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熒光定量PCR技術(shù)講座：理論基礎(chǔ)、引物及探針設(shè)計、體系優(yōu)化、實驗方案、數(shù)據(jù)分析、污染防控熒光定量PCR技術(shù)講座：理論基礎(chǔ)、引物及探針設(shè)計、體系優(yōu)化、實驗方案、數(shù)據(jù)分析、污染防控 CT LogX0與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，通過已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線，根據(jù)未知樣品Ct值，就可以在標準曲線上計算出未知樣品初始模板量。 該方法的前提條件是目的基因和內(nèi)參基因的擴增效率相同且都為1，在試驗開始前必須分別對目的基因和內(nèi)參基因作標準曲線，看兩者擴增效率的差別，假如兩者擴增效率之間的差異小于，就可以用該方法分析。而且在接下來的實驗中，無需再做標準品。 該方法要求嚴格的重復，因為CT值的差異只要有很小的變化，測得的結(jié)果就會有很大的差別。 該方法特別適合于樣品量不大，但是檢測的基因種類很多的情況。 探針中GC含量的差異對定量PCR反應效率的影響定量PCR反應體系普通PCR結(jié)果電泳圖添加熒光基團后PCR結(jié)果電泳圖優(yōu)化后的Taqman探針體系實驗結(jié)果，定量PCR實驗方案熒光染料法Taqman探針法雙標準曲線法雙標準曲線法同一cDNA樣品的三個重復通過定量PCR檢測，測得該陰性樣品中含有227個初始模板。假如這個污染屬于是頑固的未知污染，可以用正

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