KDRmRNA在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

1、KDR mRNA在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義【摘要】 探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（KDR）與微血管密度表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）生物學(xué)行為與預(yù)后的關(guān)系。方法 分別應(yīng)用原位分子雜交及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)62例NSCLC和16例肺良性瘤樣病變組織中的KDR mRNA、MVD的表達(dá)。結(jié)果 （1）NSCLC與肺的良性瘤樣病變MVD、KDR mRNA的表達(dá)具有顯著性差異（P0.01 ），肺癌MVD隨KDR mRNA 表達(dá)增強(qiáng)而增多，兩者呈正相關(guān)。（2）MVD和KDR mRNA的表達(dá)在肺腺癌高于肺鱗癌（P0.01）兩者隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期的進(jìn)展而升高（P0.01）。（3）生存期5年者M(jìn)VD

2、和KDR mRNA的表達(dá)顯著高于生存期5年者（P0.01）。結(jié)論 MVD和KDR mRNA的表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，可以作為評(píng)估NSCLC生物學(xué)行為及預(yù)后判斷的指標(biāo)，KDR可能成為NSCLC的一個(gè)潛在的抗血管生成治療的靶點(diǎn)。 【關(guān)鍵詞】 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2 非小細(xì)胞肺癌 原位分子雜交 微血管密度0 引言 肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是患者治療失敗和死亡的主要原因，而新生血管的生成是肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的解剖學(xué)和生理學(xué)基礎(chǔ)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）及其受體2（Kinase domaincontaining rece

3、ptor , KDR/VEGFR2/Flk1）在促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂與增殖，促進(jìn)血管生成中起著關(guān)鍵作用。許多腫瘤及其血管內(nèi)皮細(xì)胞均有KDR表達(dá)升高，KDR表達(dá)水平與血管內(nèi)皮細(xì)胞的更新速度呈正相關(guān)。 本研究應(yīng)用原位分子雜交技術(shù)檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌（Nonsmall cell lung cancer, NSCLC）中KDR mRNA的表達(dá)，應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)微血管密度（Microvascular density, MVD）的表達(dá)，試圖探討KDR mRNA的表達(dá)對(duì)MVD的影響,以及KDR mRNA 表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，以探測(cè)KDR的作用機(jī)制，為NSCLC的抗血管生成治療提供理論依據(jù)。1

4、材料與方法1.1 臨床資料 選用1999年3月至2000年3月我院心胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的NSCLC 標(biāo)本62例，其中男44例，女18例；年齡3776歲，平均55.9歲。所有患者術(shù)前均未行放療和化療，經(jīng)影像學(xué)檢查確認(rèn)無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。按WHO肺腫瘤組織學(xué)分型（1981）標(biāo)準(zhǔn)，包括肺鱗癌27例，肺腺癌35例。組織學(xué)分級(jí)為級(jí)7例，級(jí)25例，級(jí)30例。按UICC（1997）肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)，包括期17例，期10例，期33例，期2例。腫瘤長(zhǎng)徑為1.811.0，平均5.0 。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。其中42例有完整隨訪資料，生存期5年者32例，5年者10例。另選同期肺良性瘤樣病變16例（其

5、中結(jié)核球11例，炎性假瘤3例，漿細(xì)胞肉芽腫1例，纖維軟骨脂肪瘤1例）組織標(biāo)本作對(duì)照。1.2 主要試劑 CD34鼠單抗、免疫組化SP試劑盒和DAB顯色試劑購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，KDR mRNA原位雜交試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。1.3 實(shí)驗(yàn)方法 石蠟塊標(biāo)本制成4m切片，原位分子雜交采用胃蛋白酶暴露mRNA核酸片斷，參照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性雜交信號(hào)，少量胞核也有陽(yáng)性信號(hào)，無(wú)陽(yáng)性信號(hào)為陰性。免疫組織化學(xué)染色程序按SP試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，同時(shí)用已知的陽(yáng)性切片在同條件下染色作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為空白對(duì)照。 腫瘤MVD的測(cè)量應(yīng)用HPIAS2000

6、型全醫(yī)學(xué)彩色圖像分析系統(tǒng)分析處理。參照Weidner方法1，先在低倍光鏡（20，100）下掃描整張切片，確定3個(gè)高血管密度區(qū)，即“熱點(diǎn)”，再在高倍鏡（400）下計(jì)數(shù)被染成黃色的微血管數(shù)目，結(jié)果用3個(gè)高倍鏡視野下微血管數(shù)目的平均數(shù)表示。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包，兩個(gè)均數(shù)之間的比較用student t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用2檢驗(yàn) 。2 結(jié)果2.1 MVD與NSCLC NSCLC組織內(nèi)微血管密度分布，相互間聯(lián)系緊密，MVD平均為43.7812.46；肺良性瘤樣病變微血管分布均勻且少，MVD平均為7.424.12 ，NSCLC較肺良性瘤樣病變顯著升高（P0.01）（表1）。從表1

7、還可以看出，肺腺癌組織MVD明顯高于鱗癌組織（P0.05），期組MVD明顯高于期組（P0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P0.05），而不同組織學(xué)分級(jí)與腫瘤大小間無(wú)顯著性差異。2.2 KDR mRNA與NSCLC KDR mRNA 陽(yáng)性信號(hào)以胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒判斷（圖1、2）。由表1可見(jiàn)，KDR mRNA表達(dá)在肺癌高、中、低分化組織中依次上調(diào)，低分化、中分化肺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率較高分化顯著升高，差異有顯著性（P0.05）。TNM分期期病例中KDR mRNA表達(dá)陽(yáng)性率 80（39 / 45）高于期病例的58.82（10 / 17），差異有顯著性（P0.01）。有淋巴

8、結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)陽(yáng)性率較陰性組差異有顯著性（P0.05）。腫瘤大小間KDR的陽(yáng)性表達(dá)率差異也有顯著性（P0.05）。而KDR mRNA表達(dá)陽(yáng)性率與肺癌的病理類型無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系（P0.05）。圖1 鱗癌KDR mRNA （100）（略）圖2 腺癌KDR mRNA （100）（略）2.3 MVD和KDR mRNA表達(dá)與NSCLC預(yù)后 從表1可見(jiàn)，生存期5年組的MVD明顯高于生存期5年組（P0.01）；同樣，生存期5年組的KDR mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率亦明顯高于生存期5年組（P0.05）。表1 MVD、KDR mRNA和NSCLC臨床生物學(xué)的關(guān)系（略）2.4 MVD與KDR mRNA表達(dá)的關(guān)系 62例NS

9、CLC中，KDR mRNA（）49 例，KDR mRNA（） 13例；KDR mRNA（）者M(jìn)VD為51.726.71，KDR mRNA（）者M(jìn)VD為 44.03 10.84 ，KDR mRNA表達(dá)陽(yáng)性者M(jìn)VD較KDR mRNA表達(dá)陰性者明顯升高（P0.01）。見(jiàn)表2。表2 KDR的表達(dá)與微血管密度（MVD）的關(guān)系（略）3 討論 腫瘤的血管新生成是一個(gè)包括血管內(nèi)皮溶解，內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移及血管腔形成的復(fù)雜過(guò)程，并且是由促進(jìn)和抑制血管生成的正負(fù)相關(guān)因子共同調(diào)控的復(fù)雜過(guò)程。在生理狀況下，正負(fù)因子處于平衡狀態(tài)。而腫瘤在其生長(zhǎng)、演進(jìn)過(guò)程中分泌促血管生成的相關(guān)因子，將平衡打破，誘導(dǎo)血管新生。腫瘤血管生成

10、過(guò)程中VEGF及其受體KDR起重要作用。KDR與VEGF的親和力為Kd752770Pm,具有明顯的化學(xué)趨化作用和促分裂活性，而Flt1缺乏此活性2.3。人在胚胎和出生時(shí)的腦血管也可有KDR表達(dá)，但成年后明顯減少。VEGF基因顯性陰性研究表明KDR與血管島、血管形成和造血有關(guān)，提示KDR是血管生成的主要調(diào)控因子4。VEGF具有強(qiáng)烈的誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)其受體的作用，VEGF及其受體通過(guò)自分泌或旁分泌途徑，聯(lián)合調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞分化與血管形成。由于實(shí)體瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移對(duì)血管新生的依賴性，VEGF及其受體已成為近年來(lái)抗治療血管生成的重要研究靶點(diǎn)。 本研究結(jié)果顯示，NSCLC中MVD和KDR mRNA表達(dá)明顯

11、高于肺良性瘤樣病變（P0.05），MVD隨KDR表達(dá)增強(qiáng)而增多，兩者呈正相關(guān)，與Koukourakis等5 報(bào)道一致。提示在NSCLC中存在著活躍的血管生成，KDR作為VEGF的的最重要的功能受體，KDR在介導(dǎo)腫瘤血管新生方面起重要的作用。 KDR在腫瘤組織中的表達(dá)水平與腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系，目前仍然存在較大的爭(zhēng)議，Delmotte等6進(jìn)行的meta分析發(fā)現(xiàn)，VEGF可以作為預(yù)測(cè)NSCLC患者的預(yù)后指標(biāo)，而KDR作為NSCLC患者的預(yù)后指標(biāo)的證據(jù)不足，但Decaussin等7的研究表明，KDR mRNA的表達(dá)水平與肺癌組織中的血管生成呈正相關(guān)，而與NSCLC患者的生存期呈負(fù)相關(guān)。Harada等8

12、認(rèn)為KDR可以作為結(jié)直腸癌患者的預(yù)后指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，KDR mRNA表達(dá)水平與NSCLC患者的生存期呈負(fù)相關(guān)，且可以作為預(yù)測(cè)NSCLC的預(yù)后指標(biāo)。 綜上所述，肺癌組織中KDR mRNA表達(dá)明顯高于良性病變組織，且與肺癌大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況和PTNM分期呈正相關(guān)(P0.01） ，而與癌細(xì)胞分化程度呈負(fù)相關(guān)。KDR mRNA陽(yáng)性表達(dá)組的5年生存率顯著低于陰性表達(dá)組，從而提示KDR參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展與肺癌的惡性程度密切相關(guān)，可以作為肺癌生物學(xué)行為的一項(xiàng)評(píng)估指標(biāo)。而且KDR mRNA的表達(dá)陽(yáng)性者較KDR mRNA表達(dá)陰性者的MVD數(shù)目顯著增加，提示KDR可能成為NSCLC的一個(gè)潛在的抗血管治療的靶

13、點(diǎn)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Weidner N. Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessle density within breast carcinoma and other solid tumors. Breast Cancer Res Treat, 1995, 36（2）:16980.2 Meister B, Grunebach F, Bautz F, et al. Expression of VEGF and its receptors in human neuroblastomaJ. Eur J Can

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