微生物知識(shí)總結(jié)

1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)1、培養(yǎng)基的種類及用途：標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多菌種分離、鑒定、計(jì)數(shù)半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少菌種保存液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)、連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)合成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)半合成培養(yǎng)基部分天然物質(zhì)和部分化學(xué)試劑配制而成兼有天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)目的用途加富培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)僅適合一種或一類微生物能使某種微生物的生長(zhǎng)、繁殖比其他微生物更加迅速、逐漸淘汰其他微生物鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別選擇培養(yǎng)基添加(或缺少)某種化學(xué)成分菌種的分離2、培養(yǎng)基中

2、的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：營(yíng)養(yǎng)要素含義作用主要來(lái)源碳源凡能提供所需碳元素的物質(zhì)構(gòu)成生物體細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無(wú)機(jī)化合物：CO2、NaHCO3；有機(jī)化合物：糖類、脂肪酸、花生餅粉、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無(wú)機(jī)化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽；有機(jī)化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)必不可少的微量有機(jī)物酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內(nèi)含量很高，在低等生物體內(nèi)含量更高不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定 無(wú)機(jī)鹽為微生物提供除碳、氮元素以外的各種重要元素，包括某些大量元素細(xì)胞內(nèi)的組成成分，生理

3、調(diào)節(jié)物質(zhì)，某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑 3、培養(yǎng)基的配置原則：(1)目的要明確(根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等)，如培養(yǎng)基可由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成，生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)，而分類、鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì)。(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：各種微生物適宜生長(zhǎng)的pH范圍不同，如細(xì)菌、放線菌和真菌的最適pH分別為：6.57.5、7.58.5和5.06.0。4、滅菌與消毒：項(xiàng)目概念常用方法應(yīng)用的范圍消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體上絕大多數(shù)微生物(包括病原微生物和有害微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞)煮沸消毒法：在100 煮沸5

4、6 min一般物品巴氏消毒法：7075 煮30 min或在80 煮15 min一些不耐高溫的液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等紫外線消毒法：30 W紫外燈照射30 min接種室項(xiàng)目概念常用方法應(yīng)用的范圍滅菌使用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)方法使物體內(nèi)外所有的微生物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁殖能力灼燒滅菌：酒精燈火焰接種工具的滅菌干熱滅菌：160170 下滅菌12 h玻璃器皿、金屬工具的滅菌高壓蒸汽滅菌：121 條件下，滅菌1530 min培養(yǎng)基及容器滅菌5、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制過(guò)程？答：配制培養(yǎng)液調(diào)節(jié)PH分裝包扎滅菌擱置斜面（擱置斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管總長(zhǎng)的1/2）【問(wèn)題與探究】（1）培養(yǎng)基滅菌

5、后，為什么需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來(lái)擱置斜面或倒平板？你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？【提示】瓊脂的凝固點(diǎn)為40 ，溫度太高易使培養(yǎng)皿破裂，低于40 ，培養(yǎng)基已凝固，倒不出，所以培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻到50 左右時(shí)才能用來(lái)倒平板，可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的試管，感覺(jué)試管的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)就可以進(jìn)行倒平板了。（2）為什么需要使試管口通過(guò)火焰？【提示】通過(guò)灼燒滅菌，防止試管口的微生物污染培養(yǎng)基。（3）為了能徹底滅菌，在操作過(guò)程中應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？【提示】使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，加壓之前一定要把原先的空氣排盡，注意恒溫滅菌，同時(shí)要注意高壓蒸汽滅菌鍋的壓力(100 kPa)、溫度(121 )和滅菌

6、時(shí)間(20 min)。6、無(wú)菌操作和接種技術(shù)(1)接種概念：在_無(wú) 菌 條件下將微生物接入 培養(yǎng)基_的操作過(guò)程。工具：玻璃刮鏟、接種針和接種環(huán)。方法：穿刺接種、斜面劃線接種和平板劃線接種、涂抹平板等。（2）無(wú)菌操作微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵培養(yǎng)微生物用的試管、培養(yǎng)皿和微生物培養(yǎng)基等，在接種之前都需要 滅菌_。通常接種操作要在_酒精燈火焰_的附近進(jìn)行?！鞠胍幌搿?在微生物的培養(yǎng)過(guò)程中為什么要進(jìn)行無(wú)菌操作？提示：無(wú)菌操作的目的是防止受到空氣中的雜菌污染。7、微生物的分離（1）原理：根據(jù)微生物對(duì)_營(yíng)養(yǎng)成分、氧氣、pH等要求的不同，通過(guò)只提供目的微生物生長(zhǎng)的必需條件，或加入某些抑制劑使非目的微生物不能生長(zhǎng)，

7、從而達(dá)到 選擇分離 微生物的目的。(2)方法據(jù)菌落形態(tài)特征初步分離涂抹平板法常用方法平板分離法平板劃線法分類目的：在培養(yǎng)基上得到目的微生物的 單個(gè) 菌落【歸納】無(wú)菌技術(shù)的具體內(nèi)容(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。(3)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。(4)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸。（5）在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，無(wú)菌技術(shù)的核心是防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。8、平板分離法原理：大多數(shù)細(xì)菌、許多真菌和單細(xì)胞藻類能在固體培養(yǎng)基上形成孤立的菌落。平板分離法能將單個(gè)微

8、生物分離和固定在固體培養(yǎng)基表面或里面，每個(gè)孤立的活微生物體經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)、繁殖均可形成便于移植的菌落。常用培養(yǎng)基：最常用的分離、培養(yǎng)微生物的固體培養(yǎng)基是瓊脂固體培養(yǎng)基。.方法：(1)涂抹平板法：分離材料進(jìn)行10倍系列稀釋，取一定稀釋度樣品倒入預(yù)先準(zhǔn)備好的瓊脂平板，用無(wú)菌玻璃刮鏟將樣品涂布均勻，細(xì)菌菌落常僅在平板表面生長(zhǎng)。(2)混合平板法：分離材料進(jìn)行10倍系列稀釋，取一定稀釋度樣品與溶化的瓊脂混合，將與樣品混合的瓊脂倒入無(wú)菌平皿，細(xì)菌菌落出現(xiàn)在平板表面及內(nèi)部。(3)平板劃線法：有扇形劃線、連續(xù)劃線、方格劃線等。4.目的：通過(guò)采用各種平板分離法在培養(yǎng)基上得到目的微生物的單個(gè)菌落。(1)滅菌后的接種環(huán)須

9、冷卻后再挑取菌種，否則會(huì)殺死菌種。(2)整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。(3)劃線時(shí)用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大使培養(yǎng)基劃破。9、菌落數(shù)目的統(tǒng)計(jì)方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1 mm2，高為0.1 mm的計(jì)數(shù)室，一個(gè)計(jì)數(shù)室又被分成25個(gè)(或16個(gè))中格，每個(gè)中格再被劃分成16個(gè)(或25個(gè))小格，每個(gè)計(jì)數(shù)室都由400個(gè)小格組成。操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)45個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均

10、數(shù)，再按計(jì)算公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。計(jì)算公式每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。操作設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無(wú)菌涂布器將菌液涂布在整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度

11、菌液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)。2.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。(3)濾膜法實(shí)例：測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目。過(guò)程：將已知體積的水過(guò)濾后，將濾膜放于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)綠色，并帶有金屬光澤可根據(jù)培養(yǎng)基上綠色的菌落數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。【特別提醒】統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的注意事項(xiàng)：一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)表示。設(shè)置對(duì)照，目的是排除實(shí)驗(yàn)組中無(wú)關(guān)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

12、的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。實(shí)驗(yàn)探究：微生物的分離【操作與實(shí)踐】微生物的分離包括樣品稀釋、劃線或涂布及培養(yǎng)三個(gè)步驟。1.稀釋用1 mL無(wú)菌吸管吸取1 mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入到盛有9 mL無(wú)菌水的大試管中，充分混勻，然后用無(wú)菌吸管從此試管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL無(wú)菌水的試管中，混合均勻，依次類推制成101、102、103、104、105、106系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。2.劃線或涂布(1)平板劃線分離法在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液在平板上劃線，常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種(如圖)。平行劃線時(shí)，每轉(zhuǎn)一個(gè)角度燒一次接種環(huán)。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿

13、蓋，做好標(biāo)記。特別提醒平板劃線法中的注意事項(xiàng) 取菌種之前及每次劃線之前都需要將接種環(huán)灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表： 取菌種之前每次劃線之前劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，使每次劃線后菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者從第二次以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。(2)涂布分離法取3個(gè)平板，底面分別用記號(hào)筆寫(xiě)上104、105和106三種稀釋度，然后用無(wú)菌吸管分別吸取相應(yīng)

14、稀釋度的稀釋液各0.1 mL，放入已標(biāo)記好的平板上，用無(wú)菌玻璃刮鏟在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，室溫下靜置510 min，使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基(如圖)。特別提醒將玻璃刮鏟末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的玻璃刮鏟在火焰上引燃。操作中一定要注意防火，不要將過(guò)熱的玻璃刮鏟放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。3.培養(yǎng)將劃線或涂布接種的平板倒置于37 培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1624 h，即可長(zhǎng)出單菌落?！締?wèn)題與探究】1.在涂布平板操作中，如何避免雜菌污染？【提示】(1)酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要適中。(2)接種環(huán)、玻璃刮鏟不能接觸任何物體。(3)接種環(huán)要