腎盂輸尿管癌細(xì)胞增殖與凋亡的相關(guān)性

1、腎盂輸尿管癌細(xì)胞增殖與凋亡的相關(guān)性    【摘要】  目的 探討Ki?67和凋亡(Apoptosis)在腎盂輸尿管癌中的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞分級(jí)、病理分期及預(yù)后的關(guān)系。方法 采用SABC法和TUNEL法對(duì)34例腎盂輸尿管癌行Ki?67和凋亡檢測(cè)。結(jié)果 Ki?67和凋亡在腫瘤細(xì)胞分級(jí)間存在顯著差異，Ki?67 index：G2與G1比較P<0.05，G3與G2比較P<0.05，G3與G1比較P<0.01；Apoptosis index：G2與G1比較P<0.05，G3與G2比較P<0.05，G3與G1比較P<0.

2、01。Ki?67和凋亡在腫瘤病理分期的T3與T1及T2與T1之間有顯著差異，T2與T1比較P<0.05，T3與T1比較P<0.01，但T3與T2比較P>0.05；Ki?67 index以20%為界分為二組，Apoptosis index以3%為界分為二組，組間生存率有顯著差異(P<0.05)。Ki?67在腎盂輸尿管癌中的表達(dá)與凋亡一致。結(jié)論 腎盂輸尿管癌細(xì)胞增殖與凋亡密切相關(guān)；凋亡可作為臨床判斷腎盂輸尿管癌惡性程度、病理分期、細(xì)胞分級(jí)以及預(yù)后的一種客觀量化指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】  Ki?67凋亡腎盂輸尿管癌The relationship between prol

3、iferation and apoptosis of pelvic ureteral carcinomaABSTRACT: Objective  To study the expression of Ki?67 and apoptosis in pelvic ureteral carcinoma and their relationship with the grading, staging and prognosis of tumor. Methods  SABC and TUNEL methods were used to examine the expression

4、of Ki?67 and apoptosis in 34 cases of pelic ureteral carcinoma. Results  Significant difference was present between G2 and G1, G3 and G2 and G3 and G1 of tumer cell in expression of Ki?67 and apoptosis, and the P value was less than 0.05, 0.05 and 0.01 respectively in Ki?67 index. While in apop

5、tosis index, the value of P was less than 0.05, 0.05 and 0.01 respectively. In all the stages of tumor cell, significant difference was found between T3 and T1, and T2 and T1 in expression of Ki?67 and apoptosis tumor cell (P<0.01, P<0.05), but there was no significant difference between T3 an

6、d T2 (P>0.05). Ki?67 index was divided into two groups with 20% as the line of demarcation. Apoptosis index was also divided into two groups with 3% as the line of demarcation. And significant difference was present between different groups in survival rate (P<0.05). The expression of Ki?67 in

7、 pelnic ureteral carcinoma was consistant with apoptoins of tumor cell. Conclusion  Significant association was present between proliferation and apoptoins in pelvic ureteral carcinoma; and apoptosis may play an important role in clinical evaluation of malignant degree, pathological staging, gr

8、ading, and prognosis of pelinc ureteral carcinoma.KEY WORDS: Ki?67; apoptosis; pelvic ureteral carcinoma細(xì)胞的過(guò)度增殖以及凋亡過(guò)程的抑制在腫瘤的發(fā)展過(guò)程中起重要作用1。人類細(xì)胞核增殖抗原(Ki?67)表達(dá)于細(xì)胞周期G0期以外(G1、S、G2、M期)的各個(gè)階段，與細(xì)胞增殖關(guān)系密切2，是反映細(xì)胞增殖程度較客觀的指標(biāo)。本文采用SABC免疫組化法和TUNEL法研究了34例腎盂輸尿管癌手術(shù)切除標(biāo)本Ki?67和凋亡的表達(dá)情況，并探討腎盂輸尿管癌細(xì)胞增殖與凋亡的關(guān)系及意義。1  資料與方法1.1

9、  臨床資料  收集我院1982年3月-1994年5月手術(shù)治療腎盂輸尿管癌34例。其中，腎盂癌12例，輸尿管癌11例，腎盂合并輸尿管癌6例，輸尿管癌合并膀胱癌4例，腎盂合并輸尿管膀胱癌1例。男19例，女15例，年齡21-78歲，平均61.5歲。左側(cè)20例，右側(cè)14例。腫瘤細(xì)胞病理分級(jí)：G1 6例，G2 17例，G3 11例。病理分期：T1 10例，T2 14例，T3 8例，T4 2例。隨訪時(shí)間5個(gè)月-11年。因癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移死亡者17例。1.2  試劑及檢測(cè)方法  Ki?67(150)單克隆抗體、ABC試劑盒由Zymed公司提供，凋亡檢測(cè)試劑盒由Znfrgo

10、n company公司提供。Ki?67檢測(cè)采用SABC免疫組化法，凋亡檢測(cè)采用TUNEL法。1.3  觀察方法  光鏡觀察、高倍鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)，觀察4個(gè)視野，取其平均數(shù)作為Ki?67 index、Apoptosis index。1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  各組間比較采用非配對(duì)資料t檢驗(yàn)，生存率曲線采取Kaplam Meier法繪制、Log?Rank檢驗(yàn)。2  結(jié)果    Ki?67陽(yáng)性染色表現(xiàn)為細(xì)胞核染成棕褐色(圖1)，Ki?67 index范圍3.2%-51.2%。Apoptosis陽(yáng)性

11、表現(xiàn)為細(xì)胞核染成棕色(圖2)，Apoptosis index范圍1.125%-4.775%。Ki?67 index和Apoptosis index與腎盂輸尿管癌細(xì)胞分級(jí)、病理分期關(guān)系見表1、表2，Ki?67與Apoptosis相關(guān)關(guān)系見表3。圖1  Ki?67在腎盂癌中的表達(dá)（略）圖2  輸尿管癌中細(xì)胞的凋亡（略）表1  Ki?67 index、Apoptosis index與腎盂輸尿管癌細(xì)胞分級(jí)關(guān)系（略）Ki?67 index：G2與G1比較P<0.05，G3與G2比較P<0.05，G3與G1比較P<0.01。Apoptosis index：G

12、2與G1比較P<0.05，G3與G2比較P<0.05，G3與G1比較P<0.01表2  Ki?67 index、Apoptosis index與腎盂輸尿管癌病理分期關(guān)系（略）Ki?67 index：T2與T1比較P<0.05，T3與T1比較P<0.01，T3與T2比較P>0.05。Apoptosis index：T2與T1比較P<0.05，T3與T1比較P<0.01，T3與T2比較P>0.05 表3  Ki?67 index與Apoptosis index相關(guān)關(guān)系（略）根據(jù)ROC分析，取敏感度最高、假陽(yáng)性最低的整數(shù)，Ki

13、?67 index和Apoptosis index的確定值分別為20%和3%。Ki?67 index生存組與死亡組比較P=0.0002，Apoptosis index3和Apoptosis index3的生存率比較P<0.053  討論    1983年Gerdes等2從霍奇金瘤細(xì)胞系L428的粗核成分得到Ki?67抗體，并發(fā)現(xiàn)Ki?67在人增殖細(xì)胞的G1、S、G2、M期表達(dá)，而G0期無(wú)表達(dá)，有絲分裂后Ki?67表達(dá)迅速下降，其半衰期不到1h，Ki?67基因位于第10號(hào)染色體上。Schluter3應(yīng)用PCR技術(shù)克隆了Ki?67的全部cDNA，明確了

14、Ki?67是由分子質(zhì)量為358761u和319508u的兩條多肽鏈組成。人的正常組織中僅甲狀腺細(xì)胞、胸腺皮質(zhì)細(xì)胞及未分化的精細(xì)胞等有Ki?67的表達(dá)，而其他組織中無(wú)Ki?67的表達(dá)2。在乳癌、惡性非霍奇金病、腦星形膠質(zhì)瘤、肺癌、腎癌、輸尿管癌、前列腺癌和膀胱癌中有高水平表達(dá)4。Ki?67表達(dá)能較準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況，與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，可作為判斷腫瘤的分期、分級(jí)和預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的生物學(xué)標(biāo)記物5。凋亡(apoptosis)又稱程序性細(xì)胞死亡(pro?grammed cell death, PCD)，是一種細(xì)胞的生理性死亡。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡在許多疾病的發(fā)生，尤其是在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸

15、中起重要作用。一般認(rèn)為細(xì)胞增殖和凋亡之間的平衡失調(diào)對(duì)細(xì)胞癌變的引發(fā)、癌前細(xì)胞和癌細(xì)胞的生存、生長(zhǎng)起基本作用。劉鵬?等6采用凝膠電脈法對(duì)34例星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤的細(xì)胞增殖和凋亡進(jìn)行研究；王東等7采用TUNEL法對(duì)80例骨肉瘤的細(xì)胞增殖和凋亡進(jìn)行研究，結(jié)果均顯示：凋亡指數(shù)和增殖指數(shù)隨著腫瘤惡性程序的增加而增高，凋亡指數(shù)和增殖指數(shù)呈正相關(guān)，惡性腫瘤的細(xì)胞增殖遠(yuǎn)遠(yuǎn)活躍于細(xì)胞凋亡，與Kiberu等8對(duì)非霍奇金淋巴瘤的凋亡指數(shù)和增殖指數(shù)的相關(guān)性研究的結(jié)果一致。    有關(guān)膀胱腫瘤的細(xì)胞凋亡的報(bào)告很少。King等9的研究結(jié)果表明，膀胱癌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于癌旁正常的膀胱黏膜，膀胱癌

16、的細(xì)胞凋亡與腫瘤的分化程度以及分期分級(jí)呈正相關(guān)，即腫瘤的分期、分級(jí)越高，細(xì)胞的凋亡越多。秦白科等10的研究表明：膀胱癌的細(xì)胞凋亡與腫瘤的分期、分級(jí)呈負(fù)相關(guān)。說(shuō)明膀胱癌的細(xì)胞凋亡越少，腫瘤的分化程度越差，腫瘤越易浸潤(rùn)，預(yù)后越差。    本研究顯示：Ki?67 index和Apoptosis index與腎盂輸尿管癌的惡性程度呈正相關(guān)，隨著腎盂輸尿管癌細(xì)胞分級(jí)的增高而增高，進(jìn)一步研究顯示，Ki?67 index和Apoptosis index亦隨著腎盂輸尿管癌病理分期的增高而增高。上述結(jié)果表明，Ki?67和Apoptosis能較好地反映腎盂輸尿管癌的病理分期及細(xì)胞分級(jí)

17、情況。同時(shí)對(duì)Ki?67和Apoptosis進(jìn)行相關(guān)性分析，Ki?67和Apoptosis呈密切正相關(guān)(P<0.05)，表明在腎盂輸尿管癌，細(xì)胞的凋亡隨著細(xì)胞增殖的增加而增加，但增殖速度明顯快于凋亡速度，總體表現(xiàn)為細(xì)胞增殖，形成腫瘤，故凋亡亦可作為判斷腎盂輸尿管癌細(xì)胞增殖情況及惡性程度的一個(gè)指標(biāo)。    ROC分析顯示，Apoptosis index>3%和Ki?67 index>20%的腎盂輸尿管癌比Apoptosis index<3%和Ki?67 index<20%的腎盂輸尿管癌生存率低，提示Apoptosis index和Ki?6

18、7 index可作為評(píng)估腎盂輸尿管癌預(yù)后的一個(gè)客觀指標(biāo)。    本研究表明：Apoptosis與腎盂輸尿管癌細(xì)胞增殖密切相關(guān)，可以作為判斷腎盂輸尿管癌分期、分級(jí)及預(yù)后的客觀量化指標(biāo)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1葉任高，沈清端. 腎臟病診斷和治療學(xué) M. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 1994: 476?480.2Gerdes J, Schwab U, Lemke H, et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen as?sociated wit

19、h cell proliferation J. Int J Cancer, 1983, 31(1):13.3Schluter C, Duchrow M, wohlenberg C, et al. The cell proliferation?associated antigen protein with numerous repeated ele?ments. representing a new kind of cell cycle?maintaining pro?teins J. J Cell Biol, 1993, 123(3):513.4Nakopoulou L, Vourlakou

20、C, Zervas A, et al. The prevalence of bcl?2, P53, and Ki?67 immunoreactivity in transitional cell bladder carcinomas and their clinicopathologic correlates J. Hum Pathol, 1998, 29(2):146.5Scott RJ, Hall PA, Van Noorder S, et al. A comparison of im?munohistochemical markers of cell proliferation with exper