腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義培訓(xùn)課件

1、引言世界多發(fā)性硬化日由國際多發(fā)性硬化聯(lián)盟于2009年5月27日建立，以喚起全世界對多發(fā)性硬化癥的關(guān)注，推動(dòng)相關(guān)研究和醫(yī)療進(jìn)展，并約定每年五月的最后一個(gè)星期三為世界多發(fā)性硬化日。今年的世界多發(fā)性硬化日是5月25日，為第八個(gè)世界多發(fā)性硬化日。 1腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022引言世界多發(fā)性硬化日由國際多發(fā)性硬化聯(lián)盟于2009年5月27然而多發(fā)性硬化早在19世紀(jì)中期即已經(jīng)有記載， 是中世紀(jì)的神秘疾病 是詛咒？ 是天譴？引言2腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022然而多發(fā)性硬化早在19世紀(jì)中期即已經(jīng)有記載，引言2腦脊液寡克1、什么是多發(fā)性硬化癥？ 多發(fā)性硬化

2、（multiple sclerosis，MS）是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變?yōu)樘攸c(diǎn)的自身免疫性疾病，病灶的空間多發(fā)性、病程的時(shí)間多發(fā)性是其主要臨床特點(diǎn)。臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，中樞神經(jīng)系統(tǒng)均可受累（腦、脊髓、視神經(jīng)），我國以視神經(jīng)、脊髓損害多見。病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，可能與自身免疫、遺傳、環(huán)境因素、病毒感染、個(gè)體易感等相關(guān)。3腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20221、什么是多發(fā)性硬化癥？ 多發(fā)性硬化（multiple sc2、多發(fā)性硬化癥的全球分布情況： 流行病資料表明，接近地球兩極地帶，特別是北半球北部高緯度地帶的國家，本病發(fā)病率較高。多發(fā)性硬化癥（MS）高危地區(qū)包括美國北部、

3、加拿大、冰島、英國、北歐、澳洲的塔斯馬尼亞島和新西蘭南部，患病率為40/10萬或更高。赤道國家發(fā)病率小于1/10萬，亞洲和非洲國家發(fā)病率較低，約為5/10萬。我國屬于低發(fā)病區(qū)，與日本相似。 4腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20222、多發(fā)性硬化癥的全球分布情況：4腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬3、多發(fā)性硬化癥的國內(nèi)情況：5腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20223、多發(fā)性硬化癥的國內(nèi)情況：5腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的6腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20226腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022多發(fā)性硬化易發(fā)生于15到40歲

4、的青壯年人群，而且女性患者居多，全球目前約有230萬名多發(fā)性硬化患者，國內(nèi)約有5萬確診患者。北京醫(yī)院神經(jīng)科主任醫(yī)師許賢豪指出，多發(fā)性硬化癥由于不常見且癥狀多樣和隱蔽，八成就醫(yī)患者曾被誤診，一些患者發(fā)展到全身癱瘓仍未被確診。 7腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20227腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022 我國在20世紀(jì)50年代，認(rèn)為多發(fā)性硬化癥是罕見病，僅有個(gè)別報(bào)道。但20世紀(jì)70年代以后，國內(nèi)發(fā)病率有增高趨勢。近年來全國各地報(bào)道日益增加，并有大宗病例報(bào)道，已成為神經(jīng)系統(tǒng)較常見的疾病，采用傳統(tǒng)的診斷方法往往不能做出早期診斷而延誤治療。腦脊液寡克隆區(qū)帶不僅對M

5、S診斷特異性較高，而且敏感性強(qiáng)，是MS的重要實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)，使MS得早期診斷，早期治療成為現(xiàn)實(shí)。8腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022 我國在20世紀(jì)50年代，認(rèn)為多發(fā)性硬化癥是罕見病 4、什么是寡克隆區(qū)帶？ 正常生理狀態(tài)下，人體內(nèi)含有很多克隆株的漿細(xì)胞所合成的免疫球蛋白，進(jìn)行電泳時(shí)r- 球蛋白區(qū)域會(huì)形成均勻的連續(xù)的區(qū)帶，即多克隆免疫球蛋白區(qū)帶。而在病理免疫狀態(tài)下人體的幾個(gè)克隆株漿細(xì)胞會(huì)發(fā)生異常增生，其所合成的免疫球蛋白在電泳時(shí)會(huì)在r-球蛋白區(qū)域可見2條或2條以上分開的、不均一、比較狹窄、不連續(xù)的清晰蛋白區(qū)帶，稱之為寡克隆區(qū)帶（OCB）。9腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷

6、意義10/3/2022 4、什么是寡克隆區(qū)帶？ 正常生理狀態(tài)下，人1960年1971年1979年Karcher，van Sande和 Lowenthal 用瓊脂糖凝膠電泳法從亞急性硬化性全腦炎患者的CSF-球蛋白中分離出幾個(gè)光密度不同的條帶。Kutt也發(fā)現(xiàn)MS患者CSF電泳后在靠近陰極端形成狹窄而不連續(xù)區(qū)帶。由Link證實(shí)為OCB IgG區(qū)帶。Thompson 報(bào)道CSF有非典型淋巴細(xì)胞和典型的漿細(xì)胞的多發(fā)性硬化（MS）患者在CSF電泳時(shí)均檢出了OCB。 1959年5、寡克隆區(qū)帶的發(fā)現(xiàn)10腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20221960年1971年1979年Karcher，va

7、n San6、寡克隆區(qū)帶的產(chǎn)生機(jī)制 OCB是數(shù)個(gè)B細(xì)胞系株(克隆) 在 CNS 局部產(chǎn)生的特殊抗體，因此關(guān)于OCB產(chǎn)生的機(jī)制 KAUSSIS 等提出是由于內(nèi)源性B細(xì)胞遺傳的異常，選擇性地使某些B細(xì)胞克隆增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄，引起增殖并導(dǎo)致免疫球蛋白失衡。OCB的產(chǎn)生有賴于存在限制異質(zhì)性 Ig 的合成，反映出 CNS 內(nèi)部對某些微生物和自身抗原的隔離免疫應(yīng)答?？梢?，OCB是針對 CNS 內(nèi)部持續(xù)抗原刺激的一種特異反應(yīng)，CSF中 OCB 陽性高度提示在CNS 內(nèi)有Ig的異常合成，存在鞘內(nèi)局部免疫應(yīng)答。OCB多數(shù)是IgG，很少是IgA或IgM。11腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20226、寡克

8、隆區(qū)帶的產(chǎn)生機(jī)制 OCB是數(shù)個(gè)B細(xì)胞系株(7、寡克隆區(qū)帶的檢測方法 臨床主要采用主要采用瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦電泳三類方法分離蛋白。瓊脂糖凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳等電聚焦電泳 瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，孔徑較大，有利于蛋白質(zhì)的分離和轉(zhuǎn)膜，所以更適宜實(shí)驗(yàn)室推廣使用 由于聚丙烯酰胺凝膠電泳制膠復(fù)雜，且對人體有毒而使應(yīng)用受限等電聚焦是利用蛋白質(zhì)等兩性分子等電點(diǎn)的不同，在穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度中將蛋白質(zhì)區(qū)分出不同條帶，是當(dāng)前分辨率最高的電泳技術(shù)。12腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20227、寡克隆區(qū)帶的檢測方法 臨床主要采用主要采用瓊脂采用電泳法分離蛋白后，

9、再采用考馬斯亮藍(lán)、硝酸銀、過氧化物酶或親和素-生物素復(fù)合物等染色方法使蛋白條帶顯色，得出OCB的染色型，然后進(jìn)行分析。13腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022采用電泳法分離蛋白后，再采用考馬斯亮藍(lán)、硝酸銀、過氧化物酶或8、寡克隆區(qū)帶的結(jié)果判斷14腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20228、寡克隆區(qū)帶的結(jié)果判斷14腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診正常情況下，CSF中Ig含量極少。病理情況下，CSF中 r-球蛋白（主要是IgG）病理性增高主要有以下三種情況：以往國內(nèi)相關(guān)研究僅檢測CSF中的OCB，由于血腦屏障的破壞，可導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性。因此，配對分析CSF和血清中

10、的 OCB，得到CSF-OCB的結(jié)果，可排除血腦屏障的影響。（1）血腦屏障損害，血源性IgG進(jìn)入 CSF（3）既有血腦屏障損害，又有鞘內(nèi)IgG自身合成（2）CNS 內(nèi)源性合成增加，不依賴血清IgG 水平變化 8.1寡克隆區(qū)帶結(jié)果判斷配對分析15腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022正常情況下，CSF中Ig含量極少。病理情況下，CSF中 r- 8.2寡克隆區(qū)帶結(jié)果判斷結(jié)果描述 歐洲專家組推薦以下5種類型描述OCB結(jié)果： 1.血清與CSF均未檢出OCB2.局限于CSF中的OCB，血清中未見3.除CSF與血清中共有的OCB外，CSF中還存在特有區(qū)帶4.CSF與血清中區(qū)帶相同5.CS

11、F 和血清中的單克隆區(qū)帶正常提示存在IgG鞘內(nèi)合成顯示同時(shí)存在血腦屏障損傷及IgG鞘內(nèi)合成提示存在血腦屏障損傷提示副蛋白血癥16腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022 8.2寡克隆區(qū)帶結(jié)果判斷結(jié)果描述 1.血清與 雖然(b) 、(c) 、(d) 和(e) 圖均提示產(chǎn)生了體液免疫反應(yīng)，但僅 (b) 和 (c) 圖提示存在 IgG 鞘內(nèi)合成，是反映CNS 病變的重要標(biāo)志，可以判斷為陽性結(jié)果。17腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022 雖然(b) 、(c) 、(d) 和(e) 圖均提示9、腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義歐美學(xué)者報(bào)道確診MS 患者OCB 陽性

12、率為90%-95%，但國內(nèi)報(bào)道MS患者OCB陽性率多為30%-60%，日本學(xué)者報(bào)道MS患者陽性率為36%，韓國學(xué)者報(bào)道韓國MS患者陽性率為31.6。這些研究結(jié)果提示亞洲MS人群OCB陽性率均明顯低于西方國家(95)。18腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/20229、腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義歐美學(xué)者報(bào)道確診19腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/202219腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022目前，OCB 仍是 MS 實(shí)驗(yàn)室檢測中應(yīng)用最為廣泛的生物學(xué)指標(biāo)。傳統(tǒng)的腦脊液常規(guī)、生化檢查對 MS 的輔助診斷缺乏特異性。腦脊液 OCB 陽性有助

13、于 MS 的診斷，雖然非 MS 特異性改變，其他炎癥性或非炎癥性疾病，例如副腫瘤綜合征(NPS)、SLE、神經(jīng)白塞病、干燥綜合征(SS)、神經(jīng)梅毒、HIV感染和神經(jīng)萊姆病等亦可呈陽性,但其敏感性和特異性較傳統(tǒng)的 CSF 檢查高，對 MS 早期診斷及療效觀察有重要的臨床價(jià)值。20腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/2022目前，OCB 仍是 MS 實(shí)驗(yàn)室檢測中應(yīng)用最為廣泛的生物學(xué)指此外，寡克隆區(qū)帶還有助于判斷預(yù)后，腦脊液寡克隆區(qū)帶陽性的臨床孤立綜合征(CIS)患者較陰性者更易進(jìn)展為多發(fā)性硬化。OCB 反映了 MS 患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)IgG 發(fā)生質(zhì)的改變，是 MS 最常見的免疫學(xué)異常表現(xiàn)，也是 MS 最有價(jià)值的單項(xiàng)檢測，1983 年以來已被國際 MS 委員會(huì)作為 MS 診斷標(biāo)準(zhǔn)中的重要組成部分。21腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義10/3/202221腦脊液寡克隆