ABO 血型鑒定操作規(guī)程教案資料

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。ABO 血型鑒定操作規(guī)程-1.0原理ABO血型鑒定操作規(guī)程2.03.04.05.05.15.26.06.16.26.36.46.56.66.77.07.1根據(jù)紅細胞上和血清（或血漿）中有無A抗原和（或）B抗原及其抗體，將血型分為A型、B型、AB型及O型。可利用紅細胞凝集試驗，通過正、反定型鑒定ABO血型。正定型正定是指用已知抗-A、抗-B血清來檢測受檢紅細胞上有無相應(yīng)的A抗原和（或）B抗原；反定型反定是指用已知A1型、B型紅細胞來檢測受檢血清（或血漿）中有無相應(yīng)的抗-A和（或）抗-B。原始樣品要求5mL

2、靜脈全血。樣品容器和添加劑真空試管，EDTA.K2抗凝/普通試管，不抗凝。檢測環(huán)境要求溫度：1827，濕度：30%70%。所需材料和設(shè)備設(shè)備普通離心機、免疫血液學(xué)離心機、顯微鏡、恒溫水箱、定時器。材料抗-A、抗-B血清、ABO標(biāo)準(zhǔn)抗原紅細胞試劑、移液器、加樣吸頭、生理鹽水（NS）、干凈空試管。檢測操作過程將受檢標(biāo)本以1000g離心5min，使標(biāo)本血漿/血清與紅細胞分離，吸取紅細胞，用NS洗滌三次后，配成3%5%紅細胞懸液。取6支小試管，分別標(biāo)記“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。在“-A”、“-B”管中分別加入抗-A和抗-B血清各50L，其余管加入受檢血漿/血清各100

3、L。在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受檢者3%5%紅細胞懸液各50L，搖勻。在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分別加入A1、B、O紅細胞試劑各50L，搖勻。1000g離心15sec，輕輕懸浮紅細胞，觀察結(jié)果并記錄。根據(jù)實驗需要，除室溫下觀察結(jié)果外，另可增加在4、37下觀察結(jié)果。結(jié)果判斷凝集強度判斷標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1凝集強度判斷標(biāo)準(zhǔn)表凝集強度4+3+2+1+-或MFpHH判斷標(biāo)準(zhǔn)紅細胞凝集成一大塊，液體背景透明，無游離紅細胞數(shù)個大凝集塊，液體背景透明，無游離紅細胞有很多小凝集塊，液體背景透明，無游離紅細胞有許多很小的凝集塊，肉眼可見，液體背景不透明，有游離紅細胞微小的凝集塊，肉眼很難看清，需

4、要用顯微鏡觀察無凝集，無溶血，全是游離紅細胞混合凝集外觀，鏡下可見少數(shù)紅細胞凝集，而大部分是游離紅細胞部分溶血完全溶血7.2ABO血型結(jié)果判斷見表2：正定型抗-A血清血抗-B血清血Ac表22血型結(jié)果判斷表反定型定BcOc自身對照血型ABOAB7.37.48.09.010.0注：“”表示凝集或溶血；“”表示不凝集。正反定型不一致、ABO抗原減弱、抗-A或抗-B減弱、O細胞凝集時，排除人為操作錯誤后，執(zhí)行疑難血型鑒定操作規(guī)程進行最終確認。根據(jù)上述判斷標(biāo)準(zhǔn)，作出結(jié)論并記錄在免疫血液學(xué)檢查實驗記錄。結(jié)果報告根據(jù)實驗結(jié)果，打印免疫血液學(xué)實驗報告。報告的形式為：A型/B型/O型/AB型。實驗結(jié)果解釋實驗結(jié)

5、果為A型、B型、AB型，O型，說明受檢者ABO血型分別屬于A型、B型、AB型，O型。紅細胞上分別有A抗原、B抗原、皆有A抗原和B抗原、皆無A抗原和B抗原；血漿中分別有抗-B、抗-A、抗-AB、皆無抗-A(B)。質(zhì)量控制當(dāng)受檢標(biāo)本與正、反定型試劑反應(yīng)，凝集強度少于2+時，取標(biāo)準(zhǔn)抗-A、抗-B或A、B、O紅細胞與正、反定型試劑反應(yīng)，以驗證試劑效能是否下降。11.011.111.211.311.411.511.611.711.8注意事項試管必須清潔、干燥，防止溶血。加樣順序一般先加血清，再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。分型血清效價太低，抗原抗體比例不適當(dāng)，可使反應(yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。用立

6、即試管法可能不能測出亞型（如AX），需延長作用時間。觀察結(jié)果時既要看有無凝集，更要注意凝集強度，此有助于亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。各種原因引起的紅細胞溶解，容易誤判為不凝集；部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體，也會造成不凝集。受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性減弱（多見于白血病或惡性腫瘤）以及類B或cisAB等，易被誤判為不凝集。ABO正反定型不一致常見原因11.8.1分型血清效價太低，親和力不強。11.8.2漏加、錯加試劑或標(biāo)本，試劑被污染或失效。11.8.3紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯誤判為陰性結(jié)果。11.8.4受檢者紅細胞上抗原位點過少（如

7、亞型）或抗原性減弱（多見于白血病或惡性腫瘤）以及類B或cisAB等。11.8.5受檢者血清蛋白紊亂（高球蛋白血癥）或?qū)嶒灉囟冗^高，常引起細胞呈緡錢狀排列。11.8.6受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A或抗-B，如丙種球蛋白缺乏癥。11.8.7各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集；部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。11.8.8由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11.8.9血清中有意外抗體，如抗-I等，常干擾定型。11.8.10患者近期曾輸過異型血，使其血液標(biāo)本成為不同型別的紅細胞混合物，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。11.8.11嵌合體血型，體內(nèi)有兩群紅細胞

8、，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。11.8.12獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細胞可獲得“類B”的活性。11.8.13藥物等因素的影響：藥物、右旋糖酐及靜脈注射某些造影劑聚集而類似凝集。11.8.14老年人血清中抗體水平大幅度下降。11.8.15新生兒尚未形成ABO同種抗體，故三個月內(nèi)的新生兒只要求做正定型來確定血型。11.9紅細胞在保存期內(nèi)會逐漸變?yōu)榘导t色，只要其未被細菌污染，抗原性不受任何影響。11.1012.0每次使用前，檢查試劑有無明顯溶血發(fā)生，明顯溶血者棄掉。標(biāo)本保存不當(dāng)、試劑過期變質(zhì)、試劑被污染、不同批號的試劑混用、離心力或離心時間不符合要求、孵育時間不準(zhǔn)確、孵育溫

9、度未達試劑實驗要求等均可出現(xiàn)較大的變異。相關(guān)文件單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑說明書ABO標(biāo)準(zhǔn)抗原紅細胞試劑說明書全國臨床檢驗操作規(guī)程（第三版）臨床輸血技術(shù)規(guī)范中國輸血技術(shù)操作規(guī)范（1997年版）為什么ABO血型鑒定要正、反定型都做？原因如下：正定型屬于細胞抗原定型，反定型屬于血清抗體定型。ABO血型鑒定必須正、反定型都要做，有相互印證的作用。因為單做正定型來鑒定ABO血型，在某些情況下不可靠，易造成ABO血型誤判。如：1.抗-A、抗-B血清效價低時（試劑失效、被污染或被稀釋），可使正定型反應(yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。則A、B、AB型會誤判為O型。2.受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性

10、減弱（多見于白血病或惡性腫瘤），可使正定型反應(yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。則A、B、AB型會誤判為O型。3.各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集；部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體?？墒拐ㄐ头磻?yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。則A、B、AB型會誤判為O型。4.由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集。則A、B、O型會誤判為AB型。5.獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細胞可獲得“類B”的活性。則A型會誤判為AB型。ABO血型誤判，對于臨床輸血來說風(fēng)險極大，會造成ABO血型異型輸血，易引起急性溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生，對患者的生命安全造成威脅。ABO血型鑒定要正、反定型都做的法規(guī)支持：1.全國臨