GB 15193.10-2014 食品安全國家標準 體外哺乳類細胞DNA損傷修復（非程序性DNA合成）試驗.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準 G. 食品安全國家標準 體外哺乳類細胞 DNA 損傷修復 非程序性 DNA 合成 試驗 ( )2014-12-24發(fā)布 2015-05-01實施 中 華 人 民 共 和 國 發(fā) 布 國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 G. 前 言 本標準代替 非程序性 合成試驗 GB15193.102003 DNA 。 本標準與 相比 主要變化如下 GB15193.102003 , : 標準名稱修改為 食品安全國家標準 體外哺乳類細胞 損傷修復 非程序性 合成 “ DNA ( DNA )試驗 ”; 修改了試驗目的和原理 ; 修改了試驗方法 ; 修改了數據處理 ; 修改了結果評價 。 G. 食品安全國家標準 體外哺乳類細胞 DNA 損傷修復 非程序性 DNA 合成 試驗 ( )1 范圍 本標準規(guī)定了體外哺乳類細胞 損傷修復 非程序性 合成 試驗的基本試驗方法和技術 DNA ( DNA ) 要求 。 本標準適用于評價受試物的誘變性和 或 致癌性 ( ) 。2 術語和定義 21 非程序性 DNA 合成 . 當 受損傷時 損 傷 修 復 的 合 成 主 要 在 期 以 外 的 其 他 細 胞 周 期 稱 非 程 序 性 DNA , DNA S , DNA 合成 。3 試驗目的和原理 在正常情況下 合成僅在細胞有絲分裂周期的 期進行 當化學或物理因素誘發(fā) 損傷 ,DNA S 。 DNA 后 細胞啟動非程序性 合成程序以修復損傷的 區(qū)域 在非 期分離培養(yǎng)的原代哺乳動物細 , DNA DNA 。 S 胞或連續(xù)細胞系 中 加 入3 胸 腺 嘧 啶 核 苷 3 通 過 放 射 自 顯 影 技 術 或 液 體 閃 爍 計 數 , H- (H-TDR), DNA 法檢測染毒細胞中3 摻入 的量 可說明受損 的修復合成的程度 (LSC) H-TDR DNA , DNA 。 在體外培養(yǎng)細胞中 用缺乏半必需氨基酸精氨酸的培養(yǎng)基 進行同步培養(yǎng) 合成的始動 , (ADM) ,DNA 受阻 使細胞同步于 期 并用藥物 常用羥基脲 抑制殘留的半保留 復制后 通過3 摻入 , G1 ; ( ) DNA , H-TDR 可顯示非程序性 合成 DNA (UDS)。4 試劑和材料 41 試劑 . 注 全部試劑除注明外 均為分析純 試驗用水為雙蒸水或超純水 : , , 。411 細胞增殖用培養(yǎng)基 . 氏最低要求培養(yǎng)基 加入 小牛血清 青霉 Eagle (EaglesMinimalEssentialMedium,EMEM), 10% 、 素 鏈霉素貯存液 使青霉素的最終濃度為 單位 鏈霉素的最終濃度為 培養(yǎng)基 、 , 100 , 100g/mL。EMEM 可選用各種商品供應之粉末培養(yǎng)基按生產廠商提供資料配制并除菌 冰箱貯存 。4 。412 細胞同