溶出度試驗影響因素及溶出度方法開發(fā)

1、 溶出度試驗影響因素及溶出方法驗證1. 溶出速率的定義Noyes-whitney方程：dW/dt=kS(Csat-Csol)試中：dW/dt-溶出速率 K-溶出常數(shù) S-固體的表面積保持溶出介質(zhì)的體積至少是飽和溶液體積的3倍。則基本可以滿足漏槽條件。2. 表面積的影響固體制劑 勻質(zhì)的，不含輔料的片劑 非崩解型非勻質(zhì)的崩解性固體制劑 制劑的崩解過程溶解的活性成分向溶出介質(zhì)中擴散的過程 溶出過程 微粒顆粒的解聚過程 顆粒 非崩解型固體和崩解型固體溶出試驗中表面積S隨時間t的變化 s 表面積 溶出度儀的影響因素1. 晃動的影響A. 與TIR值小于2.0mm的結(jié)果相比，晃動偏差TIR值為1.02.0m

2、m，水楊酸片和潑尼松片的溶出量分別增加約5%。B. 溶出度儀設(shè)計中需注意兩個因素1.要求轉(zhuǎn)軸必須垂直；2.轉(zhuǎn)軸應有兩個固定點，儀器頂部到轉(zhuǎn)軸卡盤的距離至少應不低于卡盤至轉(zhuǎn)籃或槳葉的距離。2. 轉(zhuǎn)軸的直線度a. 轉(zhuǎn)軸的直線度是控制晃動的關(guān)鍵儀器指標，應確保其直線度b. 溶出度儀的涉及要求槳葉或籃體的頂端距卡盤的距離至少要6英寸（15.2cm）。3. 其它攪拌裝置的變動因素A. 籃桿和槳桿是精密部件，使用時應小心，這些精密儀器在實驗室的抽屜中存放時，會破壞不銹鋼槳表面的。引起彎曲和變性。應有適當?shù)闹Ъ芄┺D(zhuǎn)軸存放。B. 槳葉應沒有銳角。尖銳部分會引起渦流而不是層流。取用或放置籃時只能接觸籃的上部邊框

3、，隨著時間的增加，特別是在酸性介質(zhì)時，篩網(wǎng)的孔徑會有變化?？捎梅糯箸R檢，必要時需更換籃。4. 振動4.1振動的來源A實驗室中能產(chǎn)生振動的儀器，包括通風櫥和離心機，空調(diào)，風扇，離心機等。B.人員走動，關(guān)門，開門。C.早期水浴加熱和溶出儀連在一起，目前的溶出度儀設(shè)計都采用外置循環(huán)泵與水浴連接。4.2應將盛有溶出介質(zhì)的溶出杯的各種來源的振動水平降低到0.1mil。5. 攪拌裝置的準直度轉(zhuǎn)軸的軸線與溶出杯的中心軸線間的偏離和傾斜對溶出介質(zhì)流體動力學影響嚴重，可使溶出結(jié)果差異達到±25%。影響結(jié)果很明顯。6. 溶出杯中轉(zhuǎn)軸的中心度7. 攪拌速度規(guī)定轉(zhuǎn)速一般不得過4%，轉(zhuǎn)速的變化對溶出速率的影響

4、幾乎是線性的。8. 籃法的變動由于表面張力的作用，有時會在標準轉(zhuǎn)籃的頂部形成較大的氣泡。當旋轉(zhuǎn)的網(wǎng)籃下降進入溶出杯時，可能不會發(fā)生氣泡，但這種操作不符合USP（711）的要求。網(wǎng)籃底部的氣泡在籃體轉(zhuǎn)動后會自動消失。如果在試驗過程中產(chǎn)生氣泡或氣泡消失，分析人員應注意觀察記錄。9. 溶出介質(zhì)的影響A. 溶解氣體的釋放是影響溶出結(jié)果的主要變動因素之一。FDA的科學家們在早期就提出，如果在溶出杯、轉(zhuǎn)軸、籃或槳偶然出現(xiàn)閃亮現(xiàn)象，警示我們可能是溶解的氣體釋放，可能影響檢測結(jié)果。潑尼松片在溶出介質(zhì)不脫氣的情況下，溶出速率的相對標準偏差增加10%。溶解的氣體對溶出結(jié)果的影響程度沒有一定的規(guī)律。B. 脫氣的方式

5、 加熱，通氦氣，加熱并通氦氣，加熱并超聲，加熱并抽真空，超聲并抽真空，超聲。研究結(jié)論顯示加熱處理并通氦氣是效果最好的脫氣方式。經(jīng)典的煮沸技術(shù)可以將飽和溶解氧降低55%。C. 介質(zhì)的體積的影響；緩釋遲釋制劑需回補，應有防止溶媒揮發(fā)的裝置。D. 溫度的影響10.吸附在收集供試品前，讓足夠多的樣本溶液通過濾器，是吸附點飽和，這樣過濾后溶液中的藥物沒有損失。應選擇吸附性質(zhì)已知的過濾器。 溶出度試驗方法的建立和驗證1. 初步評估1.1過濾的兼容性過濾的作用是除去未溶解的制劑及輔料，如果不過濾樣品會繼續(xù)在溶劑中溶出，要求取樣后立即過濾。過濾器的選擇：1.考慮孔徑的大小，從0.20 to 70 µ

6、m均可，如果樣品的粒徑較小的話，可以調(diào)整使用孔徑更小的濾膜。濾膜的兼容性：濾膜的吸收：濾膜的回收率，濾膜上樣品的損失量和樣品溶液的濃度有關(guān)，應考慮不同濃度下濾膜的吸收。濾膜對藥物的吸附有飽和性，可以采用棄去初濾液的方式收集樣品。1. 濾膜應提前用溶出介質(zhì)潤濕。2. 考慮濾膜中的提取物干擾樣品的測定，可以采用比較過濾液和未過濾液的樣品。3. 濾膜孔徑的選擇應考慮需過濾的體積和粒徑，使用大粒徑的濾膜過濾少量樣品會引起樣品的損失，使用粒徑小的濾膜會增大壓力和引起濾膜堵塞。4. 采用對照品溶液與過濾后對照品溶液；供試品溶液與過濾后供試品溶液進行比較過濾的影響。1.2在不同介質(zhì)的溶解性和穩(wěn)定性1.2.1

7、藥物兩個重要的性質(zhì)，一個為溶解性以及在特定pH下的穩(wěn)定性。選擇溶出介質(zhì)組成時，應考察緩沖鹽、pH值以及表面活性劑對藥物溶解性和穩(wěn)定性的影響。A建立溶出度方法時，應使其滿足漏槽條件，B不建議使用水相-有機相混合溶劑，但經(jīng)過相關(guān)驗證該類溶出介質(zhì)亦可接受。C，純化水作為溶出介質(zhì)，并不理想，首先，水質(zhì)決定于水源，pH不可控；其次，pH值的變化可能發(fā)生在日間，甚至在試驗過程中受藥物原輔料的影響發(fā)生改變，使用于溶出速率不受溶出介質(zhì)影響的藥物。D 口服劑型的溶出特點應在1.2-6.8的pH范圍內(nèi)，稀鹽酸、緩沖鹽（磷酸鹽和醋酸鹽、水)進行考察（緩釋制劑為1.2-7.5）。還應考察緩沖鹽及酸濃度對溶解性等的影響

8、。E.溶出介質(zhì)中個別含有一定比例的表面活性劑(十二烷基硫酸鈉，聚山梨酯)以增加溶解性，表面活性劑的使用和濃度，應在多個濃度水平進行考察，一般應在其臨界膠束濃度之上，常見的表面活性劑的濃度見下表：Table 1. Commonly Used Surfactants with Critical Micelle ConcentrationsSurfactantCMC(% wt/volume)ReferenceAnionicSodium dodecyl sulfate (SDS), Sodium lauryl sulfate (SLS)0.18%0.23%(24)Taurocholic acid so

9、dium salt0.2%(3)Cholic acid sodium salt0.16%(3)Desoxycholic acid sodium salt0.12%(3)CationicCetyltrimethyl ammonium bromide (CTAB, Hexadecyltrimethylammonium bromide)0.033%0.036%(0.921.0 mM)(5,6)Benzethonium chloride (Hyamine 1622)0.18% (4 mM)(2)NonionicPolysorbate 20 (Polyoxyethylene (20) sorb

10、itan monolaurate, Tween 20)0.07%0.09%(3,7)Polysorbate 80 (Polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate, Tween 80)0.02%0.08%(3,7)Caprylocaproyl polyoxyl-8 glycerides (Labrasol)0.01%(4)Polyoxyl 35 castor oil (Cremophor EL)0.02%(8)Polyoxyethylene 23 lauryl ether (Brij 35)0.013%(9)Octoxinol (Trito

11、n X-100)0.01%0.03%(3,10)ZwitterionLauryldimethylamine N-oxide (LDAO)0.023%(11)在使用表面活性劑時需關(guān)注其級別和純度，不同來源的吐溫80可能影響HPLC測定時的系統(tǒng)適用性。在鉀鹽0.5M和SDS合用時，會有沉淀產(chǎn)生。溶出介質(zhì)和裝置的選擇可參考FDA數(shù)據(jù)庫中的溶出方法：FDA. Recommended dissolution methods. /scripts/cder/dissolution/index.cfm. 1.3體積和溶媒根據(jù)溶出度測定

12、法（711），當膠囊或糖膠片的溶出度因明膠交聯(lián)引起檢查結(jié)果不符合規(guī)定時，可在溶出介質(zhì)中加入適量的酶，見膠囊溶出度測試及相關(guān)質(zhì)量屬性（1094）.在溶出介質(zhì)的選擇過程中，需注意樣品在測定過程中應穩(wěn)定。在某些情況下可在溶出介質(zhì)中加入抗氧劑等，如果樣品很易降解，監(jiān)控降解雜質(zhì)或是同時監(jiān)控制劑是合適的。采用原位光譜技術(shù)優(yōu)于HPLC法。藥典中的籃法和槳法一般采用溶出介質(zhì)為500-1000ml，個別情況下可以采用2-4L；往復筒法（裝置3），流通池法要求較低量的溶出介質(zhì)100-200ml。二，方法開發(fā)2.METHOD DEVELOPMENT1. METHOD DEVELOPMENT2.1 Deaeratio

13、n 2.2 Sinkers 2.3 Agitation 2.4 Study Design2.4.1 Time Points 2.4.2 Observations 2.4.3 Sampling 2.4.4 Cleaning2.5 Data Handling 2.6 Dissolution Procedure Assessment2. ANALYTICAL FINISH3.1 Sample Processing 3.2 Filters 3.3 Centrifugation 3.4 Analytica

14、l Procedure 3.5 Spectrophotometric Analysis 3.6 HPLC3.4. AUTOMATION4.1 Medium Preparation 4.2 Sample Introduction and Timing 4.3 Sampling and Filtration 4.4 Cleaning 4.5 Operating Software and Computation of Results 4.6 Common Deviations from the Compendia Procedur

15、es That May Require Validation3 方法驗證3.1專屬性/空白干擾應驗證輔料、其它活性成分及降解產(chǎn)物對測定結(jié)果無顯著干擾，空白包括除活性成分之外的輔料和包衣（還有油墨、沉降藍及膠囊殼），空白干擾的測定可稱取空白樣品的混合粉末并溶解或 分散在溶出介質(zhì)中，空白干擾不得過2%。對于緩釋制劑，空白干擾試驗使用空白制劑優(yōu)于混合粉末，因空白制劑比混合粉末更接近藥品對各輔料的釋放過程。如空白輔料干擾大于2%，為避免干擾必須對方法進行改進：選擇其它波長；使用更長的波長以扣除基線；使用HPLC法。3.2線性范圍應配制藥物不同濃度的溶液，其濃度范圍應涵蓋藥物釋放時的最低和最高濃度。對照

16、溶液配制時，可使用有機溶劑以提高藥物溶解性，待測溶液中有機溶劑不得過5%，否則應進行驗證。3.3準確度/回收率準確度通常需制備不同的樣品，應包含藥物及制劑中其它所有成分（如輔料、包衣材料及膠囊殼），其濃度范圍應涵蓋釋放過程中可能出現(xiàn)的最低和最高濃度。取對應量的對照貯備溶液而非藥物粉末置溶出杯中。測得的回收率應在加入量的95%105%。制備多個濃度梯度的溶液可有助于試驗。遲釋制劑在檢查酸中釋放量時存在特殊情況。不高于10%的限度應經(jīng)過驗證。3.4精密度試驗重復性是指對對照溶液或樣品溶液進行重復測定。中間精密度：盡可能使用含量均勻度良好的藥品進行測定，如無法獲得，則可使用空白片和活性藥物成分測定中

17、間精密度。至少兩個人員進行操作，分別配制不同的對照品溶液和溶出介質(zhì)。通常操作人員應使用不同的溶出度儀，分光光度計或高效液相色譜儀。兩組同濃度溶出度測定結(jié)果的平均值之間的應符合以下規(guī)定，溶出度低于85%的時間點，絕對誤差應不高于10%，溶出度高于85%的時間點，絕對誤差應不高于5%。3.5對照品和樣品溶液的穩(wěn)定性 對照溶液和供試溶液穩(wěn)定性可接受的限度為98-102%。3.6溶出曲線的制備與原研藥溶出曲線比較，采用四個pH范圍的溶出介質(zhì)，繪制溶出曲線生物等效性和溶出特性在FDA文件中發(fā)現(xiàn)的生物不等效的藥品記錄中，有80%的產(chǎn)品溶出度差。一個活性成分的溶出度特性并不表示其溶出結(jié)果與藥品的生物利用度之

18、間有嚴格的相關(guān)性。比如一個快速溶解的藥物，可能其溶出度結(jié)果和生物利用度不具有相關(guān)性。只有當溶出速率與人體吸收速率相當或低于人體吸收速率時，溶出速率才能成為限速步驟。只有在這種情況下，溶出結(jié)果才與生物利用度之間有明確的秩序相關(guān)性。溶出度試驗是藥品研發(fā)和批間質(zhì)量控制的一種重要且很有價值的工具。FDA指導原則：口服固體速釋制劑豁免體內(nèi)生物利用度和生物等效性研究。人體生物等效性試驗豁免指導原則（國家食品藥品監(jiān)督管理局）二、基于BCS（生物藥劑分類系統(tǒng)）的生物等效豁免根據(jù)BCS分類系統(tǒng)，藥品被分為以下四類：第一類：高溶解性、高滲透性(High Solubility- High Permeability)

19、第二類：低溶解性、高滲透性(Low Solubility-High Permeability)第三類：高溶解性、低滲透性(High Solubility-Low Permeability)第四類：低溶解性、低滲透性(Low Solubility-Low Permeability)當口服固體常釋制劑在體內(nèi)的溶出相對于胃排空時間快或非?？?，并且具有很高的水溶性和腸道滲透性時，藥物的吸收速率和吸收程度就不會依賴于藥物的溶出時間或在胃腸道的通過時間。因此，在這種情況下，對于BCS分類1類和3類的藥物，只要處方中的其他輔料成分不顯著影響API的吸收，則不必證明該藥物在體內(nèi)生物等效的可能性，即生物等效性豁

20、免。（一）對于BCS 1類的藥物需要證明以下幾點：1.藥物具有高溶解性；2.藥物具有高滲透性；3.快速溶出和相似性的數(shù)據(jù)以及不含有影響主藥成分吸收速率和吸收程度的輔料。（二）對于BCS 3類的藥物需要證明以下幾點：1.藥物具有高溶解性；2.制劑具有非常快速的溶出；3.放大生產(chǎn)和批準后變更的制劑處方完全相同。（三）對于處方相同，但規(guī)格不同的同種樣品，高劑量規(guī)格已做過BE試驗的，低劑量規(guī)格可以免做BE試驗。（四）生物等效豁免申請的其他影響因素當一個口服固體常釋制劑申請基于BCS分類的生物等效性豁免時，應注意以下因素可能影響生物等效豁免：1.輔料BCS1類藥物：輔料有時候可能會影響藥物的吸收速率和吸收程度。一般來說使用國家食品藥品監(jiān)督管理總局