食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)——食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)

1、GB 4789.152010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的計(jì)數(shù)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)。設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：2.12.22.32.42.52.62.8冰箱：2 5 。恒溫培養(yǎng)箱： 28 ±1 。均質(zhì)器。恒溫振蕩器。顯微鏡：10×100×。電子天平：感量 0.1 g。無菌錐形瓶:容量 500 mL、250 mL。無菌廣口瓶：500 mL。無菌吸管：1 mL(具 0.01 mL 刻度)、10 mL(具 0.1

2、 mL 刻度)。2.10 無菌平皿：直徑 90 mm。2.11 無菌試管: 10 mm×75 mm。2.12 無菌牛皮紙袋、塑料袋。培養(yǎng)基和試劑馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.1。孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.2。4檢驗(yàn)程序霉菌和酵母計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1。122.72.933.13.2GB 4789.152010檢樣25g（mL）樣品+ 225mL 無菌蒸餾水，均質(zhì)10 倍系列稀釋選擇 2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取 1mL 分別加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)每皿中加入 15mL20mL 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基28±15d菌落計(jì)數(shù)報(bào)告圖 1 霉

3、菌和酵母計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序55.1操作步驟樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品至盛有 225 mL 滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為 1:10稀釋液。或放入盛有 225 mL 無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 2min，制成 1:10 的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品至盛有 225 mL 無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。取 1 mL 1:10 稀釋液注入含有 9 mL 無菌水的試管中, 另?yè)Q一支 1 mL 無菌吸管反復(fù)吹吸,此液為1:100 稀釋液。按 5.1.3 操作程序，制備 10 倍

4、系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次 1 mL 無菌吸管。根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取 1 mL 樣品勻液于 2 個(gè)無菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別取 1 mL樣品稀釋液加入 2 個(gè)無菌平皿作空白對(duì)照。及時(shí)將 15 mL20 mL 冷卻至 46 的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于46±1恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。5.2培養(yǎng)25.1.15.1.25.1.35.1.45.1.55.1.6GB 4789.152010待瓊脂凝固后，將平板倒置，2

5、8±1培養(yǎng) 5d，觀察并記錄。5.3菌落計(jì)數(shù)肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colonyforming units，CFU）表示。選取菌落數(shù)在 10 CFU150 CFU 的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。結(jié)果與報(bào)告計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有平板上菌落數(shù)均大于 150 CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有平板上菌落數(shù)均小于 10 CFU，則應(yīng)按稀

6、釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度平板均無菌落生長(zhǎng)，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算；如為原液，則以小于 1計(jì)數(shù)。6.2報(bào)告菌落數(shù)在 100 以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。菌落數(shù)大于或等于 100 時(shí)，前 3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用 10 的指數(shù)形式來表示，此時(shí)也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。稱重取樣以 CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或酵母數(shù)。366.16.1.26.1.36.1.46.2.16.2.26.2.3GB 47

7、89.152010附錄 A(規(guī)范性附錄)培養(yǎng)基和試劑A.1A.1.1馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂成分馬鈴薯(去皮切塊)葡萄糖瓊脂氯霉素蒸餾水300 g20.0 g20.0 g0.1 g1000 mLA.1.2 制法將馬鈴薯去皮切塊，加 1000mL 蒸餾水，煮沸 10 min20 min。用紗布過濾，補(bǔ)加蒸餾水至 1000 mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121 滅菌 20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中A.2A.2.1孟加拉紅培養(yǎng)基成分蛋白胨葡萄糖磷酸二氫鉀硫酸鎂（無水）瓊脂孟加拉紅氯霉素蒸餾水5.0 g10.0 g1.0 g0.5 g20.0 g0.033 g0.1

8、 g1000 mLA.2.2 制法上述各成分加入蒸餾水中，加熱溶化，補(bǔ)足蒸餾水至 1000 mL，分裝后，121滅菌 20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。4GB 4789.152010附錄 B(資料性附錄)霉菌直接鏡檢計(jì)數(shù)法常用的為郝氏霉菌計(jì)測(cè)法，本方法適用于番茄醬罐頭。B.1B.1.1B.1.2B.1.3B.1.4B.1.5設(shè)備和材料折光儀。顯微鏡。郝氏計(jì)測(cè)玻片：具有標(biāo)準(zhǔn)計(jì)測(cè)室的特制玻片。蓋玻片。測(cè)微器：具標(biāo)準(zhǔn)刻度的玻片。B.2操作步驟檢樣的制備：取定量檢樣,加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為 1.34471.3460（即濃度為 7.9%8.8%）備用。顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野的校正：將顯微鏡按放大率 90125 倍調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)視野，使其直徑為 1.382 mm。涂片：洗凈郝氏計(jì)測(cè)玻片，將制好的標(biāo)準(zhǔn)液，用玻璃棒均勻的攤布于計(jì)測(cè)室，以備觀察。觀測(cè)：將制好之載玻片放于顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野下進(jìn)行霉菌觀測(cè)，一般每一檢樣觀察 50 個(gè)視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進(jìn)行觀察。B.2.5 結(jié)果與計(jì)算：在標(biāo)準(zhǔn)視野下