聯(lián)合應(yīng)用神經(jīng)生長因子和神經(jīng)節(jié)苷脂對坐骨神經(jīng)損傷大鼠脊髓神經(jīng)元的保護(hù)作用探討.doc

聯(lián)合應(yīng)用神經(jīng)生長因子和神經(jīng)節(jié)苷脂對坐骨神經(jīng)損傷大鼠脊髓神經(jīng)元的保護(hù)作用探討 劉坤劉維婕李薇 大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，遼寧大連116000 摘要目的研究神經(jīng)生長因子（NGF）聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂1（GM1）對于坐骨神經(jīng)損傷大鼠的脊髓神經(jīng)元保護(hù)作用。方法選擇實驗用SD大鼠50只，隨機(jī)分為A組（生理鹽水NS組，14只）、B組（NGF，12只）、C組（GM1，12只）和D組（NGF+GM1，12只），造成5mm坐骨神經(jīng)缺損，各組術(shù)中均以硅膠管進(jìn)行局部加藥，手術(shù)后于損傷側(cè)小腿處予以相應(yīng)藥物肌注。結(jié)果生長4周時，D組的脊髓運(yùn)動神經(jīng)元數(shù)以及神經(jīng)傳導(dǎo)速度均顯著優(yōu)于另外三組(P0.05)，且B、C組顯著優(yōu)于A組(P0.05)；生長8周時，B、C、D三組的脊髓運(yùn)動神經(jīng)元數(shù)以及神經(jīng)傳導(dǎo)速度均顯著優(yōu)于A組(P0.05）。結(jié)論NGF聯(lián)合GM1對于坐骨神經(jīng)損傷以后的脊髓運(yùn)動神經(jīng)元具有保護(hù)作用，且相比于單純應(yīng)用NGF或者GM1能夠更早地發(fā)揮作用，且保護(hù)效果明顯更好，值得推廣應(yīng)用。 關(guān)鍵詞神經(jīng)節(jié)苷脂；神經(jīng)生長因子；坐骨神經(jīng)損傷；脊髓神經(jīng)元 R745A1672-5654（xx）03（a）-0009-02 ProtectiveeffectsofNGFandgangliosideonsciaticnerveinjuryofratspinalcordneuronstoinvestigate LIUKunLIUWeijieLIWei TheaffiliatedZhongshanHospitalofDalianUniversity，Dalian116000，China AbstractObjectiveSpinalcordneuronsinratsofNGFbinedwithGM1ontheprotectionofsciaticnerveinjury.MethodsThe50SDrats，wererandomlydividedintoAgroup(groupNS，14rats)，Bgroup(NGF，12)，Cgroup(GM1，12)andDgroup(NGF+GM1，12)，5mmsciaticnervedefectcausedby.ResultsThegrowthof4weeks，groupDinmotorneuronsofthespinalcordandnerveconductionvelocityweresignificantlybetterthantheotherthreegroups(P<0.05)，andB，CgroupwashigherthanthatofAgroup(P<0.05);growthatweek8，B，C，DspinalmotorneuronnumberthreegroupsofnerveconductionvelocitywassignificantlybetterthantheAgroup(P<0.05)，butB，C，Dnosignificantdifferencebetweenthethreegroups(P>0.05).ConclusionNGFbinedwithGM1hasaprotectiveeffectonspinalcordmotoneuronsaftersciaticnerveinjury，andparedtothesimpleapplicationofNGForGMCanplayaroleearlier，andtheproteltiveeffevtwassignificantlybetter，Shouldwidelyapplied. KeywordsGangliosides;Nervegrowthfactor;Sciaticnerveinjury;Spinalcordneurons 周圍神經(jīng)損傷是相應(yīng)脊髓節(jié)段也可發(fā)生一過性或者永久性的損傷，且可導(dǎo)致脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)發(fā)生凋亡等1。目前，神經(jīng)生長因子（NGF）以及GM1的研究較多2。研究建立坐骨神經(jīng)損傷大鼠模型，單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用NGF與GM1，并設(shè)置生理鹽水對照組進(jìn)行了對比分析，現(xiàn)總結(jié)報道如下。 1材料與方法 1.1實驗材料 1.1.1實驗動物選擇鼠齡為6個月的SD大鼠5只，雌雄不限，體質(zhì)量在220240g之間，平均為（232.14.4）g。 1.1.2試劑及儀器GM1（香港精優(yōu)企業(yè)有限公司）、NGF（Sigma公司）、蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒（上海圻明生物科技有限公司）、多導(dǎo)生理記錄儀（SiemensAG）、JEM21200E透射電子顯微鏡（日本電子光學(xué)公司）。 1.2方法 1.2.1分組及模型準(zhǔn)備50只SD大鼠，隨機(jī)分為A組（生理鹽水NS組，14只）、B組（NGF，12只）、C組（GM1，12只）和D組（NGF+GM1，12只），各組的定點觀察時相分別為傷后1周、4周及8周。大鼠均予以腹膜腔內(nèi)注射2%的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，劑量為40mg/kg，并常規(guī)進(jìn)行消毒鋪單，于大鼠的右大腿外側(cè)行1個縱向切口，以顯露其坐骨神經(jīng)，找到梨狀肌，于其下方5mm部位切斷坐骨神經(jīng)，將遠(yuǎn)近神經(jīng)段均納入長度為10mm、內(nèi)徑為2.0mm的硅膠管之中，然后以9-0顯微縫線將神經(jīng)外膜固定在硅膠管的管壁上，保持神經(jīng)阻斷端之間相距5mm。手術(shù)過程中經(jīng)硅膠管滴加相應(yīng)藥物各1次，手術(shù)后8周內(nèi)于小腿予以腓腸肌注射1次，用量視體重而定，B組為NGF用量10ng/100g，C組為GM1用量100g/100g，D組為NGF用量5ng/100g，GM1用量50g/100g，A組予以等量的生理鹽水。 1.2.2神經(jīng)傳導(dǎo)速度（NCV）的測定各組分別于術(shù)后4周以及8周時選擇雙側(cè)坐骨神經(jīng)應(yīng)用生理記錄儀測定NCV，測定方法按照說明書操作。 1.2.3脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元數(shù)測定各組分別于術(shù)后1周、4周以及8周時選擇L1-6脊髓前角進(jìn)行測定，常規(guī)進(jìn)行固定、包埋以及切片，控制片厚為5m。然后進(jìn)行HE染色，在各個標(biāo)本中抽取中間部位切片5張，以直徑15m進(jìn)行計數(shù)，最終結(jié)果取平均數(shù)。同時，密切觀察并記錄脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元數(shù)變化情況。 1.2.4電鏡觀察術(shù)后1、4周及8周時選擇L4-6脊髓，采用3%的戊二醛進(jìn)行固定，并進(jìn)行定向包埋，選擇超薄切片此阿勇枸櫞酸鉛進(jìn)行染色，然后采用電鏡觀察并記錄其超微結(jié)構(gòu)，比較各組大鼠的超微結(jié)構(gòu)變化情況。 1.3統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)以SPSS18.0軟件進(jìn)行分析，以（xs）表示計量資料，并經(jīng)t檢驗；以百分率表示計數(shù)資料，并經(jīng)2檢驗，P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2結(jié)果 2.1各組NCV比較 術(shù)后4周以及8周時，B、C、D組的NCV均顯著優(yōu)于A組（P0