醫(yī)學科研方法課題

孕婦與不孕癥婦女解脲支原體、沙眼衣原體感染的研究要迎春一、課題名稱：孕婦與不孕癥婦女解脈支原體、沙眼衣原體感染的研究二、立項依據(jù):解脈支原體（Uu），沙眼衣原體（Ct）感染在臨床上非常多見，已經(jīng)成為醫(yī)學界普遍關(guān)注的問題.孕婦和不孕癥婦女都是Uu和Ct的易感人群，Uu,Ct是孕婦和不孕癥婦女生殖道感染的最常見的兩種病原微生物，我們就妊娠期和不孕癥患者Uu,Ct感染作出初步研究，研究兩者Uu和Ct感染的情況，以便進一步做好圍產(chǎn)期保健，提高妊娠質(zhì)量及查找不孕癥患者的病因，便于臨床治療。三、研究方案1、研究目標：了解孕婦與不孕癥婦女解脈支原體（Uu）,沙眼衣原體（Ct）感染的情況.方法：孕婦534例和不孕癥患者124例分為兩組取其宮頸分泌物檢測Uu，CtDNA，并抽取空腹血清，采用Uu,Ct蛋白芯片方法檢測兩組血清中的Uu,CtIgG抗體，以了解兩組患者Uu,Ct感染的情況.結(jié)果：孕婦與不孕癥婦女Uu感染率無統(tǒng)計學差異，而Ct感染率則不孕癥婦女明顯高于孕婦（P0.05）.結(jié)論：Ct感染在不孕癥的病因中更具意義。2、 研究對象：1、對象200307/200402來我院婦產(chǎn)科和生殖門診就診的孕婦534例和不孕癥婦女124例（丈夫精液分析正常，多數(shù)為繼發(fā)性不孕患者），檢測其血清。“和CtIgG抗體及宮頸分泌物Uu和CtDNA3、 研究的方法①用PCR方法檢測孕婦及不孕癥婦女宮頸分泌物Uu和CtDNA，其取材方法是：用擴陰器擴開陰道后，取消毒棉拭子，拭凈宮頸外口分泌物，棄去.再取一支棉拭子，伸入宮頸管內(nèi)，停留30s，沿管壁旋轉(zhuǎn)3wk后取出.放入裝有1mL無菌生理鹽水的試管中，充分懸浮，再擠干拭子中的水份，取出拭子，棄去.試管于-4°C冰箱保存待檢.試劑由上海復(fù)星醫(yī)學科技發(fā)展有限公司提供，操作嚴格按照試劑盒說明書進行.擴增產(chǎn)物經(jīng)含EB染色劑的瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠置于紫外檢測分析儀上觀察，如在450nm處出現(xiàn)橙黃色條帶，則標本中有Uu核酸存在，如在225nm處出現(xiàn)橙黃色條帶，則標本中有Ct核酸存在.檢測結(jié)果見Fig1.②用蛋白芯片（南京大淵生物醫(yī)學試劑有限責任公司）方法檢測兩組血清中的Uu和CtIgG抗體.此蛋白芯片是滲濾式免疫反應(yīng)芯片，使用間接法原理，膠體金標記.可分型檢測，多項同檢.以微孔濾膜為載體，利用微陣列技術(shù)將純化的UuI,II群及CtLGV,CtBT群特異性蛋白固相于同一膜片上，并利用微孔濾膜的滲濾、濃縮、凝集等，使病原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進行，再以免疫金作為標記物直接在膜上顯色，顯色后的芯片放入芯片識別儀，在專門軟件支持下對不同點陣的灰度值進行分析，實現(xiàn)了對兩種病原體的抗體進行同步檢測.4、 資料統(tǒng)計分析：采用SPSS統(tǒng)計軟件11.5進行統(tǒng)計學分析，x2檢驗.P0.05,認為差異有統(tǒng)計學意義.5、 可行性分析2.1孕婦與不孕癥婦女宮頸分泌物Uu和CtDNA檢測情況將不孕癥患者組設(shè)為第一組，例有文獻報道，PCR檢測法檢測Ct靈敏度及特異性可達94%?100%，可作為臨床檢測的實用方法，尤其適用于Ct感染的早期診斷和無癥狀攜帶者的檢查.蛋白芯片法目前正開始應(yīng)用于臨床，蛋白芯片法是一種檢測Uu和Ct的新方法，具有快速、簡便、經(jīng)濟等優(yōu)點，但其準確率稍低于PCR檢測法.我們采用PCR檢測法和蛋白芯片法同時檢測，可提高檢測數(shù)為124例，孕婦組為第二組，例數(shù)為534例.兩組患者采用PCR方法檢測Uu和CtDNA不孕癥患者Ct感染率顯著高于孕婦組（P<0.05）.不孕癥患者與孕婦Uu的感染率無統(tǒng)計學差異，均在33%左右.兩組Uu和Ct感染的總陽性率無統(tǒng)計學差異2.孕婦與不孕癥婦女蛋白芯片法檢測兩組血清中的Uu，CtIgG抗體情況同樣將不孕癥患者組設(shè)為第一組，孕婦組為第二組兩組患者采用蛋白芯片法檢測兩組血清中的Uu和不孕癥患者與孕婦染率無統(tǒng)計學差異。6、 研究成果Uu和Ct感染是不孕癥的重要因素.女性感染支原體可導(dǎo)致生殖道炎癥，使黏膜細胞壞死，輸卵管纖毛運動停滯，引起不孕[1].不孕癥婦女Uu和Ct感染的陽性率,各地報道不一，Uu感染率為27.2%?47.1%,Ct感染率為23.8%?44.1%[2-4].本研究中，不孕癥婦女Uu感染率為33.06%?37.10%，與各地報道一致但Ct感染率在10%以下，顯著低于前述研究可能有地域差異.不孕癥患者Uu和Ct感染的陽性率明顯高于正常未懷孕婦女.孕婦Uu感染率可高達40%?80%.Ct感染率國內(nèi)報道為1%?34%國外報道為2%?47%[56].一般人群支原體感染率為19.35%，衣原體感染率為0.05%[7].妊娠時由于多種激素水平的改變，機體內(nèi)環(huán)境變化從而更適于一些微生物的生長，其中包括Uu和Ct的繁殖，此外，妊娠期婦女處于免疫抑制狀態(tài)，多種病原體乘虛而入，所以孕婦的Uu和Ct感染率較正常非孕婦高.可見，不孕癥婦女和孕婦均是Uu和Ct感染的高危人群，所以對不孕癥患者及孕婦進行Uu及Ct的檢測是防治不孕癥及防治圍產(chǎn)期并發(fā)癥的重要方法.從研究結(jié)果看出，不孕癥患者和孕婦Uu的感染率均明顯高于Ct的感染率，但前者Ct感染率顯著高于后者.李琰等[8]報道，原發(fā)不孕，繼發(fā)不孕的UuDNA陽性率分別為26.7%，34.4%，而正常早孕為8%，CtDNA陽性率分別為26.0%，23.8%，而正常早孕為6%，提示Uu及Ct感染率均明顯高于正常早孕組.Uu和Ct同時感染是引起不孕的重要原因之四、參考文獻趙曉嵐，楚雍烈，葉國玲，等.反復(fù)流產(chǎn)和不孕癥與支原體和免疫因素地關(guān)系[J].第四軍醫(yī)大學學報，2003；24(20)：1884-1886.ZhaoXL,ChuYL,YeGL,etal.Associationofmyloplasmaandimmunefactorswithrecurrentspontaneousabortionandsterility[J].JFourthMilMedUniv,2003；24(20)：1884-1886.張?zhí)m英，王成瑜.不孕癥婦女解脲支原體、沙眼衣原體的臨床分析[J].中國計劃生育學雜志，2002；12(86)：746-748.ZhangLY,WangChY.Clinicalanalysisofinfectionofureaplasmaurealyicumandchlamydiatrachomatisininfertility[J].ChinJPlannedParenthoodol,2002；12(86)：746-748.朱軍，王衛(wèi)萍，陳亞利，等聚合酶鏈反應(yīng)和DNA探針雜交法檢測沙眼衣原體的比較[J].東南大學學報(醫(yī)學版)，2003；22(1)：35-38.ZhuJ,WangWP,ChenYL,etal.ComparingofdetectingchlamydiatrachomatiswithpolymerasechainreactionandDNAprobeintercross[J].JSoutheastUniv(MedSciEd),2003；22(1):35-38.胡德芬，段煉，劉曉蘭生殖道沙眼衣原體和解脲支原體119例分析[J].第三軍醫(yī)大學學報，2001；23(12)：1497-1498.HuDF,DuanL,LiuXL.Clinicalanalysesof119casesofchlamydiatrachomatisandureaplasma

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