甲型H1N1流感的實(shí)驗(yàn)室診斷、課件

1、甲型H1N1流感的實(shí)驗(yàn)室診斷、報(bào)告與終末消毒湖北省疾病預(yù)防控制中心詹發(fā)先甲型H1N1流感病例的實(shí)驗(yàn)室診斷市級(jí)專家組認(rèn)為需要排查的病例應(yīng)盡快采集以下呼吸道標(biāo)本：咽拭子、鼻拭子、鼻腔吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。標(biāo)本應(yīng)置于無(wú)菌病毒采樣液，并立即用冰塊或冰排保存或置于4 （冰箱），并馬上送至實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。核 酸 檢 測(cè)基于PCR原理的核酸檢測(cè)方法是一種快速有效的甲型H1N1流感診斷方法：基于real-time RT-PCR的方法檢測(cè)新的甲型H1N1流感病毒（引物和探針序列為美國(guó)CDC設(shè)計(jì)）基于RT-PCR的方法檢測(cè)新的甲型H1N1流感病毒（引物序列為國(guó)家流感中心設(shè)計(jì)）病毒分離鑒

2、定可采用雞胚和/或MDCK細(xì)胞進(jìn)行流感病毒分離。具備相應(yīng)條件的實(shí)驗(yàn)室在收到標(biāo)本后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行病毒接種。 （因時(shí)間長(zhǎng)，不常用） 標(biāo)本送檢程序各市、州CDC指導(dǎo)縣級(jí)疾控中心采集，每標(biāo)本分成三份，一并運(yùn)送至對(duì)口的國(guó)家流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，送檢前要事先通知對(duì)口網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本必須由雙人專車運(yùn)送至對(duì)口網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，送檢時(shí)必須附上送檢單2份，送檢單中應(yīng)附加專家組意見。標(biāo)本由網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室當(dāng)班負(fù)責(zé)人接受，接收人在送檢單上簽收，其中一份留接受單位，另一份由送檢人帶回備查。各地將標(biāo)本送相應(yīng)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)，必須同時(shí)將送檢依據(jù)書面材料報(bào)省指揮部防疫組。檢測(cè)結(jié)果的反饋如市州網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果為陰性，立即將檢測(cè)結(jié)果電話報(bào)告

3、送檢單位和省指揮部，并盡快將檢測(cè)報(bào)告單傳真給送檢單位和省指揮部。如檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室只將檢測(cè)結(jié)果報(bào)省疾控中心和省指揮部。省疾控中心復(fù)核仍為陽(yáng)性時(shí)，將檢測(cè)結(jié)果報(bào)中國(guó)疾控中心，中國(guó)疾控中心確認(rèn)結(jié)果（第一例）和省疾控中心后續(xù)病例復(fù)核確認(rèn)陽(yáng)性結(jié)果由省疾控中心反饋至各相關(guān)單位和省指揮部。甲型H1N1流感病例的報(bào)告疑似或確診病例診斷后，患者所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)必須2小時(shí)內(nèi)在疾病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理系統(tǒng)上報(bào)告病例個(gè)案卡;疾病預(yù)防控制中心在突發(fā)公共衛(wèi)生事件管理系統(tǒng)上報(bào)告事件信息。報(bào)告后個(gè)案卡信息自動(dòng)推送到專病系統(tǒng)。24小時(shí)內(nèi)需在甲型H1N1流感專病系統(tǒng)上報(bào)告?zhèn)€案調(diào)查表。信息訂正和更新專病系統(tǒng)需將三級(jí)審核后的病例納

4、入專病系統(tǒng)管理，病例信息如需訂正和更新，如：疑似轉(zhuǎn)為確診或死亡或病例排除，則在專病系統(tǒng)訂正。突發(fā)網(wǎng)的重大事件進(jìn)程報(bào)告需每日更新（日?qǐng)?bào)），事件結(jié)束后要及時(shí)上報(bào)結(jié)案報(bào)告。甲型H1N1流感的終末消毒終末消毒是指?jìng)魅驹措x開有關(guān)場(chǎng)所后進(jìn)行的徹底的消毒處理，應(yīng)確保終末消毒后的場(chǎng)所及其中的各種物品不再有病原體的存在。 室內(nèi)空氣無(wú)人條件下用紫外線對(duì)空氣消毒也可以用15% 過(guò)氧乙酸7 ml/m3(即純過(guò)氧乙酸1g/ m3)熏蒸進(jìn)行消毒或0.8%過(guò)氧乙酸20 ml/m3氣溶膠消毒消毒完畢充分通風(fēng)后方可使用。衣服、被褥等紡織品可煮沸消毒10分鐘，或用有效氯為250mg/L的含氯消毒劑浸泡15分鐘；或陽(yáng)光下暴曬半天以

5、上。 病人病床、床墊、枕芯、棉被、毛毯和床單等可使用床單消毒機(jī)消毒。診療用品、物體表面可用0.2%過(guò)氧乙酸溶液或有效氯為200mg/L400mg/L的含氯消毒劑進(jìn)行浸泡、噴灑或擦洗消毒，作用15分鐘后清水沖洗并擦拭干凈。 垃圾可噴灑10g/L有效氯含氯消毒劑溶液至濕潤(rùn)保持4小時(shí)以上。 人粒細(xì)胞無(wú)形體病人粒細(xì)胞無(wú)形體病是由嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體侵染人末梢血中性粒細(xì)胞引起，以發(fā)熱伴白細(xì)胞、血小板減少和多臟器功能損害為主要臨床表現(xiàn)的蜱傳疾病。其病原體無(wú)形體為G-陰性細(xì)胞專性寄生菌。我省疑似無(wú)形體病疫情2009年1月1日至6月1日，疫情直報(bào)網(wǎng)上我省共報(bào)告疑似無(wú)形體病病例17例，其中武漢市協(xié)和醫(yī)院報(bào)告15例，

6、隨州市曾都醫(yī)院報(bào)告2例。病例分布: 河南省信陽(yáng)市2例，我省病例15例，其中隨州11例，孝感市1例，咸寧市1例，武漢市1例，黃岡市1例。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)隨州11例分布在11個(gè)不同的鄉(xiāng)鎮(zhèn)。我省報(bào)告的15例病例地區(qū)分布也無(wú)聚集性，發(fā)病時(shí)間自月31日至今，病例職業(yè)均為農(nóng)民，年齡多在40-60歲。我省病例臨床表現(xiàn)特點(diǎn)武漢市協(xié)和醫(yī)院報(bào)告的15例共同臨床特點(diǎn)包括高熱，心、肝、腎等多臟器受損，常伴隨肌張力增高，消化道癥狀如嘔吐、腹瀉等，嚴(yán)重病例可有神智意識(shí)障礙，出血，呼吸衰竭；其中6例為重癥型，表現(xiàn)為多器官功能衰竭，或出現(xiàn)繼發(fā)性感染，其中4例放棄治療自動(dòng)出院后死亡。臨床檢驗(yàn)突出特點(diǎn)為白細(xì)胞、血小板急劇下降，尿

7、常規(guī)、肝腎功能異常，肌酶譜異常。診斷性治療：患者經(jīng)由多西環(huán)素、喹諾酮等特異性針對(duì)病原體治療，大部分患者病情可得到緩解。全國(guó)和我省既往無(wú)形體病疫情2006年11月，安徽省一婦女出現(xiàn)不明原因發(fā)熱、出血。死亡后數(shù)天至兩周內(nèi)，9名密切接觸者（包括5名親屬、2名醫(yī)生、2名護(hù)士）都出現(xiàn)了發(fā)熱等癥狀。中國(guó)CDC進(jìn)行了檢測(cè)，最終確認(rèn)為無(wú)形體病。2004年至今，先后在我國(guó)浙江、江蘇、山東、以及河南等地均發(fā)生過(guò)類似安徽的疫情。2005年底，我省咸寧市發(fā)生類似疾病暴發(fā)疫情，共發(fā)病6人，死亡2例，對(duì)其中2人恢復(fù)期血清檢測(cè)確定為疑似人粒細(xì)胞無(wú)形體病例。2008年中南醫(yī)院電話報(bào)告黃岡市浠水縣1例人粒細(xì)胞無(wú)形體疑似病例，查

8、到人粒細(xì)胞內(nèi)包涵體。宿主動(dòng)物與傳播媒介動(dòng)物宿主持續(xù)感染是病原體維持自然循環(huán)的基本條件。國(guó)外報(bào)道，儲(chǔ)存宿主包括白足鼠等野鼠類。在歐洲，紅鹿、牛、山羊。國(guó)外報(bào)道，傳播媒介主要是硬蜱屬的某些種（如肩突硬蜱、篦子硬蜱等）。我國(guó)曾在黑龍江、內(nèi)蒙古及新疆等地的全溝硬蜱中檢測(cè)到嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體核酸。在我國(guó)的儲(chǔ)存宿主、媒介種類及其分布尚需做進(jìn)一步調(diào)查。人群易感性人對(duì)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體普遍易感，各年齡組均可感染發(fā)病。高危人群主要為接觸蜱等傳播媒介的人群，如疫源地（主要為森林、丘陵地區(qū)）的居民、勞動(dòng)者及旅游者等。與人粒細(xì)胞無(wú)形體病危重患者密切接觸、直接接觸病人血液等體液的醫(yī)務(wù)人員或其陪護(hù)者，如不注意防護(hù)，也有感染的

9、可能。地理分布和發(fā)病季節(jié)特點(diǎn)目前，已報(bào)道有人粒細(xì)胞無(wú)形體病的國(guó)家有美國(guó)、斯洛文尼亞、法國(guó)、英國(guó)、德國(guó)、澳大利亞、意大利及韓國(guó)等，但僅美國(guó)和斯洛文尼亞分離到病原體。根據(jù)國(guó)外研究，該病與萊姆病的地區(qū)分布相似，我國(guó)萊姆病流行區(qū)亦應(yīng)關(guān)注此病。該病全年均有發(fā)病，發(fā)病高峰為5-10月。不同國(guó)家的報(bào)道略有差異，多集中在當(dāng)?shù)仳缁顒?dòng)較為活躍的月份。臨 床 表 現(xiàn)少數(shù)病人可因嚴(yán)重的血小板減少及凝血功能異常，出現(xiàn)皮膚、肺、消化道等出血表現(xiàn)，如不及時(shí)救治，可因呼吸衰竭、急性腎衰等多臟器功能衰竭以及彌漫性血管內(nèi)凝血死亡。老年患者、免疫缺陷患者及進(jìn)行激素治療者感染本病后病情多較危重。疑似病例診斷標(biāo)準(zhǔn)流行病學(xué)史+臨床表現(xiàn)+

10、臨床檢驗(yàn)陽(yáng)性指標(biāo)發(fā)熱、頭痛、疲勞、肌痛、食欲不振、部分患者腹痛、腹瀉、咽痛。外周血象白細(xì)胞減少、血小板減少，異淋巴細(xì)胞增多。肝酶升高，ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）/ AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）輕中度增高（2-4倍）臨床診斷病例標(biāo)準(zhǔn)疑似病例+特異性臨床檢驗(yàn)/病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)之一末梢血涂片鏡檢中性粒細(xì)胞內(nèi)桑葚狀包涵體病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)：急性期血清IFA(間接免疫熒光抗體）檢測(cè)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體IgM抗體陽(yáng)性血清IFA檢測(cè)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體IgG抗體陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)室確診病例標(biāo)準(zhǔn)疑似病例/臨床診斷病例 + 病原學(xué)確診標(biāo)準(zhǔn)之一恢復(fù)期血清IFA檢測(cè)嗜吞噬無(wú)形體IgG抗體滴度較急性期有4倍及以上升高全血或血細(xì)胞標(biāo)本PCR檢測(cè)無(wú)形體特

11、異性核酸陽(yáng)性，且序列分析證實(shí)與嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的同源性達(dá)99%以上分離到病原體無(wú)形體病病例監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)病例定義：發(fā)熱高于38.5度，伴胃腸道癥狀或全身癥狀外周血白細(xì)胞降低，或 ？血小板降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶升高尿蛋白陽(yáng)性多器官功能衰竭搜索病例目前病例監(jiān)測(cè)意義：早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早治療，減少或避免重癥和死亡的發(fā)生。監(jiān)測(cè)內(nèi)容病例報(bào)告鄉(xiāng)鎮(zhèn)以上衛(wèi)生院？510月病例調(diào)查：個(gè)案調(diào)查主動(dòng)搜索：隨州、咸寧縣級(jí)以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)2009年36月病原監(jiān)測(cè)病原監(jiān)測(cè)標(biāo)本采集種類疑似病例血液: 病人血液5mLX3份（紅血球X5份、白細(xì)胞X5份、血清X5份）人粒細(xì)胞無(wú)形體病尸檢標(biāo)本:病人脾臟、肝臟各1克X3份?？梢梢吧鷦?dòng)物及狗、羊、牛、吸血蜱、不吸血蜱的脾臟、肝臟各1克X3份。密切接觸者或其他健康人群血：5mLX1份標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)血清一周內(nèi)：4