杜仲提取物的致突變實(shí)驗(yàn)研究

1、杜仲提取物的致突變實(shí)驗(yàn)研究        摘要】  目的研究杜仲提取物的致突變性，為其應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠灌服不同劑量的杜仲提取物水溶液，檢測(cè)小鼠骨髓微核率、精子畸形率及采用鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)(Ames實(shí)驗(yàn))進(jìn)行觀察。結(jié)果杜仲提取物水溶液對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率無影響；對(duì)小鼠精子無畸形誘變作用；對(duì)供試菌株無致突變作用。結(jié)論杜仲提取物對(duì)受試物未見有明顯的致突變作用。 【關(guān)鍵詞】  杜仲 微核 致突變實(shí)驗(yàn)杜仲Eucommia ulmoides Oliv在我國的應(yīng)用悠久，近幾年

2、我國學(xué)者在杜仲的生物學(xué)、化學(xué)成分、生理生化等方面做了許多研究，董娟娥等1報(bào)道了杜仲籽油具有降壓、降血脂及抗腫瘤等作用。唐建軍等2報(bào)道：杜仲含有豐富的維生素E和-胡蘿卜素，有延緩衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力作用。為更好地開發(fā)利用杜仲，我們?cè)谔剿鲝埣医绠a(chǎn)杜仲提取物（簡(jiǎn)稱杜仲提取物）的亞慢性毒作用3的基礎(chǔ)上，對(duì)其致突變作用進(jìn)行了研究，旨在為其應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。1  材 料1.1  藥品與動(dòng)物杜仲提取物主要成分綠原酸，張家界恒興生物科技公司提供。昆明種小鼠購于湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，批號(hào)：990218 。注射用環(huán)磷酰胺：上海華聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)：030504。疊氮鈉（NaN3）：

3、上海試劑一廠，批號(hào)：990706。鼠傷寒沙門氏菌株（TA97，TA98，TA100，TA102）購于農(nóng)科院獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。1.2  主要儀器ES-C300A天平：湘儀天平儀器廠。組織勻漿器：北京玻璃儀器廠。2  方法與結(jié)果2.1  小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE）微核試驗(yàn)小鼠60只，體重（28±2）g，雌雄各半，隨機(jī)分為6組。杜仲提取物稀釋液設(shè)為1.28，0.64，0.32，0.16 g/kg 4個(gè)劑量組，陰性對(duì)照為蒸餾水，兩次灌胃給予受試物。陽性對(duì)照為環(huán)磷酰胺（CP）40 mg/kg體重，兩次腹腔注射間隔24 h，第2次給受試物后6 h，頸椎脫臼處死動(dòng)物

4、。按國家標(biāo)準(zhǔn)4取骨髓制片，每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1 000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，微核率以百分率表示。結(jié)果見表1。表1  杜仲提取物對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率實(shí)驗(yàn)（略）與陰性對(duì)照組比較，*P0.01，P0.05；n=10    由表1可知，實(shí)驗(yàn)組雌、雄小鼠微核發(fā)生率為0.39%0.43%，陰性對(duì)照組為0.43%，陽性對(duì)照組為4.38%，實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組比較，微核發(fā)生率均無差異顯著性（P>0.05），陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較，差異性顯著（P<0.01）。2.2  杜仲提取物對(duì)小鼠精子畸形的試驗(yàn) 雄性小鼠60只，體重（3035）g，隨機(jī)分為6組，實(shí)

5、驗(yàn)組劑量為1.28，0.64，0.32，0.16 g/kg體重與陰性對(duì)照組（生理鹽水），經(jīng)口腔給予。陽性對(duì)照組用環(huán)磷酰胺40 mg/kg體重腹腔注射。各組1次/d，連續(xù)5 d給予受試物。于首次給藥后第35天，頸椎脫臼處死小鼠，按紀(jì)云晶5方法制片。每組計(jì)數(shù)2 000個(gè)精子，其畸形率。結(jié)果見表2。表2  杜仲提取物對(duì)小鼠精子畸形的影響（略）與陰性對(duì)照組比較，*P0.01，P0.05；n=10    由表2可知，實(shí)驗(yàn)組小鼠的精子畸形率為7.6%8.3%，陰性對(duì)照組為7.8% ，陽性對(duì)照組為71.8%，實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組比較差異無顯著性（P>0.05），陽

6、性對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01）。1         2.3  Ames試驗(yàn)按Ames標(biāo)準(zhǔn)方法6對(duì)鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進(jìn)行增菌培養(yǎng)后進(jìn)行鑒定，所采用的4個(gè)菌株特性均與Ames試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)相符。在加與不加活化物的條件下進(jìn)行平板摻入法試驗(yàn)。杜仲提取物用雙蒸餾水稀釋為 500，400，300，200 g/皿4個(gè)劑量組，陽性對(duì)照為疊氮鈉（NaN3）10 g/皿，陰性對(duì)照為雙蒸餾水100g/皿，每個(gè)劑量組重復(fù)做2個(gè)平皿，結(jié)果見表3。表3  杜

7、仲提取物對(duì)TA平均回變菌落數(shù)的影響（略）+S9:加S9活化物，-S9:不加S9活化物    表3可知，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統(tǒng)，其回變菌落數(shù)與陰性對(duì)照組（雙蒸餾水）比較，均無高于自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，而陽性對(duì)照組菌落數(shù)均高于陰性對(duì)照組的2倍以上。3  討論    不同劑量杜仲提取物對(duì)小鼠PCE的試驗(yàn)表明，杜仲提取物稀釋液對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率未見明顯影響（P<0.01）。說明本品對(duì)細(xì)胞染色體無誘變作用。對(duì)小鼠精子畸形的影響試驗(yàn)，結(jié)果表明，杜仲提取物稀釋液對(duì)小鼠精子畸形發(fā)生率未見明顯影響（P<0.01），說明本品對(duì)小鼠精子無畸形誘變作用，戚向陽等7用杜仲粉對(duì)小鼠精子進(jìn)行的藥理作用研究結(jié)果表明，杜仲粉對(duì)小鼠精子不產(chǎn)生畸變作用，其結(jié)果與本研究結(jié)果一致。    采用鼠傷寒沙門氏突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102進(jìn)行回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，結(jié)果表明，不同劑量的杜仲提取物，無論加或不加S9活化系統(tǒng)，其回變菌落數(shù)與陰性對(duì)照組（雙蒸餾水）比