蟲草香菇多糖口服液對人SCG-7901胃癌細(xì)胞株活性的抑制機(jī)理研究

1、蟲草香菇多糖口服液對人SCG-7901胃癌細(xì)胞株活性的抑制機(jī)理研究摘要：目的 觀察蟲草香菇多糖口服液對人胃癌SCG-7901細(xì)胞株活性的作用，初步探討其作用的時效和量效關(guān)系，為該藥應(yīng)用于胃癌治療提供實驗依據(jù)。方法按照倍比稀釋原則配制8個不同濃度的培養(yǎng)藥液，作用于人胃癌SCG-7901細(xì)胞24h、48h、72h后，采用噻唑鹽（MTT）比色法測定各培養(yǎng)孔的OD值，并計算其細(xì)胞生長抑制率（IR，%）。結(jié)果 不同作用時間比較和不同濃度間比較，均具有顯著性差異，F(xiàn)=566.685，P<0.05和F=33.041，P<0.05；在作用48h-72h之間所能達(dá)到的最高抑制率為70.56%，與終濃

2、度為100µg/ml的環(huán)磷酰胺相當(dāng)。結(jié)論 低濃度的蟲草香菇多糖口服液可提高人胃癌SCG-7901細(xì)胞株的細(xì)胞活性，中、高濃度口服液則可顯著降低其細(xì)胞活性，其抑制作用存在量效和時效依賴性，最高抑制率為70.56%。關(guān)鍵詞：蟲草香菇多糖；人SCG-7901胃癌細(xì)胞；體外實驗；量效關(guān)系；時效關(guān)系據(jù)有關(guān)媒體報道，國家發(fā)明專利藥物蟲草香菇多糖口服液（專利號：.3）對多種癌癥具有較好的資料效果，本文通過體外實驗，觀察了蟲草香菇多糖口服液對人SCG-7901胃癌細(xì)胞株活性的作用，現(xiàn)總結(jié)如下。1、 實驗材料與方法1.1 .靶細(xì)胞株 人胃癌SCG-7901細(xì)胞株，為河南省生物工程技術(shù)研究中心凍存。1.

3、2 主要儀器及試劑 INCO2/108型CO2培養(yǎng)箱，德國MEMMERT公司產(chǎn)品；MK3型酶標(biāo)儀，Thermo Labsystems 公司產(chǎn)品；XD-101型倒置顯微鏡為上海精密儀器儀表有限公司產(chǎn)品；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板和24孔細(xì)胞培養(yǎng)板均為NUNC產(chǎn)品；RPMI-1640為Gibco BRL產(chǎn)品，MTT和DMSO為Sigma產(chǎn)品，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。1.3 培養(yǎng)藥液的配置與實驗分組 將蟲草香菇多糖口服液（批號20090201）按5000rpm轉(zhuǎn)速離心10min，盡取上清，高溫高壓滅局，作為儲備液，封口后4°C冰箱保存?zhèn)溆谩Ｊ褂孟扰渲贸煽诜航K濃度為0.5、1、2、4、8、16、32

4、、64µl/ml的RPMI-1640培養(yǎng)藥液，作用于細(xì)胞時分別命名為濃度1、濃度2、濃度8組，并以不加藥品的標(biāo)準(zhǔn)RPMI-1640培養(yǎng)液作為本實驗的陰性對照組，以終濃度為100µg/ml的環(huán)磷酰胺（CTX）作為本實驗的陽性對照組。1.4 噻唑鹽（MTT）比色法進(jìn)行體外細(xì)胞藥物敏感性試驗 將人胃癌SCG-7901細(xì)胞柱傳代至對數(shù)生長期后，經(jīng)胰酶-EDTA液消化，以臺盼藍(lán)拒染試驗調(diào)整細(xì)胞懸液終濃度為2×104/ml，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔200µl。置37°C 、5%CO2溫箱培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁，常規(guī)24h后，棄去板上各孔內(nèi)原有液體，再分別換上含有

5、相應(yīng)濃度藥物的藥物培養(yǎng)液200µl，于37°C 、5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每個藥物每濃度設(shè)3個平行孔。分別于作用24h、48h、72h后，小心吸去上清，每孔加入80µl新鮮RPMI1640培養(yǎng)液，再加入20µl MTT溶液（5mg/ml，即1.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄去96孔板上各孔中原有液體，每孔再加入DMSO 200µl，置搖床上低速震蕩10min，以充分溶解結(jié)晶微粒，用酶標(biāo)儀在492nm波長下測定各孔的吸光值（OD值），以不加藥的陰性對照組A492的OD值均數(shù)作為對照，重復(fù)上述實驗兩次，以驗證兩次，以驗證可重復(fù)性。細(xì)胞存活率及藥物

6、對細(xì)胞的抑制率按下式計算：細(xì)胞生長抑制率（IR，%）=（陰性對照組平均值OD值-用藥組平均OD值）÷（陰性對照組平均吸光值）×100%；1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行分析處理，資料采用均數(shù)±準(zhǔn)差進(jìn)行描述，組間比較采用析因設(shè)計方差分析和重復(fù)測量資料的方差分析，以a=0.05作為檢驗水準(zhǔn)。2 結(jié)果 不同濃度蟲草香菇多糖口服液對人胃癌SCG-7901細(xì)胞株活性及抑制率的影響，見表1及圖1、圖2。表1 蟲草香菇多糖口服液對人胃癌SCG-7901細(xì)胞株活性的作用時期OD值（mean±SD）,抑制率（IR，%）24h 48h 72h 陰

7、性對照組0.033±0.020，0.111±0.033，0.024±0.009，濃度10.035±0.028，-7.630.122±0.046，-9.910.026±0.007，-15.6濃度20.037±0.037，-13.000.140±0.065，-26.100.031±0.012，-31.3濃度30.031±0.026,5.340.096±0.047,13.290.022±0.013,15.00濃度40.028±0.010,14.500.091±0

8、.083,18.470.017±0.004,23.40濃度50.025±0.031,24.430.075±0.033,32.430.015±0.011,35.6濃度60.022±0.018,33.590.064±0.054,42.120.014±0.008,66.67濃度70.020±0.019,38.930.048±0.028,56.530.013±0.007,71.55濃度80.021±0.014,37.410.036±0.032,67.120.011±0.01

9、7,72.18陰性對照組0.020±0.016,40.460.035±0.038,68.920.014±0.009,69.65注：不同作用時間的比較：F=566.685，P<0.05；不同濃度間的比較；F=33.041，P<0.05。圖 1 不同濃度口服液作用效果圖2 口服液不同作用時間后的抑制率3 討論胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，每年約有64萬人因胃癌死亡，居癌癥死因的第二位，外科手術(shù)的其治愈率不到30%，嚴(yán)重威脅著我國人民的生命健康。中醫(yī)藥對胃癌的治療，在緩解臨床癥狀，配合手術(shù)治療，減輕放化療的毒副反應(yīng)，提高治療有效率，延長生存時間等方面

10、具有很大的優(yōu)勢。因而，抗癌中藥的研究與開發(fā)，一直是中醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點。 蟲草香菇多糖口服液由蟲草、香菇、胡蘿卜、山藥等藥材的提取物組成，方中蟲草為我國名貴中藥，可產(chǎn)生蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖及SOD等多種活性物質(zhì)，其中蟲草素具有公認(rèn)的抗腫瘤作用，可在體內(nèi)試驗及體外通過抑制RNA、DNA、蛋白質(zhì)的合成，降低c-myc表達(dá)，增強(qiáng)放療及化療的敏感性，增強(qiáng)NK細(xì)胞活性等多個方面發(fā)揮作用。香菇多糖（EGb）在體內(nèi)、體外對多種腫瘤細(xì)胞均有良好抗腫瘤活性和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用，并呈劑量依賴性。-胡蘿卜素可以抑制乳腺癌、結(jié)腸癌、白血病、黑色素瘤以及前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞的增殖，并能通過多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋

11、亡。山藥的多糖同樣具有調(diào)節(jié)免疫和抗腫瘤作用。上藥合用，不但從各個組分上可以提示其具有潛在的抗腫瘤作用，更通過其共同的免疫調(diào)節(jié)作用而可能對在體的腫瘤具有更好的治療作用。 本研究表明，在72h內(nèi)，低濃度（濃度1、濃度2）的蟲草香菇多糖口服液可提高人胃癌SCG-7901細(xì)胞株的細(xì)胞活性；而中、高濃度（濃度3至濃度8）的口服液可顯著降低其細(xì)胞活性；在中、高濃度口服液作用下，藥物在24h、48h、72h均能抑制人胃癌SCG-7901細(xì)胞株的細(xì)胞活性，并顯示出一定的劑量依賴關(guān)系和實效依賴關(guān)系，即隨著藥物濃度的增高和作用的延長，其抑制率越高；在作用72h后，在濃度5至濃度8之間都達(dá)到最高抑制率，最高抑制率為

12、70.56%，且以較高濃度的口服液，較先達(dá)到最高抑制率，但組間無顯著性統(tǒng)計學(xué)差異。人而提示，本藥對胃癌細(xì)胞生長和增殖的影響，可能存在雙向作用，但高濃度的本藥對胃癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的活性抑制作用。在臨床使用本藥治療胃癌時，應(yīng)當(dāng)適當(dāng)使用較高濃度的藥物。同時建議，專利持有者和有關(guān)學(xué)者應(yīng)對本藥的作用機(jī)理進(jìn)行進(jìn)一步的研究，以便為臨床應(yīng)用提供更可靠的依據(jù)。參考文獻(xiàn)【1】 徐飚，王建明，胃癌流行病學(xué)研究j華腫瘤防治雜癥，2006.13（1）1-7【2】 Hohenberger P Gretschel S Gastric Cancer j Lancet ,2003,362(9380):305-315【3】 孫大志，徐晶鈺，魏品康，胃癌中醫(yī)基礎(chǔ)實驗研究現(xiàn)狀j 云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010,33（3）：65-68【4】 丁向萍，馬力，蟲草素抗腫瘤機(jī)制