實驗四 酵母菌和霉菌的形態(tài)觀察.doc

實驗四 酵母菌和霉菌的形態(tài)觀察一、目的要求1、觀察酵母菌、老菌的個全形態(tài)以及它們之間的區(qū)別。2、學(xué)會用水浸法觀察酵母菌和霉菌的技術(shù)。3、了解酵母菌和霉菌細(xì)胞的構(gòu)造和繁殖方式的特點。二、實驗材料1、接種針、接種杯、酒精杯、載玻片、蓋玻片、吸管。2、0.1%美藍(lán)液、乳酸-石炭酸液（配方見附錄）。3、菌種 啤酒酵母、假絲酵母、黑根霉、毛霉、青霉、木霉、曲霉。三、方法步驟（一）酵母菌的形態(tài)觀察酵終菌是單細(xì)胞真核核微生物，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)有明顯分化，個體比細(xì)菌大得多，有的能形成假菌絲。繁殖方式較復(fù)雜，無性繁殖以出芽生殖為主，有性繁殖是通過接合產(chǎn)生子囊孢子。1、酵母菌的形態(tài)與出芽生殖的觀察 在載片上滴一滴蒸餾水，以無菌操作，用接種環(huán)挑取少許啤酒酵母置于載片上蒸餾水中，取一塊蓋片，小心地將蓋玻片一端與菌液接觸，然后緩慢地將蓋玻片放下；這樣可避免產(chǎn)生氣泡。先用低倍鏡觀察，再用高倍鏡觀察酵母細(xì)胞的形狀、大小、構(gòu)造、內(nèi)含物及出芽方式。2、子囊孢子的觀察 將啤酒酵母接種于麥芽汁液體培養(yǎng)中，于28-30培養(yǎng)24小時，連續(xù)傳代3-4次，最后轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)子囊孢子的培養(yǎng)基上（也可用肉法蛋白胨培養(yǎng)基）。25-28培養(yǎng)3天左右，涂片染色（按芽孢染色法）觀察子囊孢子開關(guān)和特點，并注意每一個子囊內(nèi)的孢子數(shù)等。3、假絲酵母觀察 用劃線法將假絲酵母接種在麥芽汁平板上。在劃線部分加蓋玻于25-30培養(yǎng)3天先觀察菌落邊緣，再取下蓋玻片，在顯微鏡下觀察呈樹枝狀分枝的假菌絲細(xì)胞的形狀，或?qū)⒚笊w打開，直接將培養(yǎng)皿放在載物臺上，在低倍鏡下觀察。4、酵母菌菌落觀察 取啤酒酵母、假絲酵母、園酵母以三點點植法接種于麥芽汁平板上，于28-30墳3天。觀察菌落表面、高度、邊緣、質(zhì)地和顏色等。5、酵母菌死活的檢查 在載片上加一滴0.1%美藍(lán)，把酵母培養(yǎng)液滴加在美藍(lán)液上，加蓋玻片觀察，死細(xì)胞為蘭色，活細(xì)胞無色。（二）霉菌形態(tài)觀察霉菌形態(tài)比細(xì)菌、酵母菌復(fù)雜，個體比較大，具有分枝的菌絲體和分化的繁殖器官。在觀察時要注意細(xì)胞的大小，菌絲構(gòu)造和繁殖方式。菌絲體有無隔膜，營養(yǎng)菌絲有無假根，無性孢子是怎樣著生在孢子梗上及有性孢子如何生成。由于霉菌菌絲較粗大，孢子很容易飛出，如果放在水中觀察時容易收縮變形，所以在制標(biāo)本時不用水，而用乳酸-石炭酸溶液，使細(xì)胞不致變形，并有殺菌作用。1、取培養(yǎng)有青老、木霉、毛霉、曲霉的平皿，挑取一團(tuán)菌絲，置于滴有一滴乳酸-石炭酸液的載片上，加蓋玻片，由于霉菌是由菌絲組成的，許多菌絲交錯在一起形成菌絲體。在高倍鏡下觀察菌絲分隔情況，分成孢子著生情況（要求辨認(rèn)分生孢子子梗、頂囊、小梗及分生孢子）。2、取一培養(yǎng)有根霉的平皿觀察假根、匍匐枝、孢子囊柄及孢子囊。注意假根著生情況。挑取少量菌絲，置于滴有一滴乳酸-石炭酸液的載玻上，加蓋片。在高倍鏡下觀察孢子囊柄，孢子囊及子囊孢子。3、取一培養(yǎng)好的各種老菌菌落的平皿，注意觀察菌落形態(tài)，表面質(zhì)地，顏色及背面的特征。注意霉菌菌落與細(xì)菌、酵母菌落有何區(qū)別？4、觀察紅曲霉的子囊果、子囊及子囊孢子（示范）。5、觀察犁頭霉的結(jié)合孢子、保護(hù)絲（示范）。6、觀察白地霉的裂生孢