《微生物與免疫學(xué)》醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)-第一次實(shí)驗(yàn)

1、微生物與免疫學(xué)醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)-第一次實(shí)驗(yàn)微生物與免疫學(xué)醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)-第一次實(shí)驗(yàn)BEA Confidential. | 2 實(shí) 驗(yàn) 室 規(guī) 則1 . 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后穿上白大衣，離室時(shí)脫下反疊帶走。 只帶必要的用具，并放在遠(yuǎn)離操作的位置。2 . 保持安靜，遵守紀(jì)律，不得在實(shí)驗(yàn)室做與實(shí)驗(yàn)無(wú) 關(guān)的事情。3 . 注意安全，若出現(xiàn)問(wèn)題，應(yīng)立即報(bào)告帶課教師。 保護(hù)環(huán)境，廢物要放在指定地點(diǎn)。4 . 注意節(jié)約，愛(ài)護(hù)設(shè)備和儀器。5 . 實(shí)驗(yàn)完畢，應(yīng)清理桌面，洗手后方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。 值日同學(xué)負(fù)責(zé)濕性打掃衛(wèi)生，并關(guān)好水電門窗。BEA Confidential. | 4 BEA Confidential. | 3 【實(shí)

2、驗(yàn)內(nèi)容】 1. 直接玻片凝集反應(yīng)（ABO血型、細(xì)菌鑒定） 2.直接試管凝集反應(yīng)BEA Confidential. | 5 BEA Confidential. | 4 將顆粒性Ag如細(xì)菌、RBC或表面結(jié)合可溶性Ag的乳膠顆粒等與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。 1.直接凝集試驗(yàn) 玻片法（定性）：細(xì)菌鑒定、血型鑒定等 試管法（半定量）：肥達(dá)試驗(yàn)等 2.間接凝集試驗(yàn) 3.間接凝集抑制試驗(yàn) 4.協(xié)同凝集試驗(yàn)BEA Confidential. | 6 BEA Confidential. | 5BEA Confidential. | 7BEA Confidential. | 6BEA C

3、onfidential. | 8BEA Confidential. | 7【目的】 掌握凝集試驗(yàn)的操作方法與結(jié)果判定。BEA Confidential. | 9【目的】BEA Confidential. | 8一玻片凝集試驗(yàn)BEA Confidential. | 10一玻片凝集試BEA Confidential. | 9【原理】 玻片凝集試驗(yàn)是在玻片上將天然顆粒性抗原（如紅細(xì)胞、細(xì)菌）與相應(yīng)抗體混合，在適當(dāng)條件下，如兩者對(duì)應(yīng)便發(fā)生特異性結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的凝集物，為陽(yáng)性；如兩者不對(duì)應(yīng)，便無(wú)凝集物出現(xiàn)，為陰性。BEA Confidential. | 11【原理】BEA Confidential.

4、 | 10（一）玻片凝集反應(yīng)鑒定血型BEA Confidential. | 12BEA Confidential. | 11血型：指紅細(xì)胞膜上特異抗原的類型。 凝集原：紅細(xì)胞膜上的一些特異蛋白質(zhì)、糖蛋白、 糖脂，它們?cè)谀磻?yīng)中起抗原的作用。 凝集素：能與紅細(xì)胞膜上的凝集原起反應(yīng)的特異 抗體。ABO血型：是根據(jù)紅細(xì)胞膜上是否存在凝集原A與 凝集原B而將血液分為4種血型。不同血型的人血清 中含有不同的凝集素，但不含有對(duì)抗自身紅細(xì)胞凝 集原的凝集素。BEA Confidential. | 13血型：指紅細(xì)BEA Confidential. | 12BEA Confidential. | 14BEA

5、 Confidential. | 13【材料】1.抗體：抗A單克隆抗體、抗B單克隆抗體2.器材：三棱針、玻片、棉簽、牙簽3.消毒劑：2.5%碘酒、75%酒精BEA Confidential. | 15【材料】BEA Confidential. | 14【方法】1. 做標(biāo)記 取干凈的玻片一張，用蠟筆劃分為二，并在玻片的 上角標(biāo)明“抗A”及“抗B”。2.采指血 用碘酒、酒精消毒被檢者的無(wú)名指末端，用三棱針 刺血12滴于上述玻片，并用棉簽止血。3.加抗體 取抗A、抗B單克隆抗體于相應(yīng)區(qū)域的血標(biāo)本中，然 后用牙簽兩端分別攪拌均勻。4.觀結(jié)果 將玻片平持手中，前后左右轉(zhuǎn)動(dòng)使之混勻，置室溫 大約10分鐘，

6、觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象。抗A 抗B BEA Confidential. | 16【方法】抗ABEA Confidential. | 15抗A抗B結(jié)果A型血B型血AB型血O型血 代表陽(yáng)性結(jié)果； 代表陰性結(jié)果；【結(jié)果】BEA Confidential. | 17抗A抗B結(jié)果BEA Confidential. | 16【注意事項(xiàng)】 1.載玻片必須清潔，做好記號(hào)。 2.用牙簽兩端分別攪拌。BEA Confidential. | 18【注意事項(xiàng)】BEA Confidential. | 17（二）玻片凝集反應(yīng)鑒定細(xì)菌BEA Confidential. | 19BEA Confidential. | 18【材料】

7、1.試劑：大腸桿菌診斷血清， 大腸桿菌、變形桿菌24小時(shí)瓊脂培養(yǎng)物， 生理鹽水。2.器材：記號(hào)筆，載玻片等。BEA Confidential. | 20【材料】BEA Confidential. | 19【方法】.取清潔玻片一張，用蠟筆劃為三格，并注明號(hào)碼。 無(wú)菌操作下，用接種環(huán)于 第三格加12滴生理鹽 水 ，第一、二格內(nèi)加 大腸桿菌診斷血清12滴。123BEA Confidential. | 21【方法】12BEA Confidential. | 20.無(wú)菌操作下，用接種環(huán)取大腸桿菌培養(yǎng)物少許， 混于第三格中，再混于第一格中，將細(xì)菌與鹽水 或血清混合均勻使呈乳狀液（取菌量不可過(guò)多）， 使懸液

8、呈輕度乳濁即可。123BEA Confidential. | 22.無(wú)菌操作BEA Confidential. | 21.同法取變形桿菌培養(yǎng)物少許，于第二格內(nèi)混勻。123BEA Confidential. | 23.同法取變BEA Confidential. | 22.輕輕搖動(dòng)玻片，經(jīng)12分鐘后肉眼觀察，出現(xiàn)乳 白色凝集塊者，即為陽(yáng)性反應(yīng)；仍為乳濁液者， 即為陰性反應(yīng)。123BEA Confidential. | 24.輕輕搖動(dòng)BEA Confidential. | 23移液器的使用BEA Confidential. | 25BEA Confidential. | 24BEA Confiden

9、tial. | 26BEA Confidential. | 25【方法】1.選擇適當(dāng)?shù)囊埔浩? 不同型號(hào)的微量移液器，各有其吸取體積范圍。2.設(shè)定體積： 設(shè)定體積時(shí)，由低旋轉(zhuǎn)至高值，須先超越所欲設(shè)定值 至少三分之一轉(zhuǎn)后，再反轉(zhuǎn)至設(shè)定值；由高旋轉(zhuǎn)至低 值，則直接轉(zhuǎn)至設(shè)定值即可。 勿超過(guò)最低或最高的使用范圍。BEA Confidential. | 27【方法】BEA Confidential. | 263.吸取溶液： 套上微量移液器頭，將按鈕壓至第一檔，盡可能保持 微量移液器垂直，將微量移液器頭尖端浸入溶液，再 緩慢釋放按鈕 。釋放按鈕不可太快，以免溶液沖入吸 管柱內(nèi)而腐蝕活塞。4.釋放溶液： 將

10、微量移液器頭 與容器壁接觸，慢慢壓下按鈕至第一 檔，停一兩秒再壓至第二檔，把溶液完全壓出。BEA Confidential. | 283.吸取溶液BEA Confidential. | 27A. 保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一檔；B.微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；C.保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢慢壓下按鈕至第一檔；D. 壓至第二檔把溶液完全釋放出；E.釋放按鈕回原狀。BEA Confidential. | 29A. 保持微BEA Confidential. | 28【注意事項(xiàng)】1 ） 勿將微量移液器本體浸入溶液中。2） 吸取黏度高之試液，先將微量移液器頭尖端

11、以刀片 或剪刀將出口切大，并先行預(yù)潤(rùn)后再吸取。3） 吸取酸液或具腐蝕性溶液后，將微量移液器拆解開(kāi)， 各部位零件以蒸餾水沖洗干凈，擦干后再正確組合 回復(fù)原狀。4） 微量移液器的任何部份切勿用火燒烤，亦不可吸取 溫度高于70的溶液，避免蒸氣侵入腐蝕活塞。BEA Confidential. | 30【注意事項(xiàng)】BEA Confidential. | 295）套有微量移液器頭的微量移液器，無(wú)論微量移液器 頭中是否有溶液，均不可平放，需直立架好。6）P5000 必須使用過(guò)濾頭，過(guò)濾頭潮濕即需更換。7）若不小心使溶液進(jìn)入吸管柱內(nèi)時(shí)，應(yīng)予以拆解，將 活塞組件、吸管柱、O-ring、鐵氟龍墊等各部位以 清水沖

12、洗干凈后，再以酒精擦拭，擦干后再正確組 合回復(fù)原狀。8）定期自行以天平檢查準(zhǔn)確度，若有任何問(wèn)題請(qǐng)送廠 維修。BEA Confidential. | 315）套有微量BEA Confidential. | 30二試管凝集試驗(yàn)BEA Confidential. | 32二試管凝集試BEA Confidential. | 31【原理】 用已知的顆粒性抗原懸液與經(jīng)連續(xù)倍比稀釋的待檢血清混合，在適當(dāng)條件下反應(yīng)，觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象對(duì)血清抗體的存在做出判斷；并結(jié)合凝集程度與血清稀釋度判定血清抗體的效價(jià)，此法屬于半定量試驗(yàn)。BEA Confidential. | 33【原理】BEA Confidential.

13、| 32【材料】1.診斷菌液：傷寒沙門菌菌液2.待檢血清：傷寒沙門菌免疫血清3.生理鹽水4.U型反應(yīng)板、移液器、水浴箱等BEA Confidential. | 34【材料】BEA Confidential. | 33【方法】1.編號(hào)： 取一塊U型反應(yīng)板，選8個(gè)連續(xù)的孔，依次編號(hào)。2.加生理鹽水： 用移液器吸取生理鹽水，第一孔加0.9ml，其余每 孔各加0.5ml；3.加血清： 用移液器吸取傷寒免疫血清0.1ml，加入1號(hào)孔，并 吹吸3次，使血清與生理鹽水充分混合。BEA Confidential. | 35【方法】BEA Confidential. | 344.倍比稀釋： 從1號(hào)孔中吸取0.5

14、ml注入2號(hào)孔并混勻，以此類推 直至7號(hào)孔，再?gòu)?號(hào)孔中吸取0.5ml棄去。5.加抗原： 移液器換吸頭，吸取傷寒沙門氏菌菌液，從生理鹽 水孔開(kāi)始，每孔各加入0.5ml傷寒菌液。6.孵育： 搖勻，置于37水浴箱中18-24h后觀察結(jié)果。BEA Confidential. | 364.倍比稀釋BEA Confidential. | 351：201：401：801：1601：3201：6401：12800.9ml0.1ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlBEA Confidentia

15、l. | 371：201：BEA Confidential. | 36【結(jié)果觀察】.觀察之前切勿搖動(dòng)，以免凝集塊分散。.先觀察對(duì)照孔，此孔應(yīng)無(wú)凝集現(xiàn)象，孔內(nèi)液體仍 成混濁狀態(tài)。但如放置時(shí)間較長(zhǎng)，細(xì)菌堆于孔底 成小圓點(diǎn)狀，為陰性反應(yīng)。BEA Confidential. | 38【結(jié)果觀察】BEA Confidential. | 37.試驗(yàn)孔應(yīng)自第孔觀察起，如有凝集時(shí)則于孔底 有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物，上液 則澄清透明或不同程度混濁。 “” 管內(nèi)上液完全澄清，完全沉于孔底； “” 孔內(nèi)上液不完全澄清，稍渾濁， 凝集物大部分沉于孔底； “” 上液體較渾濁，孔底仍有明顯凝集； “” 孔內(nèi)液體混濁，僅少量凝集塊沉于孔底； “” 孔內(nèi)液體和對(duì)照孔同樣混濁，無(wú)凝集塊。BEA Confidential. | 39.試驗(yàn)孔應(yīng)BEA Confidential. | 384.記錄觀察的結(jié)果并判定凝集效價(jià)，通常以能產(chǎn)生 明顯凝集（）的血清最大稀釋倍數(shù)作為該血 清的凝集效價(jià)。 如血清的最低稀釋度（即第1管120）仍無(wú)凝集， 應(yīng)報(bào)該血清效價(jià)低于 120 。 如血清的最高稀釋度（即第7管11280）仍顯完 全凝集現(xiàn)象，應(yīng)報(bào)該血清效價(jià)高于11280。BEA Confidential