細(xì)菌分離培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)方法及步驟(內(nèi)容充實(shí))

1、京文儀傳卷考，取甫取腳可制冷細(xì)菌分離培養(yǎng)方法及操作步驟無(wú)菌取血液或臟器、淋巴結(jié)劃線接種于鮮血瓊脂平板或血清瓊脂 平面培養(yǎng)基、普通肉湯培養(yǎng)基，37 c恒溫培養(yǎng)24 h,觀察其生長(zhǎng)特 性。目前細(xì)菌分離培養(yǎng)的常用方法有平板劃線分離法、加熱分離法和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分離法。平板劃線接種法這是目前臨床上最常用的分離接種方法。 它可以從被檢病料中通 過(guò)劃線可使細(xì)菌分離、分散生長(zhǎng)而形成單個(gè)菌落（有利于從含有多種 細(xì)菌的標(biāo)本中分離出目的菌），以便挑選可疑菌落作純培養(yǎng)加以鑒定。 具體操作：1、右手持接種環(huán)，在酒精燈上火焰滅菌；圖1病料采集圖2接種環(huán)滅菌2、待接種環(huán)冷卻后，挑取被檢料少許，左手持瓊脂平板，以食指為支點(diǎn)，用拇

2、指和無(wú)名指將平皿揭開(kāi)一空隙。大約20 c時(shí)，迅速地將接種環(huán)輕輕地涂布在培養(yǎng)基的邊緣3、在涂布處來(lái)回移動(dòng)作曲線形劃線接種。（ 注意：劃線時(shí)，以 腕力使接種環(huán)在瓊脂平板表面劃動(dòng)， 盡量不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基，劃的線條要密，但不能重復(fù)舊線，以免培養(yǎng)物形成菌苔。）圖3平板劃線接種法4、劃線完畢，合上平皿蓋，將瓊脂平板倒置，放入 37 c溫箱內(nèi)培養(yǎng)18 24小時(shí)注意：分離培養(yǎng)用的平板培養(yǎng)基應(yīng)表面干燥，可于臨用前置37 c孵育箱內(nèi)30分鐘，這樣表面即干燥有利于分離培養(yǎng)，又使培養(yǎng)基預(yù) 溫，對(duì)培養(yǎng)某些較嬌弱的細(xì)菌有利。參照3京文僅供參考，取假取腳可制泠細(xì)菌藥敏試驗(yàn)方法操作步驟藥敏試驗(yàn)是抗菌藥使用以前必不可少的一個(gè)基本

3、環(huán)節(jié)，一個(gè)正確的藥敏結(jié)果能夠科學(xué)的指導(dǎo)養(yǎng)殖戶用藥，減少抗菌素使用的盲目性， 從而減少養(yǎng)殖戶損失。在臨床實(shí)際生產(chǎn)中具備重要意義。1、在“超凈臺(tái)”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適 量細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式； 用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開(kāi)始 劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2,依次 劃線，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。圖4接種環(huán)劃線2、以無(wú)菌操作將滅菌的不銹鋼小管（外徑為 4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養(yǎng)基上打孔，將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養(yǎng)基 能

4、充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結(jié)果）。3、添加藥物：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。將平皿培養(yǎng)基置于37 c溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察效果。圖5添加藥物藥敏試驗(yàn)結(jié)果：圖6藥敏試驗(yàn)結(jié)果影響藥敏結(jié)果的因素：1、培養(yǎng)基:應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)菌的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制。 傾注平板時(shí)，厚度 合適，約56mm,不可太薄，一般90mm直徑的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基 1820m為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì) ，如鈣、鎂 離子能減低氨基糖甘類的抗菌活性，胞腺密咤核甘和對(duì)氨苯甲酸(PABA)能拮抗磷胺藥和TMP的活性2、細(xì)菌接種量：細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的 菌株更可破壞藥物的抗菌活性。3、藥物濃度:藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果，需精硫 配制。商品藥應(yīng)嚴(yán)格按照其推薦治療量配制。4、培養(yǎng)時(shí)間:一般培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37 c 8-18小時(shí)，有些抗菌藥 擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4 c泳箱內(nèi)