甲型H1N1流感的實驗室診斷、課件

1、甲型H1N1流感的實驗室診斷、報告與終末消毒湖北省疾病預(yù)防控制中心詹發(fā)先甲型H1N1流感病例的實驗室診斷市級專家組認為需要排查的病例應(yīng)盡快采集以下呼吸道標本：咽拭子、鼻拭子、鼻腔吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。標本應(yīng)置于無菌病毒采樣液，并立即用冰塊或冰排保存或置于4 （冰箱），并馬上送至實驗室檢測。核 酸 檢 測基于PCR原理的核酸檢測方法是一種快速有效的甲型H1N1流感診斷方法：基于real-time RT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物和探針序列為美國CDC設(shè)計）基于RT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物序列為國家流感中心設(shè)計）病毒分離鑒

2、定可采用雞胚和/或MDCK細胞進行流感病毒分離。具備相應(yīng)條件的實驗室在收到標本后24小時內(nèi)進行病毒接種。 （因時間長，不常用） 標本送檢程序各市、州CDC指導縣級疾控中心采集，每標本分成三份，一并運送至對口的國家流感網(wǎng)絡(luò)實驗室檢測，送檢前要事先通知對口網(wǎng)絡(luò)實驗室。標本必須由雙人專車運送至對口網(wǎng)絡(luò)實驗室，送檢時必須附上送檢單2份，送檢單中應(yīng)附加專家組意見。標本由網(wǎng)絡(luò)實驗室當班負責人接受，接收人在送檢單上簽收，其中一份留接受單位，另一份由送檢人帶回備查。各地將標本送相應(yīng)網(wǎng)絡(luò)實驗室檢測時，必須同時將送檢依據(jù)書面材料報省指揮部防疫組。檢測結(jié)果的反饋如市州網(wǎng)絡(luò)實驗室檢測結(jié)果為陰性，立即將檢測結(jié)果電話報告

3、送檢單位和省指揮部，并盡快將檢測報告單傳真給送檢單位和省指揮部。如檢測結(jié)果為陽性，網(wǎng)絡(luò)實驗室只將檢測結(jié)果報省疾控中心和省指揮部。省疾控中心復核仍為陽性時，將檢測結(jié)果報中國疾控中心，中國疾控中心確認結(jié)果（第一例）和省疾控中心后續(xù)病例復核確認陽性結(jié)果由省疾控中心反饋至各相關(guān)單位和省指揮部。甲型H1N1流感病例的報告疑似或確診病例診斷后，患者所在醫(yī)療機構(gòu)必須2小時內(nèi)在疾病監(jiān)測信息報告管理系統(tǒng)上報告病例個案卡;疾病預(yù)防控制中心在突發(fā)公共衛(wèi)生事件管理系統(tǒng)上報告事件信息。報告后個案卡信息自動推送到專病系統(tǒng)。24小時內(nèi)需在甲型H1N1流感專病系統(tǒng)上報告?zhèn)€案調(diào)查表。信息訂正和更新專病系統(tǒng)需將三級審核后的病例納

4、入專病系統(tǒng)管理，病例信息如需訂正和更新，如：疑似轉(zhuǎn)為確診或死亡或病例排除，則在專病系統(tǒng)訂正。突發(fā)網(wǎng)的重大事件進程報告需每日更新（日報），事件結(jié)束后要及時上報結(jié)案報告。甲型H1N1流感的終末消毒終末消毒是指傳染源離開有關(guān)場所后進行的徹底的消毒處理，應(yīng)確保終末消毒后的場所及其中的各種物品不再有病原體的存在。 室內(nèi)空氣無人條件下用紫外線對空氣消毒也可以用15% 過氧乙酸7 ml/m3(即純過氧乙酸1g/ m3)熏蒸進行消毒或0.8%過氧乙酸20 ml/m3氣溶膠消毒消毒完畢充分通風后方可使用。衣服、被褥等紡織品可煮沸消毒10分鐘，或用有效氯為250mg/L的含氯消毒劑浸泡15分鐘；或陽光下暴曬半天以

5、上。 病人病床、床墊、枕芯、棉被、毛毯和床單等可使用床單消毒機消毒。診療用品、物體表面可用0.2%過氧乙酸溶液或有效氯為200mg/L400mg/L的含氯消毒劑進行浸泡、噴灑或擦洗消毒，作用15分鐘后清水沖洗并擦拭干凈。 垃圾可噴灑10g/L有效氯含氯消毒劑溶液至濕潤保持4小時以上。 人粒細胞無形體病人粒細胞無形體病是由嗜吞噬細胞無形體侵染人末梢血中性粒細胞引起，以發(fā)熱伴白細胞、血小板減少和多臟器功能損害為主要臨床表現(xiàn)的蜱傳疾病。其病原體無形體為G-陰性細胞專性寄生菌。我省疑似無形體病疫情2009年1月1日至6月1日，疫情直報網(wǎng)上我省共報告疑似無形體病病例17例，其中武漢市協(xié)和醫(yī)院報告15例，

6、隨州市曾都醫(yī)院報告2例。病例分布: 河南省信陽市2例，我省病例15例，其中隨州11例，孝感市1例，咸寧市1例，武漢市1例，黃岡市1例。流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)隨州11例分布在11個不同的鄉(xiāng)鎮(zhèn)。我省報告的15例病例地區(qū)分布也無聚集性，發(fā)病時間自月31日至今，病例職業(yè)均為農(nóng)民，年齡多在40-60歲。我省病例臨床表現(xiàn)特點武漢市協(xié)和醫(yī)院報告的15例共同臨床特點包括高熱，心、肝、腎等多臟器受損，常伴隨肌張力增高，消化道癥狀如嘔吐、腹瀉等，嚴重病例可有神智意識障礙，出血，呼吸衰竭；其中6例為重癥型，表現(xiàn)為多器官功能衰竭，或出現(xiàn)繼發(fā)性感染，其中4例放棄治療自動出院后死亡。臨床檢驗突出特點為白細胞、血小板急劇下降，尿

7、常規(guī)、肝腎功能異常，肌酶譜異常。診斷性治療：患者經(jīng)由多西環(huán)素、喹諾酮等特異性針對病原體治療，大部分患者病情可得到緩解。全國和我省既往無形體病疫情2006年11月，安徽省一婦女出現(xiàn)不明原因發(fā)熱、出血。死亡后數(shù)天至兩周內(nèi)，9名密切接觸者（包括5名親屬、2名醫(yī)生、2名護士）都出現(xiàn)了發(fā)熱等癥狀。中國CDC進行了檢測，最終確認為無形體病。2004年至今，先后在我國浙江、江蘇、山東、以及河南等地均發(fā)生過類似安徽的疫情。2005年底，我省咸寧市發(fā)生類似疾病暴發(fā)疫情，共發(fā)病6人，死亡2例，對其中2人恢復期血清檢測確定為疑似人粒細胞無形體病例。2008年中南醫(yī)院電話報告黃岡市浠水縣1例人粒細胞無形體疑似病例，查

8、到人粒細胞內(nèi)包涵體。宿主動物與傳播媒介動物宿主持續(xù)感染是病原體維持自然循環(huán)的基本條件。國外報道，儲存宿主包括白足鼠等野鼠類。在歐洲，紅鹿、牛、山羊。國外報道，傳播媒介主要是硬蜱屬的某些種（如肩突硬蜱、篦子硬蜱等）。我國曾在黑龍江、內(nèi)蒙古及新疆等地的全溝硬蜱中檢測到嗜吞噬細胞無形體核酸。在我國的儲存宿主、媒介種類及其分布尚需做進一步調(diào)查。人群易感性人對嗜吞噬細胞無形體普遍易感，各年齡組均可感染發(fā)病。高危人群主要為接觸蜱等傳播媒介的人群，如疫源地（主要為森林、丘陵地區(qū)）的居民、勞動者及旅游者等。與人粒細胞無形體病危重患者密切接觸、直接接觸病人血液等體液的醫(yī)務(wù)人員或其陪護者，如不注意防護，也有感染的

9、可能。地理分布和發(fā)病季節(jié)特點目前，已報道有人粒細胞無形體病的國家有美國、斯洛文尼亞、法國、英國、德國、澳大利亞、意大利及韓國等，但僅美國和斯洛文尼亞分離到病原體。根據(jù)國外研究，該病與萊姆病的地區(qū)分布相似，我國萊姆病流行區(qū)亦應(yīng)關(guān)注此病。該病全年均有發(fā)病，發(fā)病高峰為5-10月。不同國家的報道略有差異，多集中在當?shù)仳缁顒虞^為活躍的月份。臨 床 表 現(xiàn)少數(shù)病人可因嚴重的血小板減少及凝血功能異常，出現(xiàn)皮膚、肺、消化道等出血表現(xiàn)，如不及時救治，可因呼吸衰竭、急性腎衰等多臟器功能衰竭以及彌漫性血管內(nèi)凝血死亡。老年患者、免疫缺陷患者及進行激素治療者感染本病后病情多較危重。疑似病例診斷標準流行病學史+臨床表現(xiàn)+

10、臨床檢驗陽性指標發(fā)熱、頭痛、疲勞、肌痛、食欲不振、部分患者腹痛、腹瀉、咽痛。外周血象白細胞減少、血小板減少，異淋巴細胞增多。肝酶升高，ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）/ AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）輕中度增高（2-4倍）臨床診斷病例標準疑似病例+特異性臨床檢驗/病原學實驗室檢測之一末梢血涂片鏡檢中性粒細胞內(nèi)桑葚狀包涵體病原學實驗室檢測：急性期血清IFA(間接免疫熒光抗體）檢測嗜吞噬細胞無形體IgM抗體陽性血清IFA檢測嗜吞噬細胞無形體IgG抗體陽性實驗室確診病例標準疑似病例/臨床診斷病例 + 病原學確診標準之一恢復期血清IFA檢測嗜吞噬無形體IgG抗體滴度較急性期有4倍及以上升高全血或血細胞標本PCR檢測無形體特

11、異性核酸陽性，且序列分析證實與嗜吞噬細胞無形體的同源性達99%以上分離到病原體無形體病病例監(jiān)測監(jiān)測病例定義：發(fā)熱高于38.5度，伴胃腸道癥狀或全身癥狀外周血白細胞降低，或 ？血小板降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶升高尿蛋白陽性多器官功能衰竭搜索病例目前病例監(jiān)測意義：早發(fā)現(xiàn)、早報告、早治療，減少或避免重癥和死亡的發(fā)生。監(jiān)測內(nèi)容病例報告鄉(xiāng)鎮(zhèn)以上衛(wèi)生院？510月病例調(diào)查：個案調(diào)查主動搜索：隨州、咸寧縣級以上醫(yī)療機構(gòu)2009年36月病原監(jiān)測病原監(jiān)測標本采集種類疑似病例血液: 病人血液5mLX3份（紅血球X5份、白細胞X5份、血清X5份）人粒細胞無形體病尸檢標本:病人脾臟、肝臟各1克X3份?？梢梢吧鷦游锛肮?、羊、牛、吸血蜱、不吸血蜱的脾臟、肝臟各1克X3份。密切接觸者或其他健康人群血：5mLX1份標本采集的注意事項血清一周內(nèi)：4