第十三章分子診斷ppt課件

1、第十二章 分 子 診 斷. 一、分子診斷的概念和特點(diǎn) 概念： 利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)和方法，經(jīng)過檢測(cè)基因構(gòu)造或其表達(dá)程度能否正常，從而對(duì)人體安康形狀和疾病作出診斷的方法。 傳統(tǒng)的診斷：表現(xiàn)型基因型 基 因 診 斷：基因型表現(xiàn)型 逆向診斷.特點(diǎn)特異性強(qiáng)靈敏度高早期診斷性 順應(yīng)性強(qiáng)一、分子診斷的概念和特點(diǎn)檢測(cè)致病基因突變；分析與疾病連鎖的遺傳標(biāo)志；建立多基因疾病表型克??；定量分析致病基因的表達(dá)程度 已明確疾病表型與基因型的關(guān)系分子診斷的前提.4二、分子診斷戰(zhàn)略直接診斷直接檢測(cè)致病基因的突變 基因突變類型缺失、點(diǎn)突變、反復(fù)、插入等間接診斷運(yùn)用DNA多態(tài)性為遺傳標(biāo)志進(jìn)展連鎖分析，確定待測(cè)

2、者能否得到帶有致病的染色體，從而間接地作出診斷 DNA多態(tài)RFLP、VNTR、SNP.DNA多態(tài)DNA Polymorphism 群體中每個(gè)個(gè)體DNA區(qū)域中等位基因或片段存在兩種或兩種以上的方式，對(duì)基因功能沒有影響，稱DNA多態(tài)。DNA分析中常用的遺傳性多態(tài)性標(biāo)志有3類：1RFLP：稱限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，為第一代多態(tài)性標(biāo)志；2反復(fù)序列多態(tài)性VNTR：如STR其反復(fù)次數(shù)在人群中存在變異，構(gòu)成多態(tài)即 VNTR ，為第二代多態(tài)性標(biāo)志；3單堿基多態(tài)性SNP：發(fā)生在基因組中的單個(gè)核苷酸的替代，為第三代多態(tài)性標(biāo)志。二、分子診斷戰(zhàn)略.三、分子診斷常用技術(shù)核酸分子雜交技術(shù)等位基因特異寡核苷酸探針(allel

3、e specific oligonucleotide, ASO)DNA限制性長(zhǎng)度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism, RLFP)分析PCR-SSCPDNA測(cè)序 DNA芯片技術(shù) .點(diǎn)突變C to T5335G53引物1引物2探針1探針2A等位基因特異寡核苷酸探針ASO . 原理 指DNA序列上發(fā)生一個(gè)變異后獲得或喪失了一限制性識(shí)別位點(diǎn)，使DNA限制性片段長(zhǎng)度發(fā)生變化，在人群中構(gòu)成兩種或兩種以上的限制性類型 利用特定限制性識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)展基因分析限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析RFLP.RLFP分析法.RFLP分析 優(yōu)點(diǎn) 分辯率高，無需標(biāo)志,反復(fù)性好，簡(jiǎn)便

4、快速直觀 主要用于核酸變異分析比較, 微生物的分群分型，癌基因分析，遺傳病的診斷等。 局限 只能運(yùn)用突變引起限制性酶切位點(diǎn)改動(dòng)挑選，檢測(cè)效率低。. 原理 將經(jīng)擴(kuò)增的DNA片段變性構(gòu)成單鏈，由于序列不同，單鏈構(gòu)象就有差別，在中性聚丙烯酰胺凝膠中電泳的遷移率不同，經(jīng)過與規(guī)范物的對(duì)比，即可檢測(cè)出有無變異。 優(yōu)點(diǎn) 檢測(cè)基因變異，具有操作簡(jiǎn)便、快速特點(diǎn)，不需特殊設(shè)備，適用于大樣本挑選。 己廣泛運(yùn)用于檢測(cè)各種病原體基因的點(diǎn)突變及缺失突變，基因的多態(tài)性分析等。PCR/單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析SSCP. PCR-SSCP表示圖.DNA測(cè)序.DNA自動(dòng)測(cè)序結(jié)果舉例.DNA芯片技術(shù).四、分子診斷的運(yùn)用及舉例遺傳疾病腫瘤感染性疾病判別個(gè)體疾病易感性器官移植組織配型法醫(yī)學(xué)中個(gè)體識(shí)別、親子鑒定.Mst酶切位點(diǎn)(CCTNAGG)53正?；?3突變基因1.15kb1.35kb鐮狀紅細(xì)胞貧血患者基因組的限制性酶切分析GAG GTG 谷Aa纈Aa.+0.2kb1.15kb1.35kb正常人突變攜帶著患者鐮狀紅細(xì)胞貧血患者基因組的限制性酶切分析. Normal Gene Probe與正常 Probe 雜交穩(wěn)定 Mutation S Gene Probe與異常 S雜交 穩(wěn)定 鐮狀紅細(xì)胞貧血患者基因組的ASO探針雜交.20斑