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。乙型肝炎e抗體（抗-HBe）1、原理原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反應板，加入待測樣品，同時加入抗-HBe-HRP，與抗原形成競爭結合，如待測樣品中抗-HBe含量高，則抗-HBe-HRP與HBeAg結合少，加入TMB底物時顯色淡，反之則顯色深。2、標本采集與處理2.1 受檢者準備：對于體檢對象抽血前保持平時的飲食習慣，采血前應禁食4-6小時。2.2靜脈采血：除非是臥床病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，因此影響測定水平。故在采血前至少應靜坐分鐘。一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3采血管：一般采用血清做檢驗，可以用一般潔凈的塑料管或玻璃試管作為容器。2.4標本處理：血清：采血后，室溫下自然放置1-2小時，待血液凝固、血塊收縮后，在于3000轉每分鐘離心15分鐘，吸出血清待用。血漿：采血后，樣本和抗凝劑輕輕顛倒混勻6-8次后，充分離心，將血漿與血細胞分離后，吸出血漿待用。2.5標本接收：接收標本時應檢查標本是否符合要求(要求密封、無溶血、無雜物)、所用試管是否正確、試管是否填寫完整、并問訊采血日期，對不合格標本應退回重采，并填寫記錄。2.6標本儲存：一般該標本應隨到隨做，血清和血漿標本在2-8oc保存。如需長期保存，可在-20保存，并避免反復凍融。3、試劑與儀器：3.1測定試劑：3.1.1生產(chǎn)廠商：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司3.1.2批準文號：國藥準字2009第34007043.1.3包裝：48T1、96T13.1.3試劑配置： 25倍濃縮稀釋液 40ml1瓶HBeAb包被板 96孔 HBeAb酶標記抗體 6.21ml1瓶 HBeAb陽性對照 1.0ml1瓶 HBeAb陰性對照 1.0ml1瓶 底物液A、B液 8.0ml1瓶終止液 7.0ml1瓶 封片 2片說明書 1份32測定儀器：3.2.1酶標儀： 上海安泰 MODEL MT-8583.2.2洗扳機： ANALYTECH828 4、操作步驟：41配液：濃縮洗滌液配置前充分混勻（如有結晶析出應充分溶解），將濃縮洗滌液（25*）用蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。42編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰陽性對照各2孔和空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑）43加樣：分別在相應孔中加入待測樣品50微升和陰，陽對照50微升及質控血清。44加酶標抗體：空白對照孔不加酶標試劑，每孔加入酶結合物50微升，輕輕振蕩混勻。45溫育：置37oc溫育30分鐘。46洗滌：461手工：扣去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置20秒，扣去洗滌液，重復5次在吸水紙上拍干。462洗板機：將孔內液體甩干。選擇4次洗滌程序，洗板后在吸水紙上拍干。47顯色：每孔加入顯色劑A，B液各1滴（50微升），輕輕振蕩勻，37oc避光顯色15分鐘。48終止：每孔加終止液1滴（50微升），混勻。49測定：用用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm（建議使用雙波長的酶標儀比色，參考波長630nm）測定各孔OD值先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。5：結果判斷51目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，無色者為乙型肝炎e抗體（HBeAb）陽性；黃色者為乙型肝炎e抗體（HBeAb）陰性。52酶標儀檢測：521臨界值（CUT/OFF）計算：COV=(陰性對照平均OD值+陽性對照平均OD值)0.5522陽性判定：樣品OD值S/CO1者判為HBeAb陽性。523陰性判定：樣品OD值S/CO1者判為HBeAb陰性。6：注意事項：61從冷藏環(huán)境中取出時試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置37應室溫平衡30分鐘方可使用，余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時，待測樣品需置室溫平衡30分鐘后在進行測試。62使用前試劑應搖勻，并棄去1-2滴后垂直滴加。63封片不能重復使用。64結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。65嚴格按操作步驟進行，不同批次試劑不得混用。66待測標本不可用NaN3防腐，如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。67本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。丙肝抗體檢測（HCV-Ab）1.方法：膠體金法2.原理：本品采用膠體金免疫層析專業(yè)技術，在玻璃纖維素膜上預包被金標鼠抗人IgG抗體，在硝酸纖維素膜上檢測線和對照線處分別包被丙肝混合抗原和人IgG抗體。檢測陽性標本時，血清樣本中HCV-Ab與膠體金標記鼠抗體IgG抗體結合形成復合物，由于層析作用復合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預包被的抗原結合形成“Au-anti-IgG Ab-HCV Ab-HCV Ag”夾心物而凝聚顯色，游離金標鼠抗人IgG抗體則在對照線處與人IgG抗體結合而富集顯色。陰性標本則僅在對照線處顯色，15分鐘內觀察結果即可。3 .試劑 英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司4 .試劑組成 4.1HCV膠體金試紙條 50條 4.2說明書 1份4.3樣品稀釋液 4.4塑料滴管5 .儀器 目測6 .操作步驟6.1將待測標本從儲存條件下取出，平衡至室溫并編號。6.2用塑料滴管加1滴樣本血清或血漿，加到試紙條指示箭頭下端的加樣處。6.3 隨即加2滴樣本稀釋液。6.4加樣后，陽性標本可在1-15分鐘內檢出，建議15分鐘再最終觀察并記錄試驗結果。7.結果判斷 陰性：出現(xiàn)一條紅線。 陽性：出現(xiàn)二條紅線。 無效：不出現(xiàn)紅線。8 .正常參考值 陰性9 .臨床意義 同ELISA法測定。10 .標本采集10.1 無菌條件下抽取靜脈血2毫升，及時分離血清。10.2 如采用血漿測定，臨床常用抗凝劑（EDTA、肝素、枸櫞酸鈉）不影響實驗結果。10.3 標本溶血、脂血、嚴重黃疸或加熱滅活的血清標本均可能影響檢測結果。11. 注意事項11.1標本應新鮮澄清。11.2在良好光線下判斷結果。11.3試劑從包裝中取出后，應盡快進行實驗，避免放置于空氣中時間過長，導致受潮。11.4檢測線顏色的深淺程度與樣品中抗體的滴度沒有一定的必然；聯(lián)系。11.5任何一種測試都不能絕對保證樣品中沒有低濃度抗體存在，所以陰性結果任何時候不能排除含有HCV暴露和感染的可能。11.6實驗證實，乙肝、艾滋、甲肝、庚肝、類風濕因子、紅斑狼瘡等各種類型的標本不會對測試產(chǎn)生干擾。 梅毒抗體檢測（TP-Ab）1.方法：膠體金法2.原理：本品采用膠體金免疫檢測技術和層析原理，定性檢測血清（漿）樣本中的梅毒螺旋體抗體。檢測時，樣本中梅毒抗體可與膠體金標記抗原結合形成抗原抗體復合物，由于層析作用復合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預包被的抗原結合形成 “Au-TPAg-TPAb-TPAg”夾心物而凝聚顯色，游離膠體金標記梅毒抗原則在對照線處與與預包被的兔抗TP抗體結合而富集顯色。陰性標本則僅在對照線處顯色。3 .試劑 英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司4 .試劑組成 4.1TP膠體金試紙條 50條 4.2說明書 1份5 .儀器 目測6 .操作步驟6.1將待測標本從儲存條件下取出，平衡至室溫并編號。6.2將試劑置于干凈平坦的臺面上，在加樣條上用微量加樣器加入100ul樣本。6.3加樣后，20分鐘觀察并記錄試驗結果。 7.結果判斷 陰性：出現(xiàn)一條紅線。 陽性：出現(xiàn)二條紅線。 無效：不出現(xiàn)紅線。8 .正常參考值 陰性9 .臨床意義 同ELISA法測定。10 .標本采集10.1 靜脈的血清、血漿樣本必須在無菌條件下，并避免樣品溶血。10.2血清和血漿樣品（EDTA抗凝）收集后7天內檢測，樣品須放在2-8保存。如果大于7天則須冷凍保存。11. 注意事項11.1本試劑盒僅用于體外診斷試驗，僅用于人血清（漿），其它體液和樣本可能得不到準確結果。11.2樣本的加樣建議使用微量加樣器準確加入。11.3試劑從包裝中取出后，應盡快進行實驗，避免放置于空氣中時間過長，導致受潮。11.4檢測線顏色的深淺程度與樣品中抗體的滴度沒有一定的必然；聯(lián)系。22分鐘后判讀，結果無效。11.5任何一種測試都不能絕對保證樣品中沒有低濃度抗體存在，所以陰性結果任何時候不能排除含有梅毒螺旋體暴露和感染的可能。本品檢測陽性樣本，需用其它方法作進一