基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控SOP.docx

*醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心SOP文件實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程 文件編號(hào)： 版本： 生效日期：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 8 頁(yè) 共 8 頁(yè)室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP-22)1目的：了解并控制實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的精密度的變化2適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)，使用Line-Gene基因擴(kuò)增儀實(shí)驗(yàn)室3操作人：* *4操作：4.1自制室內(nèi)質(zhì)控品：a) 自制室內(nèi)質(zhì)控品來(lái)自臨床收集的已知HBV陽(yáng)性血清大約（1104-6拷貝），每收到一份凍存于-20。收集到約35ml時(shí)，取出樣品，置室溫復(fù)融。將各管倒入無(wú)菌帶蓋的小三角燒瓶中充分混勻。b) 將以上的混合血清，以每管120ul，分裝于0.5ml離心管內(nèi)，分裝若干管。剩余血清根據(jù)廢物處理及生物防護(hù)操作程序處理。c) 將上述取約23管裝一小袋，其余20管裝一小袋。共分成若干小代。23管一小袋置于-20冰箱，其余置于-70超低溫冰箱保存，用完一小袋，就從-70轉(zhuǎn)移1小袋到-20冰箱備用。4.2基線測(cè)定及計(jì)算RCV：在準(zhǔn)備開(kāi)展質(zhì)控工作當(dāng)月的第一天取上述23管中的三管復(fù)溶，隨病人標(biāo)本一起測(cè)定，第二天取兩管復(fù)溶，隨病人標(biāo)本一起測(cè)定，以后每天隨病人標(biāo)本測(cè)定一管，20天后計(jì)算各項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果的 _ x、s、cv此處的cv即Rcv。RCV的計(jì)算公式：其中 _ x為RCV測(cè)定中所得23份結(jié)果的均值。表示總和。n表示結(jié)果的份數(shù),n-1為自由度。4.3繪制RCV圖a) 計(jì)算 _ x+ 2S、_ x- 2S 、 _ x+ 3S、_ x- 3S 并在質(zhì)控圖的縱坐標(biāo)上標(biāo)出 _ x、_ x2S、_ x3S的位置，并將其具體值標(biāo)在左側(cè)標(biāo)尺上。b)用紅線筆畫(huà)出 _ x2S線，用藍(lán)筆畫(huà)出 _ x3S線，即成一張“空?qǐng)D”。還應(yīng)填齊圖紙上方的各項(xiàng)，如：實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目、質(zhì)控品來(lái)源及批號(hào)、起止日期、主要儀器等，還應(yīng)填上RCV中測(cè)定所得的X、S、CV，測(cè)定過(guò)程中的特殊情況，（附圖2）。4.4室內(nèi)質(zhì)控：a)根據(jù)上述質(zhì)控圖，取一小袋上述血清作下月及以后的質(zhì)控，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)隨病標(biāo)本測(cè)定一管。b)在圖紙下方“日期”的上一行相應(yīng)的日期欄內(nèi)將“測(cè)定值”按原始記錄填入，邊填寫(xiě)邊核對(duì)。注意數(shù)據(jù)順序應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)際操情況，不得顛倒。未做測(cè)定的天數(shù)在圖上留出空格，因?yàn)檫@樣可以真實(shí)反應(yīng)情況，便于分析誤差原因。c)畫(huà)出每個(gè)檢測(cè)值所對(duì)應(yīng)的圖點(diǎn)。4.5室內(nèi)質(zhì)控圖的使用方法：4.5.1描點(diǎn)a) 圖中_ x線為靶線，_ x2s為警告線，_ x3s為失控線。對(duì)于同一批號(hào)的質(zhì)控血清不論使用幾個(gè)月，其質(zhì)控圖均不變化。只要將圖紙上方的“起止日期”項(xiàng)填入每個(gè)月的實(shí)際起止日期即可。b) 每天將該批號(hào)質(zhì)控血清按有關(guān)規(guī)定程序復(fù)融隨同病人的標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。將“日期”、“測(cè)定值”和“操作者”如實(shí)記錄在圖下方的相應(yīng)位置，并按前面的方法畫(huà)出圖上的對(duì)應(yīng)點(diǎn)，用直線將該點(diǎn)與前一天的點(diǎn)連接起來(lái)。c) 月底計(jì)算當(dāng)月全部質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果的 _ x、s、cv，并進(jìn)行圖形分析和小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案。4.5.2圖形分析：失控的判斷標(biāo)準(zhǔn)：將質(zhì)控品隨日常標(biāo)本共同處理并將質(zhì)控品結(jié)果如實(shí)記錄做好的RCV圖中描點(diǎn)。a)若結(jié)果在_ x2S線內(nèi)，報(bào)告可發(fā)出。b)若結(jié)果在 _ x2S線外和 _ x3S線以內(nèi)或出現(xiàn)連續(xù)6點(diǎn)以上在一側(cè)等規(guī)律變化，應(yīng)向有關(guān)負(fù)責(zé)人反映并積極尋找原因，但當(dāng)天檢測(cè)結(jié)果可以發(fā)出。d) 若結(jié)果在 _ x +3S線以外，則為失控，應(yīng)立即報(bào)告有關(guān)負(fù)責(zé)人訊速查找原因.e) 并將失控情況、必要時(shí)復(fù)測(cè)標(biāo)本，然后方可發(fā)報(bào)告。并將失控情況、查找過(guò)程及處理結(jié)果等詳細(xì)記錄登記。4.5.3通過(guò)觀察圖形的規(guī)律變化進(jìn)行誤差分析，消除誤差來(lái)源a) 曲線漂移：提示有系統(tǒng)誤差，準(zhǔn)確度發(fā)生了一次性的向上或向下改變。這種變化往往是由一個(gè)新的情況引起的。如更換不同批號(hào)的試劑，啟用新批號(hào)的質(zhì)控血清、操作規(guī)程人員的變換等。在找原因時(shí)應(yīng)重點(diǎn)注意“漂移”前的發(fā)生了哪些變動(dòng)性的因素。b) 趨勢(shì)性的變化：向下或向上的趨勢(shì)表明準(zhǔn)確度發(fā)生了漸漸的變化。這種變化往往是由于一個(gè)逐漸改變的因素造成的。如質(zhì)控血清的降解，試劑效價(jià)的降低等。c) 連續(xù)多點(diǎn)分布在靶值同一則：目前，一般認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果連續(xù)6 天以上出現(xiàn)在靶值同一則，則應(yīng)迅速查找原因，爭(zhēng)取盡快使之回復(fù)圍繞在靶值隨機(jī)分布的狀態(tài)。因?yàn)榘凑战y(tǒng)計(jì)學(xué)的原理，由純隨機(jī)誤差情況造成的這種可能性很小。連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則的可能性小于1.5%.因此凡出現(xiàn)連續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則者均可能性存在非隨機(jī)誤差因素。如果與靶值偏離不大，不會(huì)給臨床使用帶來(lái)太大影響時(shí)，一般化驗(yàn)報(bào)告可以照常填發(fā)。d) 其它規(guī)律性變化：（周期性等）。4.5.4通過(guò)圖形的資料對(duì)比進(jìn)行誤差分析，消除誤差來(lái)源a) 每個(gè)月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果的 _ x和s與該測(cè)定的 _ x和s進(jìn)行比較。如 _ x發(fā)生了變化，說(shuō)明準(zhǔn)確度發(fā)生了變化提示有非隨機(jī)誤差存在。如果當(dāng)月s不同則表明檢測(cè)的精密度發(fā)生了變化。b)將使用同一批號(hào)的質(zhì)控血清的CT值的_ x和s按月份列出。如果 _ x逐月上升， 則應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價(jià)降低或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份 _ x 基本一致而s 逐月加大，則主要提示常規(guī)工作的精密度下降，應(yīng)重點(diǎn)從操作、管理上找原因。c)在數(shù)年中，把每個(gè)月的CV和失控規(guī)律列成表，可用作檢測(cè)質(zhì)量的歷史回顧和趨勢(shì)性分析。4.6失控后的處理：4.6.1分析原始數(shù)據(jù)及初步估計(jì)失控原因：發(fā)生失控時(shí)，對(duì)同批實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的全部原始數(shù)據(jù)結(jié)合近期室內(nèi)質(zhì)控圖和平時(shí)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行分析，估計(jì)失控原因的大體方向。4.6.2對(duì)具體檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行回顧性分析，分析有無(wú)特殊情況出現(xiàn)。4.6.3通過(guò)選擇性復(fù)查進(jìn)一步分析判斷失控原因，決定處理辦法。選擇性復(fù)查時(shí)應(yīng)包括下述樣品，以便一次性找出原因，及時(shí)發(fā)出報(bào)告:a)失控時(shí)使用的質(zhì)控血清。b)重新打開(kāi)一瓶相同批號(hào)的質(zhì)控血清。c)失控時(shí)使用的標(biāo)準(zhǔn)品。d)重新打開(kāi)一瓶相同批號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)品。e) 少數(shù)幾個(gè)病人標(biāo)本（最好選擇已知病情近期曾做過(guò)該項(xiàng)目的病人標(biāo)本）通過(guò)對(duì)復(fù)查結(jié)果的分析，找到失控原因，制定相應(yīng)的解決方案，使實(shí)驗(yàn)室重新在控并將失控情況、原因和解決方案在檔案中詳細(xì)記錄（見(jiàn)表22）。4.7該程序的變動(dòng)程序：本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：檢驗(yàn)科主任、室技術(shù)負(fù)責(zé)人。起 草 人批 準(zhǔn) 人生 效 日 期年 月 日表22 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室PCR實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制失控原因及糾正措施記錄日期檢測(cè)項(xiàng)目操作人失控現(xiàn)象原因分析糾正結(jié)果審核人附圖2 室內(nèi)質(zhì)控記錄圖檢測(cè)