la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用課件

1、抗PLA2R抗體在原發(fā)性腎小球腎炎的診斷作用la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用抗PLA2R抗體la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用原發(fā)性腎小球腎炎簡介流行病學(xué)致病機(jī)制診斷方法血清學(xué)檢測指標(biāo)：抗PLA2R抗體主要內(nèi)容la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用原發(fā)性腎小球腎炎簡介主要內(nèi)容la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的膜性腎小球腎炎 分類原發(fā)性MN抗PLA2R抗體特發(fā)性（查無自身抗體或已知的繼發(fā)病因）繼發(fā)性MN（可參見KDIGO列表）病原體感染（例如HBV、HCV、梅毒和瘧疾）自身免疫性疾?。ɡ珙愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征和類天皰瘡）癌癥其他疾?。ɡ珑牋罴?xì)胞貧血、格林-巴利綜合征）藥物誘導(dǎo)（例如非甾

2、體類抗炎藥，黃金，水銀和青霉胺）膜性腎小球腎炎 分類原發(fā)性MN抗PLA2R抗體特發(fā)性（查原發(fā)性膜性腎小球腎炎（primary membranous glomerulonephritis; pMGN），也被稱為特發(fā)性膜性腎?。╥diopathic membranous nephropathy; IMN）是最常見的以腎病綜合征（nephritic syndrome；NS）為特點(diǎn)的腎臟疾病?？梢娪趲缀跛械姆N族和性別，更易出現(xiàn)在40歲以上的男性和白種人患者。疾病介紹原發(fā)性膜性腎小球腎炎（primary membranous pMGN是原發(fā)性膜性腎病，與繼發(fā)性膜性腎病不同。繼發(fā)性膜性腎病是一種感染、藥

3、物治療、濫用、吸毒、膠原病或其他自身免疫病以及腫瘤的繼發(fā)?。úl(fā)癥），并可隨著潛在疾病的治療而改善。pMGN是作為一種獨(dú)立疾病治療的，尤其是對伴有腎病綜合征和高滲性的pMGN。疾病介紹疾病介紹約80%的pMGN患者具有腎病綜合征；有時(shí)胳膊和眼皮出現(xiàn)嚴(yán)重水腫，體重減輕，排尿減少；約20%的pMGN患者具有蛋白尿，但是無其他任何癥狀。尿沉渣檢查常見脂肪粒、滴、管；約50% pMGN患者具有顯微鏡血尿，蛋白尿與糖尿；約70% pMGN患者在發(fā)病初期血壓與腎功能正常。pMGN的臨床表現(xiàn)腎病綜合征：由多種病因引起，以腎小球基底膜通透性增加為特征，表現(xiàn)為大量蛋白尿、低蛋白血癥、高度水腫、高脂血癥的一組臨床

4、癥候群。約80%的pMGN患者具有腎病綜合征；pMGN的臨床表現(xiàn)腎病流行病學(xué)國內(nèi)pMGN發(fā)病率約占原發(fā)性腎小球疾病的9.9%13.5%，居IgA腎病、系膜增生性腎小球腎炎之后，列第三位。pMGN患者隨著蛋白尿的增加腎衰竭發(fā)病率及死亡率風(fēng)險(xiǎn)也在不斷升高，這種長期風(fēng)險(xiǎn)尤其與血栓和心血管并發(fā)癥相關(guān)。la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用流行病學(xué)國內(nèi)pMGN發(fā)病率約占原發(fā)性腎小球疾病的9.9%1致病機(jī)制自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致腎小球免疫球蛋白和補(bǔ)體復(fù)合物沉積，導(dǎo)致這種反應(yīng)的抗原主要為M型磷脂酶A2受體（M-type phospholipase A2 receptor, PLA2R），是在成年特發(fā)性膜性腎病患者中

5、發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)抗原。la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用致病機(jī)制自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致腎小球免疫球蛋白和補(bǔ)體復(fù)合物沉積，導(dǎo)pMGN臨床診斷的困惑如何辨別原發(fā)還是繼發(fā)？如何進(jìn)行鑒別診斷？SLE相關(guān)腎炎乙肝相關(guān)腎炎非膜性腎小球腎炎紫癜性腎小球腎炎診斷方法la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用pMGN臨床診斷的困惑如何辨別原發(fā)還是繼發(fā)？SLE相關(guān)腎診斷: 腎穿刺 組織學(xué)檢查 腎臟組織電鏡檢測 新方法學(xué): 血清學(xué)檢測 (anti-PLA2R)血清學(xué)檢測特點(diǎn)：減輕病人痛苦節(jié)約時(shí)間和成本可定量化Anti-PLA2R 陽性pMGN診斷診斷方法la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用診斷:Anti-PLA2R 陽性pMGN

6、診斷診斷方法la2r診斷方法腎臟穿刺活檢是診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但也是高風(fēng)險(xiǎn)的創(chuàng)傷性檢查手段！活檢確定為膜性腎病pMNsMN排查繼發(fā)病因詢問病史體格檢查實(shí)驗(yàn)室檢測：血清學(xué)、影像學(xué)腎臟活檢：光鏡、免疫熒光、電鏡-+激素+烷化劑治療治療原發(fā)疾病治療方案不同KDIGO Clinical Practice Guideline for Glomerulonephritis. 2012. http:/pMN診斷主要依賴“排除法診斷(exclusion of diagnosis)”la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用診斷方法腎臟穿刺活檢是診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但也是高風(fēng)險(xiǎn)的創(chuàng)傷性檢查手PLA2R結(jié)構(gòu)模式圖：N-terminal

7、 cysteinerich domain (CysR)， fibronectin type II domain (FNII), 8個(gè) CTLDs, 一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu) (TM) intracellular C terminal tail (IC).N Engl J Med 2009;361:11-21.PLA2R PLA2R是在人腎小球足細(xì)胞表面表達(dá)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞中磷脂酶的結(jié)合過程。目前PLA2R主要分為兩型（M型與N型），M型PLA2R是自身抗體的主要靶抗原。la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用PLA2R結(jié)構(gòu)模式圖：N Engl J Med 2009;3抗PLA2R抗體血清學(xué)檢測 抗PLA2R I

8、gG抗體檢測有助于：原發(fā)性與繼發(fā)性膜性腎小球腎炎的鑒別診斷疾病活動性評估制定治療方案治療監(jiān)測la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用抗PLA2R抗體血清學(xué)檢測 抗PLA2R IgG抗體檢標(biāo)準(zhǔn)化ELISA:- 試劑通用性,- 溫育時(shí)間短- 30 / 30 / 15 min- 半定量檢測 （ratio or index） 或- 定量檢測 （5 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品, 2 1500 RU/ml）Anti-PLA2R RC-IIFT（FA 1254-xxxx-50）Anti-PLA2R ELISA（EA 1254-9601 G）HEK PLA2R -transfectedHEK control-transfected

9、intracellular tailtransmembrane domainextracellular tail抗PLA2R抗體檢測產(chǎn)品la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用標(biāo)準(zhǔn)化ELISA:Anti-PLA2R RC-IIFTAnt使用間接免疫熒光法檢測抗PLA2R抗體PLA2R 轉(zhuǎn)染細(xì)胞目前，間接免疫熒光（IIFT）是血清學(xué)診斷的唯一方法(金標(biāo)準(zhǔn)），該方法適于抗PLA2R抗體的定性與定量分析。la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用使用間接免疫熒光法檢測抗PLA2R抗體PLA2R 轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞DNA合成編碼PLA2R的DNA片段抗原轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)抗原間接免疫熒光法檢測抗體將目標(biāo)片段

10、插入質(zhì)粒插入目標(biāo)DNA的質(zhì)?；谥亟M細(xì)胞的間接免疫熒光法（RC-IFT）la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用轉(zhuǎn)染細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞DNA合成編碼PLA2R的DNA片段抗原含兩個(gè)基質(zhì)的生物薄片馬賽克:生物薄片:PLA2R轉(zhuǎn)染HEK細(xì)胞對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK 細(xì)胞抗PLA2R抗體的RC-IFT la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用含兩個(gè)基質(zhì)的生物薄片馬賽克:生物薄片:抗PLA2R抗體的RC基于抗原特異轉(zhuǎn)染細(xì)胞的間接免疫熒光法HEK293 cellsPLA2R-transfectedAnti-PLA2R Recombinant Cell IFT- BIOCHIP Technology -基于抗原特異轉(zhuǎn)染細(xì)

11、胞的間接免疫熒光法HEK293 cells敏感度: 52%特異性: 100%Cohort(n = 360)nAnti-PLA2R陽性組織學(xué)證實(shí)的 pMGN10052繼發(fā)MGN170非膜性腎小球腎炎900正常人1530Hoxha, Fechner, Stahl et al., Nephrology Dialysis Transplantation: 26(8);2526-32, 2011 Anti-PLA2R Ab - 敏感性和特異性- PLA2R-Abla2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用敏感度: 52%特異性: 100%Cohort(n J Am Soc Nephrol 22: 1137114

12、3, 2011檢測anti-PLA2R 抗體對IMN鑒別診斷有很重要的意義（國內(nèi)數(shù)據(jù)）敏感度：81.7%； 特異性：89.1%la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用J Am Soc Nephrol 22: 11371143靈敏度和特異性nAnti-PLA2R positive IgGRC-IFTAnti-PLA2R positive IgGELISAPrimary MN, before treatment,within 8 weeks after biopsy,anti-PLA2R RC-IFT positive200200 (100%)193 (96.6%)Secondary MN, befo

13、re treatment,within 8 weeks after biopsy,other underlying disease known,anti-PLA2R RC-IFT negative2700Other glomerulonephritides23000Other autoimmune diseases31500Healthy blood donors29101Specificity836100%99.9%Dhnrich, Stahl, Schlumberger et al., Clin Chim Acta 421, 213-218 (2013)靈敏度和特異性nAnti-PLA2R

14、 positive IgDhnrich, Stahl, Schlumberger et al., Clin Chim Acta 421, 213-218 （2013）抗PLA2R抗體的疾病特異性Dhnrich, Stahl, Schlumberger Hoxha, Fechner, Stahl et al., Nephrology Dialysis Transplantation: 26(8);2526-32, 2011IIFT檢測性能Hoxha, Stahl et al; Kidney Int 2012對88例膜性腎病患者進(jìn)行檢測采用歐蒙 RC-IFT產(chǎn)品結(jié)果:靈敏度：82 % 82%的 M

15、N患者確認(rèn)為原發(fā)性MN 所有的繼發(fā)性MN患者均未檢出抗PLA2R抗體特異性：100%Hoxha, Fechner, Stahl et al., 幾乎所有陽性檢出率數(shù)據(jù)均來自于回顧性研究!抗體滴度會隨著疾病活動性而發(fā)生波動，甚至可能因取樣時(shí)發(fā)生以下事件而檢測不出： 自發(fā)性緩解 免疫抑制治療原發(fā)性/特發(fā)性膜性腎病并非單一的疾病，可能存在多種靶抗原一些患者可能被誤判為原發(fā)性膜性腎?。▽?shí)際為繼發(fā)性）為什么并非所有的pMN患者均能檢出抗PLA2R抗體?la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用幾乎所有陽性檢出率數(shù)據(jù)均來自于回顧性研究!為什么并非所有的pHoxha, Fechner, Stahl et al., N Engl J Med 363, 496-498 (2010) Anti-PLA2R Ab- 預(yù)測疾病預(yù)后- 患者腎臟移植前后血清Anti-PLA2R 滴度變化，預(yù)測疾病復(fù)發(fā)la2r在特發(fā)性膜性腎病診斷中的作用Hoxha, Fechner, Stahl et al., la2r在特發(fā)性膜性