不同金屬離子對(duì)酶活性的影響

1、金屬離子對(duì)酶活性的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1、了解金屬離子對(duì)酶活性的影響；2、掌握不同金屬離子對(duì)酶活性作用結(jié)果的測(cè)量方 法 實(shí)驗(yàn)原 理：酸性磷酸酯酶廣泛分布于動(dòng)物和植物中，植物的種子、 霉菌、肝臟和 人體的前列腺中。它對(duì)生物體核苷酸、磷蛋白 和磷脂的代謝，骨的生成和 磷酸的利用，都起著重要作用。 磷酸酶是一種能夠?qū)?duì)應(yīng)底物去磷酸化的 酶，通過(guò)水解磷酸 單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子 和自 由的羥基。磷酸酶的作用與激酶的作用正相反，激酶是磷酸 化酶，可 以利用能量分子，如 ATP ，將磷酸基團(tuán)加到對(duì)應(yīng)底 物分子上。本實(shí)驗(yàn)選用綠豆芽作材料，從中提取酸性磷酸酯酶。以 人工合成的對(duì) 硝基苯磷

2、酸酯（ NPP ）作底物，水解產(chǎn)生對(duì)硝 基苯酚和磷酸。在堿性溶液中，對(duì)硝基酚鹽離子在 405nm 處 光吸收強(qiáng)烈，而底物沒(méi)有這種特性。凡是能提高酶活性的物 質(zhì)統(tǒng)稱為酶的 激活劑。無(wú)機(jī)離子和一些金屬離子對(duì)酶有激活 作用，可以作為酶的激活 劑。其中鉀離子是酸性磷酸酯酶的 一種激活劑，它在酶與底物之間起了橋 梁作用，形成了酶一 金屬離子一底物三元復(fù)合物，從而更有利于底物與酶 的活性 中心部位的結(jié)合。而氯離子和鈉離子對(duì)酸性磷酸酯酶的活性沒(méi)有什么影響 ?一些重金屬離子如銅離子，對(duì)酶活性具有抑制作用 實(shí)驗(yàn)用品：1 、 儀器：恒溫水浴箱、試管架、試管、分光光度計(jì)、比色皿、吸頭、滴管、移液槍、移液管2、 試劑

3、 :1.2mmol/L NPP 100ml 、 0.3mol/L NaOH250ml 、酸性磷酸酯酶、 pH5.0 的檸檬酸緩沖液1000ml2mmol/L FeSO 42mmol/LCuSO4MnCl 22mmol/L 、MgSO 42mmol/L 、 KCl 2mmol/L EDTA實(shí)驗(yàn)步驟 :FeSO CuSO MnCl MgSO 空白調(diào)零EDTA KCl 對(duì)照NPP(ml)酶液(ml)金屬離NaOH(mI)33333333注：反應(yīng)均在37度水浴箱中進(jìn)行，0號(hào)管先加入I.OmINPP后保溫15分鐘，然后加入 NaOH 3ml ,混勻后再加 酶液1ml，在波長(zhǎng)405nm處觀察OD值，以0號(hào)

4、管調(diào)零CIO0nosno系列15SzouW3實(shí)驗(yàn)結(jié)果FeSOCuSO MnCIMgSO空白調(diào)零4424對(duì)照EDTA KCl試管號(hào)c345-70 126OD0.680.301.260.350.340.340.28(abs)049271 24由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到的圖標(biāo)如下:不同的金屬離了實(shí)驗(yàn)作業(yè)： 以各金屬離子為橫坐標(biāo)， A405 縱坐標(biāo)，繪制不同金屬離子與 酶活力曲 線，觀察金屬離子與酶活力的關(guān)系，分析哪些是酶 活性激活劑，哪些是 酶活性抑制劑。結(jié)果分析：通過(guò)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的 0D 值對(duì)比可知，保證在 適宜的溫度、 pH 等外界條件下，再加入 1ml 2mmol/L 濃度 的各種金屬 離子溶液，對(duì)酸性磷酸酯酶的活力均有激活作用。 它們對(duì)酸性磷酸酯酶激活作用的強(qiáng)度由