遺傳學實驗-顯帶學習資料

植物染色體Giemsa分帶技術(shù)

實驗目的通過實驗，初步掌握動、植物染色體壓片及Ｃ帶分帶技術(shù)。實驗原理Ｃ帶是顯帶技術(shù)中最簡單的一種帶型。使用這種技術(shù)，能使著絲粒型的異染色質(zhì)著色，這種異染色質(zhì)通常位于著絲粒周圍并常含有高度重復序列的DNA。因為通常都在著絲粒處出現(xiàn)，所以稱之為C帶。關(guān)于產(chǎn)生Ｃ帶的機理，有人認為用氫氧化鋇和鹽類處理染色體，能從染色體中提取高達80％的DNA。DNA被優(yōu)先地從非Ｃ帶區(qū)提出，結(jié)果染色體臂著色淺而著絲粒異染色質(zhì)著色深。

有人研究表明，著絲粒異染色質(zhì)僅與組蛋白結(jié)合，而常染色質(zhì)含有大量非組蛋白蛋白質(zhì)。一般有這樣的看法，活躍的染色質(zhì)比遺傳上不活躍的染色質(zhì)更富以非組蛋白蛋白質(zhì)。這說明，僅與組蛋白結(jié)合的染色質(zhì)比含有大量非組蛋白蛋白質(zhì)的染色質(zhì)，結(jié)構(gòu)緊密得多。也就是這種緊密的結(jié)構(gòu)保護著絲粒的異染色質(zhì)免受氫氧化鋇和鹽類的破壞，從而產(chǎn)生Ｃ帶。實驗步驟

實驗方法(一)BSG法（Ba(OH)2-2×SSC-Giemsa）方法：

用新配制的5％Ba(OH)2溶液(60℃)中處理5～10分鐘后，用熱水沖洗2次，以徹底洗凈氫氧化鋇。稍干后用1/10Giemsa染液染色20分鐘。

(二)HSG(Hyolorochloricacid，Saline，Giemsa)法：

將標本片在0.2NHCL中室溫處理60分鐘。蒸餾水沖洗后，置2×SSC溶液(65℃)中溫育15分鐘。經(jīng)蒸餾水沖洗，稍干后用1/10Giemsa染液染色10分鐘左右。水沖洗，稍干后鏡檢。

(三)HSG與BSG兩者相結(jié)合方法實驗方法實驗方法(四)注意事項

分帶處理適度的染色體應為深紅略帶藍色,具黑色帶紋。如染色體紅色，無帶，則變性處理不夠，應加大Ba(OH)2濃度或加長變性時間；如染色體未染上色，或只著絲點附近染成黑色，則變性過度，應降低Ba(OH)2濃度，或減少變性時間；如細胞核和染色體均不見，說明變性極過度。

蠶豆和洋蔥采用HSG法較好，而大麥和小麥采用BSG法效果較好。實驗方法

(五)帶型分析將已分帶的標本，進行顯微攝影，沖洗、放大，按核型分析方法將染色體編號進行帶型分析，要求詳細記錄各染色體上，各帶紋的位置，寬窄著色深淺和形狀。最后繪制染色體模式圖，在各條染色體模式圖上標出各條帶紋的位置、寬窄、深淺、形狀等線條。植物染色體C帶主要包括四種帶型：著絲粒帶是指著絲粒及其附近的帶，大部分植物都有這種帶型。中間帶分布于染色體著絲粒至末端之間的帶叫做中間帶。小麥B組染色體中間帶較多且明顯；蠶豆染色體中間帶一般在長臂上末端帶位于染色體的末端的帶。洋蔥有較明顯的末端帶，小麥僅部分染色體